铁死亡诱导剂RAS合成致死分子3抑制病理性瘢痕成纤维细胞的纤维化

背景:病理性瘢痕主要表现为异常的细胞外基质积累和过度的成纤维细胞增殖,成纤维细胞过度增殖就会产生大量以胶原纤维为主的细胞外基质。因此深入探讨成纤维细胞纤维化在病理性瘢痕形成中的作用,将为揭示病理性瘢痕的机制和生物学治疗提供新思路。目的:探讨铁死亡诱导剂RAS合成致死分子3(RAS-selective lethal small molecule 3,RSL3)对人病理性瘢痕成纤维细胞纤维化的影响。方法:收集10例宁夏医科大学总医院烧伤整形美容科提供的病理性瘢痕组织和同一个体正常皮肤组织,提取人病理性瘢痕成纤维细胞和人正常皮肤成纤维细胞用于后续实验;苏木精-伊红染色观察病理性瘢痕组织和正常皮肤组织的形态;倒置显微镜观察病理性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞的外观形态;免疫荧光实验验证所提取的细胞是否为成纤维细胞;用不同浓度的RSL3(1,3,5,7,9,11,13μmol/L)干预细胞,CCK-8法检测RSL3作用于成纤维细胞的半数抑制浓度(IC_(50));设置对照组(不做处理)和RSL3干预组(用7μmol/L的RSL3干预细胞24 h),qRT-PCR和Western blot检测谷胱甘肽过氧化物酶4、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的mRNA和蛋白的表达;检测细胞丙二醛浓度;划痕试验检测细胞划痕后24 h剩余划痕面积,并计算剩余划痕面积百分比。结果与结论:①与正常皮肤组相比,病理性瘢痕组的谷胱甘肽过氧化物酶4高表达(mRNA:t=3.252,P<0.01;蛋白:t=5.075,P<0.01);②与正常皮肤成纤维细胞组相比,病理性瘢痕成纤维细胞组的谷胱甘肽过氧化物酶4高表达(mRNA:t=10.32,P<0.01;蛋白:t=26.22,P<0.01);③与对照组相比,RSL3干预组谷胱甘肽过氧化物酶4表达减少(mRNA:t=2.798,P<0.05;蛋白:t=4.643,P<0.01),丙二醛浓度上升(t=2.917,P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白(mRNA:t=15.84,P<0.01;蛋白:t=4.610,P<0.01)、Ⅲ型胶原蛋白(mRNA:t=28.86,P<0.01;蛋白:t=7.713,P<0.01)和α-平滑肌肌动蛋白(mRNA:t=2.671,P<0.05;蛋白:t=7.417,P<0.01)的表达减少,迁移能力减弱(t=14.06,P<0.01);④提示RSL3通过抑制谷胱甘肽过氧化物酶4的表达,进而抑制病理性瘢痕成纤维细胞的纤维化和迁移能力。

共表达分子伴侣蛋白提高III型普鲁兰水解酶在短小芽孢杆菌中的分泌表达及发酵优化

本研究旨在通过共表达分子伴侣蛋白以及优化发酵条件来提高III型普鲁兰水解酶(TK-PUL)在短小芽孢杆菌中的分泌表达水平。通过构建共表达TK-PUL和分子伴侣蛋白的多种重组短小芽孢杆菌,并以胞外酶活为指标对其进行筛选,确定最有利于TK-PUL分泌表达的分子伴侣蛋白及对应的重组短小芽孢杆菌。在此基础上采用单因素实验和响应面法优化重组短小芽孢杆菌的发酵条件。结果表明,共表达分子伴侣蛋白PrsA^(Ba)的重组短小芽孢杆菌的胞外酶活达到98.79 U/mL,提高了0.31倍。该重组短小芽孢杆菌的最佳培养基包括19.65 g/L葡萄糖、21.46 g/L酵母提取物、12.01 g/L MgCl_(2)·6H_(2)O、9.02 g/L脯氨酸、0.01 g/L FeSO4·7H_(2)O、0.01 g/L MnSO4·4H_(2)O、0.001 g/L ZnSO4·7H_(2)O。在发酵温度为35℃、起始发酵pH为7.0的条件下,该重组短小芽孢杆菌于最佳培养基中培养66 h时,其胞外酶活达到192.68 U/mL,提高了1.56倍。本研究通过共表达分子伴侣蛋白和发酵优化实现了TK-PUL在短小芽孢杆菌的高效分泌表达,为TK-PUL的应用提供了基础。

