2016年上海市普陀区手足口病病原谱及EV71和Cox A16病毒分离株VP1基因特征分析

目的了解上海市普陀区手足口病病原学特点,分析肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Cox A16) VP1基因的特征,为手足口病的防治提供科学依据。方法收集2016年上海市普陀区手足口病患者的咽拭子标本,采用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)进行核酸检测,并用RD细胞对核酸检测结果为EV71和Cox A16的标本进行病毒分离,收获的阳性分离株利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增病毒VP1区核苷酸序列,测序后分析其同源性并构建系统进化树。结果 2016年上海市普陀区共检测234份手足口病标本,阳性标本138份,阳性率为58.97%(138/234)。其中EV71阳性率为11.54%(27/234)、Cox A16阳性率为18.80%(44/234)、Cox A6阳性率为27.78%(65/234)和其他肠道病毒阳性率0.85%(2/234)。病毒分离培养阳性株包括10株EV71和20株Cox A16,10株EV71分离株均为C4a型,VP1区核苷酸和氨基酸序列同源性分别为93.6%～99.9%和98.7%～100.0%;20株Cox A16分离株均为B1b亚型,VP1区核苷酸和氨基酸序列同源性分别为93.4%～100.0%和98.2%～100.0%。结论 2016年上海市普陀区手足口病呈现Cox A6、EV71和Cox A16共同流行,而EV71流行株属于C4a亚型,Cox A16流行株属于B1b亚型,均与国内大部分地方的流行株基因亚型基本一致。

EV71-2A突变质粒的构建及体内外功能初探

目的构建pc DNA3.1-EV71-2A的突变质粒(EV71-2Amut),并对其功能进行检测,为进一步研究肠道病毒71型(Enterovirus type 71,EV71)2A蛋白酶的活性位点及其生物学功能奠定实验基础。方法利用聚合酶链式反应(PCR)定点诱变技术,定点突变编码EV71-2A第21His、39Asp和110Cys氨基酸的位点,构建EV71-2Amut,并测序鉴定。将所构建突变质粒与巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)启动子介导的真核细胞荧光素酶报告基因(pRL-CMV)共转染人横纹肌肉瘤细胞(RD细胞),通过观察转染组的EV71-2Apro和EV71-2Amut对pRL-CMV荧光强度的影响,判断突变质粒的细胞内酶活性。将EV71-2Apro或EV71-2Amut质粒转染BALB/c小鼠股四头肌,用RT-PCR检测局部相应质粒的mRNA水平,并观察局部肌肉组织的病理变化。结果构建的突变质粒EV71-2Amut经测序及比对,结果与预计突变位点一致;在细胞学水平检测到的pRL-CMV荧光强度,EV71-2Amut组比EV71-2Apro组显著增高(P<0.05);小鼠股四头肌注射局部均检出EV71-2Apro和EV71-2Amut的mRNA表达,且与EV71-2Apro组相比,EV71-2Amut注射组的肌肉组织的肌肉凝固性坏死、炎症反应病理损伤较轻。结论成功构建了突变的EV71-2Amut质粒,为研究EV71-2A蛋白酶的生物学功能奠定了实验基础。

危重型EV71型手足口病发生的危险因素调查及护理对策

目的探讨危重型EV71型手足口病发生的危险因素,提出相应的护理对策,为临床诊治及护理提供参考。方法选取2013年12月至2017年12月我院儿科收治的595例EV71型手足口病患儿,其中非危重型557例患儿作为非危重组,危重型38例患儿作为危重组,分析危重型患儿的危险因素并制定护理对策。结果多因素logistic回归分析显示不典型皮疹、心率异常、有肢体震颤、有嗜睡萎靡、胸片异常、血糖升高是危重型EV71型手足口病发生的独立危险因素(P<0.05)。结论对于EV71型手足口病患儿,如存在不典型皮疹、心率及胸片异常、神经系统异常症状、血糖升高,提示患儿病情有进展为危重型,应尽早针对以上危险因素给予干预性护理,以改善患儿预后。

