既往研究发现,SMAD特异性E3泛素蛋白连接酶1(SMAD specific E3 ubiquitin protein ligase 1,SMURF1)通过其E3泛素连接酶活性介导自噬进程,然而SMURF1的泛素化底物蛋白质仍有待进一步挖掘。本文利用免疫共沉淀(Co-IP)联合蛋白质谱分析捕...既往研究发现,SMAD特异性E3泛素蛋白连接酶1(SMAD specific E3 ubiquitin protein ligase 1,SMURF1)通过其E3泛素连接酶活性介导自噬进程,然而SMURF1的泛素化底物蛋白质仍有待进一步挖掘。本文利用免疫共沉淀(Co-IP)联合蛋白质谱分析捕获并鉴定THP-1细胞中SMURF1的相互作用蛋白质集合物,发现在THP-1细胞中SMURF1可与222种蛋白质物理性结合,RNA腺苷脱氨酶1(adenosine deaminase acting on RNA 1,ADAR1)具有较高的肽段结合分数。构建SMURF1过表达载体并转染到HEK-293T细胞中,Co-IP和Western印迹检测验证外源性SMURF1与内源性ADAR1存在相互作用。qRT-PCR和Western印迹检测结果显示,在HEK-293T细胞中过表达SMURF1后ADAR 1 mRNA水平差异无统计学意义、蛋白质水平明显降低(P<0.05)。用放线菌酮(CHX)分别处理正常和过表达SMURF1的HEK-293T细胞,Western印迹检测显示,过表达SMURF1后ADAR1的半衰期缩短(P<0.05)。进一步在HEK-293T细胞中共转染泛素(Ub)过表达载体和SMURF1过表达载体,通过Co-IP和Western印迹检测结果证实,过表达SMURF1后ADAR1的多聚泛素化水平显著增加(P<0.05)。在蛋白酶体抑制剂(MG132)作用后,Western印迹检测结果表明,蛋白酶体降解途径受抑制后SMURF1对ADAR1的负调控作用减弱(P<0.05)。本研究表明,SMURF1可以与ADAR1相互作用,催化ADAR1的多聚泛素化修饰并介导其蛋白酶体途径降解,为探索SMURF1通过影响ADAR1蛋白质稳定性而具备的多种生物学功能提供理论基础。展开更多
目的:研究泛素特异性肽酶1(ubiquitin specific peptidase 1,USP1)在卵巢癌中的表达及其与患者临床病理特征的相关性,探讨USP1对卵巢癌细胞恶性表型的影响。方法:生物信息学分析USP1在卵巢癌患者中的表达水平及与患者临床分期的关系;免...目的:研究泛素特异性肽酶1(ubiquitin specific peptidase 1,USP1)在卵巢癌中的表达及其与患者临床病理特征的相关性,探讨USP1对卵巢癌细胞恶性表型的影响。方法:生物信息学分析USP1在卵巢癌患者中的表达水平及与患者临床分期的关系;免疫组化检测USP1在卵巢癌患者和正常卵巢组织中的表达情况,分析其表达水平与患者临床特征之间的关系;通过慢病毒感染的方式构建过表达USP1的SKOV3细胞株,利用CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力,利用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果:卵巢癌组织中的USP1表达水平明显高于正常卵巢组织,并与卵巢癌患者病理类型、腹膜转移以及原位肿瘤的大小或侵犯程度相关,与Ki67、ER、PR、P53的表达水平不相关;体外实验结果表明USP1促进卵巢癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。结论:USP1在卵巢癌组织中表达增强,并与患者病理类型、腹膜转移以及临床分期相关,USP1促进卵巢癌细胞恶性表型进展。展开更多
文摘既往研究发现,SMAD特异性E3泛素蛋白连接酶1(SMAD specific E3 ubiquitin protein ligase 1,SMURF1)通过其E3泛素连接酶活性介导自噬进程,然而SMURF1的泛素化底物蛋白质仍有待进一步挖掘。本文利用免疫共沉淀(Co-IP)联合蛋白质谱分析捕获并鉴定THP-1细胞中SMURF1的相互作用蛋白质集合物,发现在THP-1细胞中SMURF1可与222种蛋白质物理性结合,RNA腺苷脱氨酶1(adenosine deaminase acting on RNA 1,ADAR1)具有较高的肽段结合分数。构建SMURF1过表达载体并转染到HEK-293T细胞中,Co-IP和Western印迹检测验证外源性SMURF1与内源性ADAR1存在相互作用。