基于ERK/p38 MAPK信号通路探究解毒活血汤治疗Ⅲ型前列腺炎的作用机制

目的探究解毒活血汤调控ERK/p38 MAPK信号通路治疗Ⅲ型前列腺炎的作用机制。方法采用去势手术+苯甲酸雌二醇(EB)诱导慢性前列腺炎大鼠模型。36只SD大鼠随机分为空白组(生理盐水,4 mL·kg^(-1))、模型组(生理盐水,4 mL·kg^(-1))、阳性药物对照组(前列康片混悬液,4 mL·kg^(-1))、解毒活血汤低(4 mL·kg^(-1))、中(8mL·kg^(-1))、高剂量组(12 mL·kg^(-1)),每组6只,所有实验动物连续给药30 d。苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠组织病理学变化;免疫组化法、RT-PCR、Western Blot技术检测相关炎症因子及蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,慢性前列腺炎大鼠前列腺组织增生及水肿明显、炎症浸润增加,而阳性药物对照组及解毒活血汤各剂量组大鼠前列腺组织病变减轻或消失、炎症浸润减少,且与解毒活血汤剂量成正比;免疫组化表示模型组p38、P-p38、STAT3、P-STAT3表达较高,阳性药物对照组、不同剂量解毒活血汤组的p38、P-p38、STAT3、P-STAT3表达呈下降趋势,且均低于模型组。RT-PCR结果显示阳性药物对照组及解毒活血汤低、中、高剂量组均能降低大鼠前列腺组织中TNF-α、IL-2、IL-6的表达水平;Western Blot检测提示大鼠疾病发生进展过程中p38、P-p38、P-ERK1/2、STAT3、P-STAT3呈高表达状态,解毒活血汤能够降低其表达,从而降低相关炎症因子的过度激活。结论解毒活血汤能够抑制ERK/p38 MAPK信号通路的过度激活,从而降低IL-2、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达,以改善前列腺组织炎症反应。

城市暴雨强度公式复核——以杭州主城区为例

在气候变化与快速城镇化共同影响下,很多城市暴雨特性发生变化,现行的暴雨强度计算公式可能不再适用,需要复核和更新。以杭州市主城区为例,根据钱塘江江畔闸口站1982—2022年降雨极值资料,分别选用皮尔逊Ⅲ型分布和耿贝尔分布曲线进行线型拟合,采用粒子群优化算法推求暴雨强度公式参数,与现行规范给出的暴雨强度公式进行复核分析。结果表明:在重现期为2~20 a时,根据皮尔逊Ⅲ型分布和耿贝尔分布推求得到暴雨强度新公式的平均绝对均方差均小于0.05 mm/min,平均相对均方差均小于5%,符合精度要求;仅当降雨历时为10 min时,2个新公式的暴雨强度要小于现行公式的暴雨强度,其他历时下2个新公式的暴雨强度都明显大于现行公式的暴雨强度;经合理性分析,本研究根据最新暴雨资料推求的暴雨强度公式可为杭州市主城区排水防涝工程设计和相关设施建设提供参考。

