uPA基因缺失型小鼠与野生型小鼠肝纤维化模型的比较研究

目的分别采用C57BL／6J野生型（wT）和uPA基因缺失（uPA-／-）小鼠构建肝纤维化动物模型，并进行比较研究。方法选取成年雄性C57BL／6J野生型和uPA-／-小鼠，分为4组：对照组（WT，uPA-／-）和模型组（WT，uPA-／-），每组10只。模型组小鼠腹腔注射10％CCl40．15ml，对照组小鼠腹腔注射橄榄油0．15ml，每周2次，连续4周和6周。测定动物血清中ALT、AST、ALB及A／G等生化指标；盐酸水解法测定肝组织羟脯氨酸（Hyp）；用放射免疫法测定血清Ⅲ型前胶原蛋白（PCⅢ）含量；用HE染色及Masson三色胶原染色观察肝组织病理学改变。结果造模4周和6周时，无论是wT模型组小鼠还是uPA-／-模型组小鼠血清ALT和AST活性均较对照组小鼠显著升高，ALB含量降低（P〈0．01）；造模4周时，仅见uPA-／-小鼠的A／G含量降低（P〈0．01）。造模4周和6周时，uPA-／-模型组小鼠血清PCⅢ水平和肝脏组织Hyp含量较对照组显著升高（P〈0．01）；造模6周时，wT模型组小鼠才出现血清PCⅢ水平和肝脏组织Hyp含量升高（P〈0．01），且升高值明显低于uPA-／-模型组小鼠。病理组织学观察显示，uPA-／-模型组的肝脏纤维化程度比wT模型组明显严重。结论与WT小鼠相比，采用uPA-／-小鼠建立肝纤维化动物模型的造模周期明显缩短，肝纤维化程度更严重。

uPA-/-小鼠肝纤维化模型中的a-SMA、MMP13表达分析与模型评价

目的采用uPA基因缺失（uPA-/-）小鼠构建肝纤维化动物模型，经a-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）与金属基质蛋白酶-13（MMP13）的表达分析，评价其可行性。方法选取成年雄性BL／6J野生型和uPA-/-基因缺失型小鼠，分为4组：对照组（Con—WT，Con—uPA-/-）和模型组（Mod—WT，Mod—uPA-/-），每组20只。模型组小鼠腹腔注射10％CCl4，对照组小鼠腹腔注射橄榄油，每周2次，连续6周，诱导小鼠肝纤维化。用Real—time PCR方法检测小鼠肝脏组织中a—SMA和MMP13的mRNA表达，Western blot及免疫组化分析a-SMA和MMP13的蛋白表达。结果Real—time PCR结果显示，uPA乒小鼠的肝脏中a-SMA、MMP13的mRNA表达量显著高于M小鼠；Western blot结果显示，a-SMA蛋白和MMP13蛋白在对照组小鼠肝脏中几乎不表达，在Mod—WT中有少量表达，在Mod-uPA-／-中表达明显增多：免疫组化结果显示，Mod-uPA-／-的a-SMA和MMP13表达高于Mod-WT。结论a—SMA的mRNA和蛋白表达在uPA-／-小鼠中均明显升高，uPA基因的缺失促进了肝星型细胞向肌成纤维细胞的转化，从而加速了细胞外基质蛋白在肝脏中的沉积；MMP13蛋白表达在肝纤维化模型小鼠中均有明显升高。uPA基因缺失（uPA-/-）小鼠是建立肝纤维化模型的易感品系。

尿激酶型纤溶原激活物基因缺失型(uPA^(-/-))小鼠肝纤维化模型的病理学研究

目的采用uPA基因缺失(uPA-/-)小鼠构建肝纤维化动物模型,并进行病理学比较研究。方法选取成年雄性BL/6J野生型和uPA-/-基因缺失型小鼠,分为4组:对照组(WT,uPA-/-)和模型组(WT,uPA-/-),每组10只。模型组小鼠腹腔注射10%CCl40.15 ml,对照组小鼠腹腔注射橄榄油0.15 ml,每周2次,连续6周。称取动物体重和肝脏等脏器重量,计算脏器系数;取肝脏做大体病理观察;用HE染色和Masson三色胶原染色观察组织病理学改变;并进行电镜超微结构观察。结果与野生模型组小鼠相比,uPA-/-模型组小鼠的肝脏纤维化程度更加严重。表现为肝脏重量和肝脏系数的显著增加(P>0.05);大体观察肝脏肿大、色灰暗发白、出现颗粒状结节;HE染色、Masson染色和电镜超微结构检查均提示uPA-/-模型组小鼠肝细胞破坏严重,胶原纤维沉积更广泛,并形成了假小叶。结论 uPA-/-模型组的肝脏纤维化程度比WT模型组明显严重,uPA-/-小鼠是建立肝纤维化模型的易感品系。