EV71型危重症手足口病患儿凝血功能的变化及临床意义

目的研究EV71型危重症手足口病(HFMD)患儿凝血功能的变化,并分析其临床意义。方法收集2016年2月至2017年3月我院收治的80例EV71型危重症HFMD患儿纳入重症组,另取同期80例无合并症EV71型HFMD患儿与80例经治疗恢复健康的EV71型HFMD患儿分别纳入普通组与对照组,比较3组各时间段血小板计数、血乳酸、白细胞计数(WBC)、血糖与凝血功能指标。结果重症组血乳酸、WBC及血糖水平均明显高于普通组与对照组(P<0.05);重症组与普通组经过5 d治疗之后,血小板计数均明显降低(P<0.05);重症组治疗第1 d、第5 d血小板计数均明显高于普通组与对照组(P<0.05);3组凝血功能指标PT、TT、a PTT及Fbg比较无明显差异(P>0.05);重症组1例(1.25%)产生凝血功能异常(早期高凝、晚期低凝)。结论 EV71型危重症HFMD患儿高乳酸血症、高血糖并发症发生机率高,炎症反应严重,能促使血小板黏附、聚集,危重症HFMD患儿PT、TT、a PTT、Fbg异常,对其进行监测可为合理诊治提供一定参考。

循证护理在EV71型重症手足口病并脑炎患儿中的应用

目的探讨循证护理在EV71型重症手足口病合并脑炎患儿中的应用效果。方法选取2015年3月~2016年3月我院EV71型重症手足口病合并脑炎患儿140例,随机分为观察组和对照组,两组患儿均进行常规临床治疗,对照组采用常规护理措施,对照组采用循证护理方法 ,比较两组患儿总有效率及住院时间。结果观察组患儿的总有效率(94.29%)高于对照组(74.29%),住院时间[(8.5±2.5)d]短于对照组[(12.0±3.0)d],差异有统计学意义(P<0.01)。结论在EV71型重症手足口病合并脑炎患儿的治疗中使用循证护理干预能够明显提高治疗效果,加快患者康复时间。

肠道病毒EV71型手足口病的临床观察及护理

目的总结98例肠道病毒EV71型手足口病患儿的病情观察及护理要点，以利早期发现重症病例，降低患儿的病死率，预防并发症。方法对收治的98例肠道病毒EV71型手足口病患儿，其中病情较重和危重的16例早期转院治疗，对82例予积极治疗和精心护理。结果82例患儿痊愈出院，无发生医院感染及死亡病例。结论系统的病情观察及精心的护理，可防止本病的传播，早期诊断、早期治疗可提高治愈率，防止并发症的发生。

EV71感染的湿热毒盛型手足口病患儿脑脊液Th1、Th2细胞因子变化及临床意义

目的:探讨EV71感染的湿热毒盛型手足口病患儿脑脊液Th1、Th2细胞因子的变化及临床意义。方法:选取我院儿科收治的EV71病毒感染的手足口病患儿80例,根据疾病进展不同分为普通型组及湿热毒盛型重症组,并选取20例健康儿童做对照组。比较各组患儿皮质醇(COR)、β-内啡肽(β-EP)、T淋巴细胞CD4+及CD8+、Th1及Th2细胞分泌的干扰素-r(IFN-r)、白介素(IL-2、IL-6、IL-10)等指标变化关系,其数据结果应用统计学软件SPSS 17.0处理。结果:各组相比较,Th1及Th2细胞因子水平与手足口病患儿病情程度成正相关,表现为:湿热毒盛型组患儿COR、β-EP、IFN-r、IL-2、IL-6、IL-10水平明显高于普通型组(P<0.05),湿热毒盛型组免疫系统的CD4+及CD8+水平较普通组低(P<0.05),其结果均有统计学意义。结论:随着EV71病毒对患儿感染程度加重,机体中脑脊液Th1、Th2细胞因子及各种免疫因子均表现出特异性表现。湿热毒盛型手足口病患儿Th1、Th2细胞因子水平明显高于普通型组,病毒的刺激损害程度均较高。手足口病患儿脑脊液Th1、Th2细胞因子敏感程度及诊断价值高,可作为临床疾病分期敏感指标,并具有重要意义。