携载重组胶原蛋白的卡波姆凝胶喷剂制备及对大鼠口腔溃疡愈合作用观察

目的 制备携载重组胶原蛋白的卡波姆凝胶喷剂,并观察其对大鼠口腔溃疡的愈合作用。方法 选取可用于口服制剂的卡波姆971P为主要材料,添加不同质量浓度的甘油、磷酸二氢钾(KH2PO4)、Ⅲ型重组胶原蛋白(rhColⅢ)等制备凝胶喷剂,观察凝胶喷剂在不同pH下的喷出性能、不同缓冲剂对凝胶喷剂粘度变化的影响、不同pH卡波姆凝胶对胶原蛋白溶解度的影响。使用醋酸灼烧法建立大鼠口腔溃疡模型,模型建立成功后随机分为空白对照组、卡波姆组(采用不含胶原蛋白的卡波姆凝胶喷剂治疗)、胶原蛋白组(采用含rhColⅢ的卡波姆凝胶喷剂治疗),比较各组大鼠溃疡愈合率及黏膜组织HE染色结果。结果 卡波姆粘度在2 500~3 000 mpa·s时具有良好的喷出性能。随着离子溶度的升高,卡波姆粘度不断下降(P均<0.05)。当凝胶pH是4时,卡波姆中有大量白色团块(未溶解的胶原蛋白),继续延长搅拌时间白色团块未减少;往凝胶中继续缓慢少量添加KOH并不断搅拌,随着pH不断升高,白色团块不断减小,当pH升高到5左右,白色团块消失。空白对照组、卡波姆组、胶原蛋白组制模后第3天溃疡愈合率分别为38.7%、45.6%、53.1%,空白对照组与胶原蛋白组相比,P<0.05;空白对照组、卡波姆组、胶原蛋白组制模后第5天溃疡愈合率分别为62.9%、72.4%、88.5%,胶原蛋白组分别与空白对照组、卡波姆组比较,P均<0.05。制模后第3天,各组口腔黏膜上皮处均有缺损,空白对照组缺损最大,上皮层和固有层中单核细胞、多形核细胞等炎症细胞数量较多,新生血管数量较少;相比于空白对照组,卡波姆组炎症细胞数量减少,新生血管数量较多;而相比于其他两组,胶原蛋白组炎症细胞相对最少,新生血管数量较多,且缺损面积减少;制模后第5天,空白对照组黏膜上皮尚有缺损,炎症细胞数量较多;相比于空白对照组,卡波姆组上皮缺损和炎症细胞数量减少,新生血管数量较多;阳性对照组相比于其他两组,炎症细胞数量最少,新生血管数量明显增多,上皮缺损已完全愈合。结论 携载重组胶原蛋白的卡波姆喷剂具有良好的喷出性能和粘附性能,该喷剂能显著促进大鼠口腔溃疡的愈合。

经DCAG方案化疗后AML患者血清HOXA9、PCⅢ、SE-CAD水平的变化及其与预后的关系

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者采用DCAG方案化疗后血清同源盒基因A9(HOXA9)、可溶性E钙黏蛋白(SE-CAD)及Ⅲ型前胶原蛋白(PCⅢ)水平的变化及其与预后的关系。方法:回顾性分析2018年3月至2021年12月经本院确诊并收治的80例复发难治性AML患者的资料,按照治疗方案不同将其分为DCAG组(n=40)与CAG组(n=40),对比治疗前后各组的临床疗效及HOXA9、SE-CAD、PCⅢ水平的变化;另按照临床疗效将所有患者分为缓解组(n=58)与未缓解组(n=22),通过单因素和多因素分析影响AML患者预后的危险因素;采用ROC曲线分析HOXA9、SE-CAD、PCⅢ三项单一指标及三者联合对预后的预测效能。结果:相比于治疗前,DCAG组与CAG组患者在治疗后的HOXA9、SE-CAD、PCⅢ水平均有所下降,但DCAG组患者各指标的改善效果明显优于CAG组,且DCAG组患者在治疗后的临床疗效显著优于CAG组(均P<0.05);多因素分析结果显示,骨髓原始细胞比率、HOXA9 m RNA、SE-CAD及PCⅢ水平升高是影响AML患者化疗疗效的独立危险因素(均P<0.05);ROC曲线分析显示,HOXA9 m RNA、SE-CAD及PCⅢ联合能够有效预测AML预后情况,其敏感度为84.80%、特异度为88.20%。结论:应用DCAG的化疗方案能够显著改善AML患者的HOXA9 m RNA、SE-CAD及PCⅢ水平;且这三项指标作为影响AML患者预后的危险因素,通过联合检测能够对AML患者的预后情况进行有效预测。

