外源基因pheA、aroG和tyrB在苯丙氨酸合成途径中的共表达

利用基因工程技术提高了短杆菌的苯丙氨酸合成途径中关键酶活性 ,大幅度地增加了生物合成苯丙氨酸的产量。首先采用聚合酶链反应 (PCR)从大肠杆菌的氟代苯丙氨酸抗性变异菌株基因组中扩增到与苯丙氨酸合成相关的aroG ,pheA和tyrB 3个基因。其中aroG编码 3 脱氧 2 阿拉伯庚酮糖 7 磷酸合成酶 (DS) ,pheA编码双功能酶蛋白 分枝酸变位酶 (CM)和预苯酸脱水酶 (PD) ,tyrB编码转氨酶 (AT)。设计不同的酶切位点 ,利用质粒pUC118的多克隆位点 ,将 3个基因按不同的顺序组合串联 ,然后插入穿梭质粒pCZ 10 ,导入短杆菌中表达。结果表明 3个大肠杆菌基因在短杆菌中能够表达。其中以aroG pheA tyrB顺序串联而构建的黄色短杆菌工程菌株1311 GAB中的DS酶活力提高 4 5倍 ,CM提高 4 2倍 ,PD提高 2 7倍 ,AT提高 3 2倍 ;它的苯丙氨酸合成量提高2 35倍。

茶树内生草螺菌ZXN111生长素合成及其对云抗-10号植物的促生功能

【目的】以紫娟茶树分离的内生菌水生草螺菌ZXN111为研究对象,通过分子遗传学方法证实该菌株植物生长素吲哚3-乙酸(IAA)合成的主要分子途径。【方法】参考草螺菌基因组信息中IAA合成基因簇,选取与IAA合成密切相关的候选基因,即芳香族氨基酸转氨酶基因(tyrb),通过基因插入突变与基因互补方法,结合茶树组培苗体内促生能力分析,初步验证水生草螺菌生长素合成的主要机制。【结果】植物生长素IAA合成候选基因tyrb突变后,突变株tyrb::pK19mobΩ2HMB 48 h的IAA合成量显著低于野生型菌株ZXN111,且tyrb基因互补后,互补株tyrb::pK19mobΩ2HMB(+)的IAA合成能力得到了显著恢复。茶树促生实验发现,突变株tyrb::pK19mobΩ2HMB接种组的茶树组培苗根长、根重及植株鲜重指标上均显著低于野生菌处理组。【结论】水生草螺菌ZXN111有多条IAA合成途径,其中的吲哚-3-丙酮酸(IPA)是最主要途径,其生长素合成对寄主茶树具有显著的促生功能。