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大肠杆菌pheA与tyrB基因的克隆与串联表达
被引量:
2
1
作者
彭永济
黄伟达
+2 位作者
沈水源
江培
范长胜
《复旦学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
1996年第6期643-648,共6页
为探讨用基因工程的手段改良苯丙氨酸的发酵菌株,采用聚合酶链反应(PCR)的方法,从大肠杆菌总DNA中克隆得到了编码苯丙氨酸合成途中的两个关键酶基因--即分枝酸变位酶(CM)/预苯酸脱水酶(PD)基因pheA与苯丙氨酸...
为探讨用基因工程的手段改良苯丙氨酸的发酵菌株,采用聚合酶链反应(PCR)的方法,从大肠杆菌总DNA中克隆得到了编码苯丙氨酸合成途中的两个关键酶基因--即分枝酸变位酶(CM)/预苯酸脱水酶(PD)基因pheA与苯丙氨酸转氨酶(PAT)基因tyrB,在大肠杆菌中进行了这两个基因的单个和串联表达。pheA和tyrB基因分别都能在λ噬菌体的P。启动子之后得到较大量的表达,在SDS-PAGE上出现清晰的条带,使表达菌体的蛋白抽提物中CM/PD和PAT的比活分别提高了14.1倍/7.9倍和3.5倍.当pheA和tyrB以tyrB-pheA的形式进行串联表达时,酶的比活分别提高了4.2倍/2.4倍和2.5倍;而以pheA-tyrB的形式串联表达时,三种酶的比活分别提高了17.5倍/8.7倍和3.3倍.结果表明,后一种串联方式的表达效果较好.
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关键词
苯丙氨酸
pheA
基因
tyrb基因
克隆
发酵
原文传递
用于生产L-苯丙氨酸的基因工程菌的构建
被引量:
4
2
作者
史燕东
吴梧桐
+2 位作者
周艳
张玉彬
龚韬
《药物生物技术》
CAS
CSCD
1994年第1期8-13,共6页
本文报道用含tyrB基因(在大肠杆菌中编码芳香族氨基酸转氨酶)的质粒pKB7转化不同的突主菌,筛选出CTB2菌(pKB7转化JM107得到)表达的芳香族氨基酸转氨酶活力最高。进一步研究证明CTB2菌在菌浓度为20mg...
本文报道用含tyrB基因(在大肠杆菌中编码芳香族氨基酸转氨酶)的质粒pKB7转化不同的突主菌,筛选出CTB2菌(pKB7转化JM107得到)表达的芳香族氨基酸转氨酶活力最高。进一步研究证明CTB2菌在菌浓度为20mg/ml,温度30℃,反就60分钟.能催化苯丙酮酸加氨生成大量的L-苯内氮酸,而没有付产物酪氨酸生戊。以从CTB2菌中提取纯化出的质粒为模板,经PCR扩增反应可以得到约长1.2kb的tyrB基因片段,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验表明CTB2菌可溶性蛋白在分子量约40000,有一条明显加深的蛋白区带,这与理论估算的芳香族氨基酸转氨酶的分子量43000基本一致。而JM107和含pKK233-2空质粒的JM107在该位点的区带则没有加深,该加深区带的蛋白含量占到总溶性蛋白的20%左右。
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关键词
L-苯丙氨酸
CTB2菌
tyrb基因
基因
工程
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职称材料
茶树内生草螺菌ZXN111生长素合成及其对云抗-10号植物的促生功能
被引量:
6
3
作者
曾秀丽
王志
+3 位作者
罗利
王旭
陈宣钦
周育
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第10期2198-2210,共13页
【目的】以紫娟茶树分离的内生菌水生草螺菌ZXN111为研究对象,通过分子遗传学方法证实该菌株植物生长素吲哚3-乙酸(IAA)合成的主要分子途径。【方法】参考草螺菌基因组信息中IAA合成基因簇,选取与IAA合成密切相关的候选基因,即芳香族氨...
【目的】以紫娟茶树分离的内生菌水生草螺菌ZXN111为研究对象,通过分子遗传学方法证实该菌株植物生长素吲哚3-乙酸(IAA)合成的主要分子途径。【方法】参考草螺菌基因组信息中IAA合成基因簇,选取与IAA合成密切相关的候选基因,即芳香族氨基酸转氨酶基因(tyrb),通过基因插入突变与基因互补方法,结合茶树组培苗体内促生能力分析,初步验证水生草螺菌生长素合成的主要机制。【结果】植物生长素IAA合成候选基因tyrb突变后,突变株tyrb::pK19mobΩ2HMB 48 h的IAA合成量显著低于野生型菌株ZXN111,且tyrb基因互补后,互补株tyrb::pK19mobΩ2HMB(+)的IAA合成能力得到了显著恢复。茶树促生实验发现,突变株tyrb::pK19mobΩ2HMB接种组的茶树组培苗根长、根重及植株鲜重指标上均显著低于野生菌处理组。【结论】水生草螺菌ZXN111有多条IAA合成途径,其中的吲哚-3-丙酮酸(IPA)是最主要途径,其生长素合成对寄主茶树具有显著的促生功能。
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关键词
茶树内生菌
水生草螺菌
生长素合成
tyrb基因
原文传递
题名
大肠杆菌pheA与tyrB基因的克隆与串联表达
被引量:
2
1
作者
彭永济
黄伟达
沈水源
江培
范长胜
机构
上海微生物和微生物工程系
出处
《复旦学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
1996年第6期643-648,共6页
基金
国家八五攻关项目
文摘
为探讨用基因工程的手段改良苯丙氨酸的发酵菌株,采用聚合酶链反应(PCR)的方法,从大肠杆菌总DNA中克隆得到了编码苯丙氨酸合成途中的两个关键酶基因--即分枝酸变位酶(CM)/预苯酸脱水酶(PD)基因pheA与苯丙氨酸转氨酶(PAT)基因tyrB,在大肠杆菌中进行了这两个基因的单个和串联表达。pheA和tyrB基因分别都能在λ噬菌体的P。启动子之后得到较大量的表达,在SDS-PAGE上出现清晰的条带,使表达菌体的蛋白抽提物中CM/PD和PAT的比活分别提高了14.1倍/7.9倍和3.5倍.当pheA和tyrB以tyrB-pheA的形式进行串联表达时,酶的比活分别提高了4.2倍/2.4倍和2.5倍;而以pheA-tyrB的形式串联表达时,三种酶的比活分别提高了17.5倍/8.7倍和3.3倍.结果表明,后一种串联方式的表达效果较好.