三维组架螺钉与微创钢板固定SandersⅢ型跟骨骨折的有限元分析

背景:经皮复位加压固定的三维组架螺钉内固定在治疗SandersⅢ型跟骨骨折上已经取得了满意的临床疗效,但在生物力学方面是否可以达到微创钢板内固定的稳定性,以及对比之后的优势与缺点还不得而知。目的:通过有限元分析方法探讨不同内固定装置对SandersⅢ型跟骨骨折的固定效果。方法:选择1名26岁成年健康男性志愿者,根据其跟骨CT数据制作SandersⅢ型跟骨骨折有限元模型。选用经皮微创三维组架螺钉、跗骨窦微创钢板分别固定跟骨骨折模型,分别施加350,700N纵向载荷,分析2种模型的位移、应力分布情况,比较各种模型的稳定性。结果与结论:①三维组架螺钉模型中骨块与内植物的峰值应力明显低于微创钢板模型,三维组架螺钉模型中骨块与内植物的平均应力也明显低于微创钢板模型;②2种模型的最大位移均位于后距关节面内侧,三维组架螺钉模型的最大位移小于微创钢板模型;③微创钢板模型前突骨块与内侧骨块的纵向位移更小,三维组架螺钉模型内侧骨块与中段骨块的横向与垂直位移更小;④提示2种内固定模型均能提供满意的固定效果,其中三维组架螺钉模型使应力分布更均匀、骨块综合位移更小,能提供更好的横向与垂直稳定性,而微创钢板在维持纵向稳定性上更具优势。

胶原酶治疗胶原蛋白(刺激剂)植入后结节并发症专家共识

1概述。2胶原蛋白(刺激剂)及其植入后结节并发症。2.1胶原蛋白。2.2胶原蛋白及胶原蛋白刺激剂在医疗美容中的应用。2.2.1胶原蛋白(刺激剂)植入适应证。2.2.2胶原蛋白(刺激剂)植入后常见的并发症。2.3胶原蛋白(刺激剂)植入后结节并发症。2.4胶原蛋白(刺激剂)植入后结节并发症的治疗。3胶原酶在胶原蛋白(刺激剂)植入术后结节并发症治疗中的应用。3.1胶原酶及其在临床中的应用。3.2胶原酶治疗胶原蛋白(刺激剂)植入术后结节并发症的理论基础及实验结果。3.3局部注射胶原酶治疗胶原蛋白(刺激剂)植入术后结节的操作方法。3.3.1适应证。3.3.2禁忌证。3.3.3注射方法。3.3.4操作注意事项。3.3.5治疗后护理。3.4局部注射胶原酶的不良反应及处理措施。4总结。

Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5抑制巨噬细胞焦亡的作用机制

背景:Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5(fibronectin type Ⅲ domain-containing protein 5,FNDC5)是一种肌肉因子,具有调节糖脂代谢、抗炎、抗氧化及改善胰岛素抵抗等功能,并且具有调节多种细胞焦亡的能力。目的:探讨FNDC5对巨噬细胞焦亡的作用及潜在机制。方法:(1)构建FNDC5基因过表达和沉默慢病毒载体,将慢病毒载体转染至THP-1细胞株,通过观察细胞绿色荧光表达、qPCR和Western blot验证转染效果。(2)佛波酯诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞,通过氧化性低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)构建巨噬细胞焦亡模型,分组:NC组、ox-LDL组、ox-LDL+MOCK1组、ox-LDL+Ov-FNDC5组、ox-LDL+MOCK2组和ox-LDL+shFNDC5组。(3)采用Hoechst 33342/PI荧光双染和乳酸脱氢酶释放实验评估细胞焦亡程度,采用qPCR和Western blot检测相关分子mRNA和蛋白表达水平,采用ELISA检测细胞上清液中白细胞介素1β和白细胞介素18释放水平。结果与结论:与ox-LDL+MOCK1组相比,过表达FNDC5可显著降低巨噬细胞焦亡率以及乳酸脱氢酶、白细胞介素1β、白细胞介素18释放水平,显著抑制NF-κB p65、NF-κB p50、NLRP3、ASC、Caspase-1及GSDMD的mRNA表达,显著抑制NF-κB p65、NF-κB p50、NLRP3、ASC、Cleaved Caspase-1及GSDMD-N的蛋白表达;与ox-LDL+MOCK2组相比,沉默FNDC5则出现相反结果。结果表明:FDNC5可能通过抑制NF-κB/NLRP3通路缓解巨噬细胞焦亡。