肠道病毒EV71型手足口病的临床观察及护理

目的总结98例肠道病毒EV71型手足口病患儿的病情观察及护理要点，以利早期发现重症病例，降低患儿的病死率，预防并发症。方法对收治的98例肠道病毒EV71型手足口病患儿，其中病情较重和危重的16例早期转院治疗，对82例予积极治疗和精心护理。结果82例患儿痊愈出院，无发生医院感染及死亡病例。结论系统的病情观察及精心的护理，可防止本病的传播，早期诊断、早期治疗可提高治愈率，防止并发症的发生。

利血平治疗重型肠道病毒71型感染导致高血压患儿疗效观察

目的:探讨利血平辅助治疗EV71感染重症患儿所致高血压的疗效。方法:选择我院2010年4～6月均为EV71病毒阳性30例儿科住院患儿。将患儿随机分为对照组和治疗组,均应用甲泼尼龙、静脉注射用人免疫球蛋白、利巴韦林、米力农和其他常规性治疗,其中对照组15例未用利血平,治疗组15例加用利血平。利血平每次剂量0.07 mg/kg,每次最大量<1.00 mg,血压降至正常后渐减量停用。结果:治疗12 h后,治疗组血压降至(100±10)mm Hg,对照组为(140±13)mm Hg,治疗组降压效果较对照组显著(t=3.71,P<0.05)。结论:利血平可以辅助治疗EV71感染所致危重患儿病程中所出现的高血压,在降血压的同时可以耗竭患儿体内的儿茶酚胺,可以降低死亡率。

实时荧光PCR技术在手足口病病毒核酸检测中的应用

目的通过对2010年4～8月北京市怀柔区手足口病病原学监测数据的分析,了解北京市怀柔区手足口病流行趋势,为该地区手足口病防治提供科学依据,同时探讨实时荧光RT-PCR在检测手足口病毒核酸中的应用价值。方法采集2010年4～8月怀柔区疑似肠道病毒感染者咽拭子和疱疹液标本,用实时荧光RT-PCR方法对人肠道病毒(包括EV71、CoXA16)进行核酸检测。结果 2010年4～8月共采集121例标本,检出肠道病毒EV71型87例,CoXA16型19例,肠道病毒通用型6例,阴性9例。结论 2010年4～8月怀柔区手足口病毒以肠道病毒EV71型为主。实时荧光RT-PCR技术具有特异性强、灵敏度高的特点,且能在采样后数小时内检测到病毒的RNA,从而达到快速诊断的目的,该方法对手足口病的治疗及疫情的有效控制提供有力的病原学支持。

运用表位嵌合型3型腺病毒载体制备肠道病毒71型单克隆抗体

目的制备针对肠道病毒71型(EV71)的单克隆抗体(m Ab)。方法将六邻体中同时嵌入EV71 SP55与SP70两个中和表位的重组人3型腺病毒作为免疫原免疫小鼠,利用杂交瘤技术制备m Ab。用病毒微量中和实验、间接ELISA、Western blot法和直接免疫荧光染色法进行鉴定。结果获得了4株分泌EV71特异性m Ab的杂交瘤细胞,D2C9、2C4、I2G2、I12C3,其中D2C9株腹水间接ELISA实验效价为1∶8 000 000,其余3株为1∶500 000;Western blot法和ELISA结果表明4株m Ab均识别EV71病毒VP1蛋白。D2C9针对SP70表位,2C4、I12C3、I2G2针对SP55表位;直接免疫荧光实验结果显示4株m Ab均能与EV71特异性结合,而与柯萨奇病毒16型(Cox A16)不结合。结论获得了对EV71亲和力高、特异性好并且与Cox A16无交叉反应的m Ab。