关键词
苯丙氨酸
pheA
基因
tyrb基因
克隆
发酵
Keywords
phenylalanine
PCR
pheA
tyrb
cloning
expression
分类号
TQ922.9 [轻工技术与工程—发酵工程]
Q789 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
用于生产L-苯丙氨酸的基因工程菌的构建
被引量:
4
2
作者
史燕东
吴梧桐
周艳
张玉彬
龚韬
机构
中国药科大学生物技术中心
出处
《药物生物技术》
CAS
CSCD
1994年第1期8-13,共6页
文摘
本文报道用含tyrB基因(在大肠杆菌中编码芳香族氨基酸转氨酶)的质粒pKB7转化不同的突主菌,筛选出CTB2菌(pKB7转化JM107得到)表达的芳香族氨基酸转氨酶活力最高。进一步研究证明CTB2菌在菌浓度为20mg/ml,温度30℃,反就60分钟.能催化苯丙酮酸加氨生成大量的L-苯内氮酸,而没有付产物酪氨酸生戊。以从CTB2菌中提取纯化出的质粒为模板,经PCR扩增反应可以得到约长1.2kb的tyrB基因片段,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验表明CTB2菌可溶性蛋白在分子量约40000,有一条明显加深的蛋白区带,这与理论估算的芳香族氨基酸转氨酶的分子量43000基本一致。而JM107和含pKK233-2空质粒的JM107在该位点的区带则没有加深,该加深区带的蛋白含量占到总溶性蛋白的20%左右。
关键词
L-苯丙氨酸
CTB2菌
tyrb基因
基因
工程
Keywords
tyrb
pKB7
JM107
L-phenylalanine
CTB2
分类号
R977.4 [医药卫生—药品]
TQ464.7 [化学工程—制药化工]
下载PDF
职称材料
题名
茶树内生草螺菌ZXN111生长素合成及其对云抗-10号植物的促生功能
被引量:
6
3
作者
曾秀丽
王志
罗利
王旭
陈宣钦
周育
机构
安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室
上海大学上海市能源作物育种与应用重点实验室
昆明理工大学生命科学与技术学院
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第10期2198-2210,共13页
基金
安徽省自然科学基金(1608085QC57)
上海市能源作物育种与应用重点实验室开放基金
茶树生物学与资源利用国家重点实验室开放基金(SKLTOF20190110)。
文摘
【目的】以紫娟茶树分离的内生菌水生草螺菌ZXN111为研究对象,通过分子遗传学方法证实该菌株植物生长素吲哚3-乙酸(IAA)合成的主要分子途径。【方法】参考草螺菌基因组信息中IAA合成基因簇,选取与IAA合成密切相关的候选基因,即芳香族氨基酸转氨酶基因(tyrb),通过基因插入突变与基因互补方法,结合茶树组培苗体内促生能力分析,初步验证水生草螺菌生长素合成的主要机制。【结果】植物生长素IAA合成候选基因tyrb突变后,突变株tyrb::pK19mobΩ2HMB 48 h的IAA合成量显著低于野生型菌株ZXN111,且tyrb基因互补后,互补株tyrb::pK19mobΩ2HMB(+)的IAA合成能力得到了显著恢复。茶树促生实验发现,突变株tyrb::pK19mobΩ2HMB接种组的茶树组培苗根长、根重及植株鲜重指标上均显著低于野生菌处理组。【结论】水生草螺菌ZXN111有多条IAA合成途径,其中的吲哚-3-丙酮酸(IPA)是最主要途径,其生长素合成对寄主茶树具有显著的促生功能。
关键词
茶树内生菌
水生草螺菌
生长素合成
tyrb基因
Keywords
tea plant endophyte
Herbaspirillum aquaticusm
auxin synthesis
tyrb
gene
分类号
S571.1 [农业科学—茶叶生产加工]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大肠杆菌pheA与tyrB基因的克隆与串联表达
彭永济
黄伟达
沈水源
江培
范长胜
《复旦学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
1996
2
原文传递
2
用于生产L-苯丙氨酸的基因工程菌的构建
史燕东
吴梧桐
周艳
张玉彬
龚韬
《药物生物技术》
CAS
CSCD
1994
4
下载PDF
职称材料
3
茶树内生草螺菌ZXN111生长素合成及其对云抗-10号植物的促生功能
曾秀丽
王志
罗利
王旭
陈宣钦
周育
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
6
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