PGC⁃1α、FNDC5蛋白在来曲唑诱导多囊卵巢综合征大鼠卵巢组织中的表达

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)、Ⅲ型纤连蛋白域蛋白5(FNDC5)在来曲唑诱导多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢组织中的表达。方法将6周龄雌性SD大鼠随机分为对照组、PCOS组,每组各10只。PCOS组给予来曲唑溶液灌胃建立PCOS模型,对照组给予等体积羧甲基纤维素溶液灌胃,均1天1次,连续28 d。用化学发光法测定血清雄激素(T)、黄体生成素(LH)、卵泡雌激素(FSH)、空腹葡萄糖(FPG),计算LH/FSH;用ELISA法测定空腹血胰岛素(INS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色后观察卵巢组织病理变化;免疫组化染色法检测卵巢组织PGC-1α、FNDC5蛋白表达。结果两组血清FPG比较差异无统计学意义(P>0.05),PCOS组血清T、LH、LH/FSH、INS、HOMA-IR较对照组高(P均<0.05),血清FSH水平较对照组低(P均<0.05)。对照组大鼠可见不同生长时期的卵泡及新鲜黄体,颗粒细胞整齐紧密排列、层数较多,可达6~8层;PCOS组可见多个未成熟的囊状卵泡及闭锁卵泡,颗粒细胞排列散乱不规则,层数较少。PGC-1α、FNDC5蛋白主要在卵巢组织颗粒细胞和卵丘细胞表达,呈现棕黄色,而卵泡膜细胞少量表达。与对照组比较,PCOS组卵巢组织PGC-1α蛋白表达低,FNDC5蛋白表达高,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论PGC-1α在PCOS大鼠卵巢组织中低表达,FNDC5在PCOS大鼠卵巢组织中高表达。

显微外科技术结合Ilizarov技术治疗小腿毁损伤

目的探讨应用显微外科技术结合Ilizarov技术治疗小腿GustiloⅢC型毁损伤的临床疗效。方法回顾性分析2018年6月-2021年6月收治的GustiloⅢC型小腿毁损伤患者10例,男8例,女2例;左侧6例,右侧4例;年龄18~58岁;交通伤6例,机器伤4例;软组织缺损面积6cm×8 cm~16 cm×20 cm;骨缺损长度5~12 cm。入院后均根据伤情急诊以显微外科技术重建伤肢血运,二期采用植皮或游离皮瓣修复皮肤软组织缺损,三期以Ilizarov技术修复骨缺损。10例患者出院后均定期复查,小腿创面愈合情况,外固定支架是否稳固、有无偏斜,是否有创面或钉道感染,根据X线观察新生骨矿化情况,动态调整搬运速度。结果术后10例患者均保肢成功,软组织缺损、骨缺损均完全修复,骨折断端均愈合。10例均获随访,随访时间20~36个月,平均26个月。末次随访膝关节LEFS评分:优2例,良5例,可3例。末次随访踝关节AOFAS评分:优1例,良3例,可3例,差3例。结论应用显微外科技术结合Ilizarov技术治疗小腿GustiloⅢC型毁损伤,保肢率高,可恢复一定的肢体功能,是一种较理想的治疗方法。

五倍瘢痕膏与硅酮霜治疗兔模型增生性瘢痕的对比研究

目的:探究五倍瘢痕膏与硅酮霜治疗增生性瘢痕的对比研究。方法:选择27只健康清洁新西兰大耳白兔,根据长轴走形避开大血管在腹侧建立增生性瘢痕模型,每只兔耳朵建立6个圆形创面,共324个创面。按照随机数字表法将这27只新西兰大耳白兔分为对照组、五倍瘢痕膏组(前期经25%、50%及75%五倍瘢痕膏浓度验证,最后取50%五倍瘢痕膏)、硅酮霜组,各9只。术毕消毒,28d后,当创面完全上皮化,将等量膏剂均匀涂抹在瘢痕面,每天2次,治疗28d。比较三组瘢痕增生指数、成纤维细胞数密度、胶原纤维面密度、I型和Ⅲ型胶原蛋白免疫组化与蛋白质免疫印迹检测结果。结果:硅酮霜组瘢痕增生指数、成纤维细胞数密度、胶原纤维面密度明显低于五倍瘢痕膏组和对照组,五倍瘢痕膏组低于对照组,三组差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果与蛋白质免疫印迹检测显示硅酮霜组Ⅰ型胶原蛋白相对表达和Ⅲ型胶原蛋白相对表达明显低于五倍瘢痕膏组和对照组,五倍瘢痕膏组低于对照组,三组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:五倍瘢痕膏与硅酮霜治疗增生性瘢痕疗效显著,均能显著改善瘢痕组织颜色、减少瘢痕厚度,使其变柔和,降低成纤维细胞数、胶原纤维聚集及增生性瘢痕Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白表达,防治瘢痕形成,进而促进康复,但硅酮霜优势更明显。