鸭跖草不同提取方法提取物的体外抗病毒实验研究

目的:为建立鸭跖草抗病毒谱-效相关评价系统,对鸭跖草不同提取方法提取物体外抗病毒活性进行筛选,最后选择鸭跖草75%乙醇冷浸提取物抗呼吸道合包病毒(RSV)活性和鸭跖草蒸馏水回流提取物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)活性进行下一步研究。方法:采用体外抗病毒实验CPE法结合MTT染色法,以半数治疗浓度(EC50)和半数细胞毒性浓度(TC50)并以治疗指数TI值作为评价指标,观察鸭跖草不同提取物对肠道病毒71型(EV71)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用。结果:中药材鸭跖草对于肠道病毒71型(EV71)病毒未见明显效果;75%乙醇冷浸的鸭跖草浸取液对呼吸道合胞病毒(RSV)病毒有较好的抗病毒效果,并且测得鸭跖草75%乙醇冷浸浸取液抗呼吸道合胞病毒(RSV)的治疗指数为21.1,阳性对照药治疗指数为29.8;采用蒸馏水提取的鸭跖草提取液对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)病毒有较好的抗病毒效果,且测得鸭跖草蒸馏水回流提取物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的治疗指数为19.6,阳性对照药治疗指数为36.7。结论:鸭跖草在抗呼吸道合胞病毒(RSV)和单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)有一定的效果,为进一步进行鸭跖草抗病毒研究和建立鸭跖草谱-效模型提供了科学依据和数据支持。

肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16鼠源性广谱中和活性单克隆抗体的制备

目的制备可以同时阻断肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)感染的中和活性单克隆抗体(mAb)。方法采用EV71病毒体蛋白1(VP1)羧基端的163~177位氨基酸(SP55)免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备mAb,用EV71中和抗原表位SP55以及高度同源的CV-A16 VP1羧基端的第163~177位氨基酸(PEP55)同时进行检测,筛选同时与EV71和CV-A16发生交叉反应的mAb,并进行体外中和试验检测对EV71和CV-A16的中和作用,并分析mAb的生物学特性。结果筛选获得1株可以同时中和EV71及CV-A16的mAb 6E5,其重链为IgG1亚类,轻链为Kappa链;细胞微量中和实验表明其抗EV71感染的中和效价为1∶128,抗CV-A16感染的中和效价为1∶32。结论成功获得1株能同时中和EV71及CV-A16的广谱中和活性mAb。

我国及广西手足口病流行病学研究进展

自从1948年Dalldorf在美国纽约州格林县的柯萨奇镇(Coxsackie New York)的患儿中发现并描述了一种后来被命名为柯萨奇病毒(Coxsackie virus)以来,直到1960 Alsop将由萨科奇病毒引起的疾病命名为手足口病(HFMD),随后在世界各地均发现存在手足口病的流行。我国于1980年首次报告手足口病,广西于1989年第一次发现并报告了该病,自2008年手足口病列为国家法定丙类传染病以来,广西对手足口病的病原体的基因型进行了详细的研究,结果显示其中肠道病毒71型(EV71)占41.70%,柯萨奇病毒A16型(CoxA16)阳性8.50%。同时证实广西分离的EV71与国内其他省流行的EV71流行株具有高度的同源性,同属于C4基因亚型C4b分支。资料显示手足口病在国内呈现自然流行消长趋势,尽管该病的疫苗研究取得了多方面的进展,但离现场应用仍然存在多方面的挑战。

危重型手足口病15例临床分析

目的：分析总结15例重症危重型手足口病患儿的临床特征。方法：回顾性分析2010年5月-2013年7月本院儿科住院的15例重症危重型手足口病患儿的临床资料。结果：（1）15例患者中，男12例，女3例；发病年龄6-52个月：其中≤1岁者4例，1-3岁者9例，3-5岁者2例，平均21个月。治愈好转11例，死亡4例（26.7%）。（2）15例危重型患儿在起病0-3 d内以精神萎靡、呕吐、惊跳为主要临床特征，发生率分别为100%、73.0%、86.7%；在起病3-5 d内以循环功能障碍、呼吸功能障碍、抽搐、死亡为主要病情改变，发生率分别是85.7%、42.9%、50.0%、21.4%。（3）死亡组白细胞计数、嗜中性粒细胞比率、血糖水平，死亡组均明显高于存活组，比较差异均有统计学意义（P〈0.05）；死亡组C反应蛋白、肝功能、心肌酶检查改变不明显（P〉0.05）。结论：危重型手足口病患儿病情进展迅猛，死亡率高。精神萎靡、呕吐、惊跳是危重型手足口病早期主要临床表现，可作为早期迅速判断危重病情的指标；白细胞计数、嗜中性粒细胞比率、血糖水平异常增高提示患儿死亡风险高。