qRT-PCR和Western印迹检测结果显示,在HEK-293T细胞中过表达SMURF1后ADAR 1 mRNA水平差异无统计学意义、蛋白质水平明显降低(P<0.05)。用放线菌酮(CHX)分别处理正常和过表达SMURF1的HEK-293T细胞,Western印迹检测显示,过表达SMURF1后ADAR1的半衰期缩短(P<0.05)。进一步在HEK-293T细胞中共转染泛素(Ub)过表达载体和SMURF1过表达载体,通过Co-IP和Western印迹检测结果证实,过表达SMURF1后ADAR1的多聚泛素化水平显著增加(P<0.05)。在蛋白酶体抑制剂(MG132)作用后,Western印迹检测结果表明,蛋白酶体降解途径受抑制后SMURF1对ADAR1的负调控作用减弱(P<0.05)。本研究表明,SMURF1可以与ADAR1相互作用,催化ADAR1的多聚泛素化修饰并介导其蛋白酶体途径降解,为探索SMURF1通过影响ADAR1蛋白质稳定性而具备的多种生物学功能提供理论基础。
文摘目的 研究T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(TIM-3)及乳腺癌易感基因相关蛋白1(BAP1)、泛素特异性蛋白酶39(USP39)与早期胃癌免疫浸润的关系。方法 选取2019年4月至2021年12月于我院行内镜下黏膜剥离术(ESD)治疗的87例早期胃癌患者,收集其术后病理组织及其癌旁组织;采用免疫组织化学法检测组织TIM-3、BAP1、USP39及CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD68^(+)阳性表达,实时荧光定量PCR法检测其mRNA表达;采用Spearman法分析相关性;并比较TIM-3、BAP1、USP39阳性表达的病理参数,随访统计阴阳性表达者生存时间,COX回归分析影响预后的危险因素。结果 TIM-3、BAP1、USP39在胃癌组织中阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05)。胃癌组织TIM-3 m RNA、BAP1 m RNA、USP39 mRNA表达量高于癌旁组织(P<0.05)。胃癌组织中CD3^(+)、CD4^(+)阳性率高于癌旁组织,CD8^(+)、CD68^(+)阳性表达率低于癌旁组织(P<0.05)。TIM-3、BAP1、USP39阳性表达在年龄、性别方面,无统计学意义(P>0.05);在分化程度、淋巴结转移方面,具有统计学意义(P<0.05)。经Spearman分析显示,TIM-3、BAP1、USP39表达与CD3^(+)、CD4^(+)浸润量呈正相关(P<0.05),与CD8^(+)、CD68^(+)浸润量呈负相关(P<0.05)。术后随访1年,TIM-3、BAP1、USP39阳性表达者生存率分别为75.68%(56/74)、73.33%(44/60)、71.43%(40/56),阴性表达者分别为100.00%(13/13)、92.59%(25/27)、93.55%(29/31);阴阳性表达患者生存率差异有统计学意义(P<0.05)。经COX多因素分析显示,分化程度对胃癌预后无显著影响(P>0.05),淋巴结转移、TIM-3、BAP1、USP39阳性表达为影响预后的危险因素(P<0.05)。结论 TIM-3、BAP1、USP39在胃癌组织中阳性表达率高,其表达与组织免疫浸润有关,且TIM-3、BAP1、USP39阳性表达者预后差。
文摘目的:研究泛素特异性肽酶1(ubiquitin specific peptidase 1,USP1)在卵巢癌中的表达及其与患者临床病理特征的相关性,探讨USP1对卵巢癌细胞恶性表型的影响。方法:生物信息学分析USP1在卵巢癌患者中的表达水平及与患者临床分期的关系;免疫组化检测USP1在卵巢癌患者和正常卵巢组织中的表达情况,分析其表达水平与患者临床特征之间的关系;通过慢病毒感染的方式构建过表达USP1的SKOV3细胞株,利用CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力,利用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果:卵巢癌组织中的USP1表达水平明显高于正常卵巢组织,并与卵巢癌患者病理类型、腹膜转移以及原位肿瘤的大小或侵犯程度相关,与Ki67、ER、PR、P53的表达水平不相关;体外实验结果表明USP1促进卵巢癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。结论:USP1在卵巢癌组织中表达增强,并与患者病理类型、腹膜转移以及临床分期相关,USP1促进卵巢癌细胞恶性表型进展。