吴川市暴雨强度公式的推导及评估

为进一步做好城市排水系统的科学性和实用性,采用吴川市国家气象观测站1980—2021年逐分钟雨量数据资料,利用年最大值法、数值逼近和最小二乘法等,推导吴川市暴雨强度公式,结果表明:湛江市暴雨强度公式理论值与吴川市实际值误差太大,不能达到室外排水规范的要求,而推导的暴雨强度区间参数公式和暴雨强度综合公式精度均符合精度要求,可作为相关部门设计吴川市排水基础设施的相关参考依据,且暴雨强度区间参数公式精度明显优于暴雨强度综合公式。

太原机场三期改扩建工程建设期土壤流失量测算

以太原机场三期改扩建工程为例,根据设计文件和实地调查,确定建设期扰动地表和植被破坏情况,按照《生产建设项目土壤流失量测算导则》,按扰动影响因素划分土壤流失类型,确定计算单元及预测时长,选择流失类型对应的预测公式,算出各计算单元土壤流失量,并加和统计出建设项目总土壤流失量。

当代政论语体中的动词性非主谓句的语言特点及其功能——以《习近平谈治国理政》(第三卷)为分析对象

以《习近平谈治国理政》(第三卷)中随机抽取的300条非主谓句为研究对象,从社会运用的角度出发,使用分类研究法对政论语体中非主谓句的语言特点及其功能进行探讨。研究显示,语料中动词性非主谓句的出现频率为100%,有效突出政论语体极强的说理性目的和指令性目的。经过进一步分析,认为非主谓句在政论语体中的使用既符合政论语体凝练明晰的风格特征,又符合现代汉语话题突出的特征,且能积极表达政论语体坚定、自信的立场,具有不可忽视的优势。

纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白5对HepG2肝癌细胞体外转移活性的影响及其机制

目的研究纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白5对肝细胞癌的影响以及调控机制。方法以不同浓度0、5、10和20μmol纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白5处理HeP G2细胞,通过MTT实验、集落形成实验、Transwell实验、流式细胞术和细胞划痕实验分析纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白5对HepG2细胞的活性、侵袭和迁移能力以及凋亡率的影响。通过蛋白免疫印迹法分析纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白对Wnt/β-catenin通路的作用。结果0、5、10和20μmol的纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白5可以降低HepG2细胞的生长活性(92.86±0.32比79.32±0.17比50.11±0.56比29.29±0.96),抑制HepG2细胞集落形成(238.25±12.28比126.91±9.56比68.93±9.25比32.53±7.32),并且能够阻止HepG2细胞的发生侵袭以及迁移(87.13±2.18比66.23±2.16比46.23±3.27比22.56±5.12;88.46±12.55比55.08±9.21比39.62±5.63比19.26±5.71),诱导HepG2细胞凋亡(1.46±0.23比5.08±0.11比9.66±0.23比13.27±1.01)。进一步研究发现,纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白5的这些作用可能与Wnt/β-catenin信号通路的抑制有关。结论纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白5能够抑制HepG2细胞的转移活性,并且纤连蛋白Ⅲ型结构域蛋白5的抑癌作用可能与Wnt/β-catenin途径有关。

根瘤菌Ⅲ型效应因子NopAA的突变及其对大豆共生结瘤的影响

大豆根瘤固氮为大豆生长发育提供必不可少的氮源。根瘤菌Ⅲ型效应因子是大豆与根瘤菌共生体系建立过程中重要的信号分子。本研究以根瘤菌HH103 Ⅲ型效应因子NopAA为研究对象,通过生物信息学手段分析了其基本信息,利用三亲杂交构建NopAA突变体,并利用Southern blot对突变体进行鉴定。表达分析发现,NopAA突变显著降低了大豆免疫相关基因PR1的表达;在根瘤成熟之后,根瘤菌依旧能够表达NopAA。最后通过结瘤能力鉴定,发现NopAA突变能够显著抑制根瘤的产生。该研究为揭示根瘤菌Ⅲ型效应因子NopAA的作用机制奠定了基础,同时为大豆农业生产过程中共生固氮的利用提供理论基础。