桃源县2012-2014年重症手足口病临床分析

目的:探讨重症手足口病的早期诊断、治疗方法。方法:分析桃源县2012-2014年登记的50例重症手足口病患者临床诊治资料。结果:50例患者中以EV71型感染为主,经过早期有效的治疗后,治愈率96%。结论:早期降低颅内压、有效机械通气、激素疗法能有效提高治愈率。

2014年合川北碚儿童手足口病病原体检测结果分析

目的分析2014年合川、北碚两区手足口病流行特征,探讨其流行规律。方法选取2014年合川丶北碚两区临床初步诊断为手足口病例为对象,采用患者发病1周内的咽拭子、疮疹液标本,采用实时荧光RT-PCR法,检测肠道通用型、EV71型和Cox A16型特异性核酸。结果实时荧光定量法检测179份标本中监测病例122例：核酸阳性85例,阳性率为69.7%;聚集病例57例,核酸阳性52例,阳性率为91.2%。其中监测病例中Cox A16阳性13例,占10.6%;EV71阳性31例,占25.4%,肠道通用病毒阳性41例,占33.6%;聚集病例中Cox A16阳性28.1%,EV71阳性24例,占42.1%;肠道通用病毒阳性12例,占21.1%。手足口病发病3~6月占82.7%,为主高峰,10~11月占17.3%为次高峰。1~4岁儿童占65.9%,男女比例1.16：1。结论 2014年合川丶北碚片区手足口病原以EV71肠道病毒为主,3~6月为发病高峰,10~11月为次高峰,1~4岁儿童是感染的主要人群。

实时荧光定量PCR法在手足口病中的诊断价值

目的探讨实时荧光定量PCR(QPCR)法在手足口病中的诊断价值。方法回顾性分析2019年1—12月来广东医科大学附属东莞儿童医院就诊的手足口病儿童163例,将其作为试验组,选取同期161例入院体检儿童作为对照组,所有儿童均采集粪便进行QPCR检测。结果试验组163例儿童中检测阳性144例(88.34%),对照组161例儿童中阳性3例(1.86%),两组比较差异有统计学意义(P<0.05),144例手足口病患者中主要以肠道病毒EV为主,有102例(70.83%),其次是CA16,有33例(22.92%),最后是EV71,有9例(6.25%)。结论QPCR对手足口病的诊断具有较高的临床意义。

肠道病毒71型脑干脑炎二例尸检报道及文献复习

目的探讨手足口病的临床与病理特征。方法分析2例肠道病毒71型（EV71）脑干脑炎死亡病例尸检结果及临床资料，并复习相关文献。结果死者年龄≤3岁，病程短，进展快，1例有典型皮疹，1例皮疹不明显，2例均有不同程度的神经系统症状，最终出现肺水肿和肺出血死亡。尸检显示：病变主要在大脑和脑干，可见明显水肿、炎症、坏死等；肺脏主要为水肿和出血；心肌无炎细胞浸润及心肌炎的改变，肝、脾、肾、胰腺及胃肠道病理改变不明显。结论本组2例尸解结果显示神经系统、呼吸系统病变明显。支持EV71感染的手足口病，常并发中枢神经系统损害；严重的脑干脑炎和神经源性肺水肿、肺出血是死亡的主要原因；也可以解释患儿以咳嗽、气促、抽搐、昏迷为主的临床表现。

2008～2011年贵州省肠道病毒71型分子流行特征分析

为研究贵州省肠道病毒71型(EV71)的基因型和分子流行特征,监测了全省报告的手足口病病例,选择2008年以来贵州全省部分EV71阳性标本进行病毒分离及VP1全基因测序(含重症病例、死亡病例和轻症病例),与国内外近年流行毒株及各亚型代表株进行基因比对,分析同源性及基因亚型。2008年、2009年及2011年贵州省流行的主要病原为EV71,获得109株参比序列毒株的同源性为95.3%～99.7%,贵州省毒株与邻省及山东省、上海市、南京市、吉林省和宁波市代表株的同源性最高,轻症与重死病例的核苷酸及氨基酸序列无明显的特征性差异,未出现不同基因亚型病毒的输入或改变,仍属C4a亚型。同地区、同年度内的核苷酸序列差异小于跨地区、跨年度差异。