血管性血友病因子、抗凝血酶Ⅲ诊断2型糖尿病合并血管病变的临床意义

目的:探讨血管性血友病因子(vWF)、抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)诊断2型糖尿病(T2DM)合并血管病变的临床意义。方法:选取2019年1月—2020年12月江苏省苏北人民医院内分泌科收治的50例T2DM患者作为研究对象,根据有无血管合并症(冠心病、高血压、糖尿病视网膜病变或排除泌尿系统病变而尿蛋白≥0.05 g/24 h)分为有合并症组与无合并症组;选择同期15例健康者作为对照组。三组均接受vWF、ATⅢ检测,比较三组vWF、ATⅢ水平。结果:有合并症组与无合并症组vWF水平均高于对照组,ATⅢ水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);有合并症组ATⅢ水平低于无合并症组,vWF水平高于无合并症组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:T2DM合并血管病变患者ATⅢ活性下降,提示其血栓形成可能性较大;vWF可作为T2DM患者是否合并血管病变的鉴别指标之一。

西瓜食酸菌Ⅲ型分泌效应物基因aop2功能分析

Ⅲ型分泌效应物(type Ⅲ secreted effectors, T3SEs)是细菌性果斑病(bacterial fruit blotch, BFB)的病原菌——西瓜食酸菌(Acidovorax citrulli)分泌的关键致病因子。鉴定西瓜食酸菌特异的、具有GNAT(Gcn5-related N-acetyltransferase)超家族结构域的T3SE基因aop2,分析其编码蛋白质影响植物免疫的方式,可为深入认识该基因在病菌致病机制中的作用奠定基础。利用生物信息学分析其序列特征;借助荧光定量PCR技术分析aop2的表达调控及其表达与抗病相关基因表达间的关系;利用基因突变及基因功能互补手段,通过分析致病性、寄主活性氧积累量等解析基因功能;使用瞬时表达技术了解Aop2抑制激发子诱导的细胞坏死能力及其亚细胞定位情况。aop2基因启动子区存在Ⅲ型分泌系统(type Ⅲ secretion system, T3SS)核心基因结合位点,其编码的蛋白不存在信号肽和跨膜螺旋区,含一个GNAT家族乙酰转移酶结构域但无同源蛋白;T3SS核心基因hrpG/hrpX突变体中aop2基因的表达量显著降低;缺失aop2基因的突变体对寄主黄瓜的致病力降低,但黄瓜子叶中活性氧积累量增加;Aop2可定位于烟草整个细胞,能够抑制由坏死因子NIP诱导的PCD(programmed cell death);Aop2的表达增强了烟草叶片中病原相关分子模式触发的免疫(PAMP-triggered immunity, PTI)信号通路,以及SA和JA信号通路相关基因的表达。结果表明,Aop2为西瓜食酸菌一个含有GNAT结构域的特异T3SE,其在与寄主黄瓜互作中发挥毒性因子功能,在与烟草互作中参与调控植物细胞死亡及PTI和植物激素相关抗病防卫反应。

小鼠成肌细胞低氧/复氧模型的建立及验证

目的:构建体外小鼠成肌细胞间歇性低氧/复氧模型并验证。方法:设定三气培养箱的混合气中1%或4%O2含量为低氧培养条件,二氧化碳培养箱中的条件为复氧条件,将小鼠成肌细胞(C2C12)分别按不同氧浓度(1%和4%)及复氧循环周期(6 h和8 h)处理,结束后观察细胞增殖情况,测定细胞培养液中葡萄糖、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase, LDH)及分泌性蛋白质分子--含Ⅲ型纤连蛋白结构域蛋白5(fibronectin type Ⅲ domain containing 5, FNDC5)浓度,测定细胞低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)蛋白的表达水平。结果:(1) 1%低氧浓度组较4%低氧浓度组细胞增殖慢、FNDC5含量低,培养液中葡萄糖浓度高、LDH活性及细胞中HIF-1α蛋白表达较高(P<0.05)。(2)1%低氧浓度条件下,与循环周期6 h组相比,循环周期8 h组细胞活力显著下降(P<0.05)。结论:本研究模拟了体外小鼠成肌细胞在不同低氧/复氧条件下的损伤状况及FNDC5的差异表达,1%低氧浓度和复氧循环周期6 h可作为较佳的体外C2C12细胞实验模型建立条件。