泛素特异性蛋白酶53在结直肠癌中的表达及其对HCT116细胞的抑制作用

目的:探讨泛素特异性蛋白酶53(ubiquitin specific peptidase 53,USP53)在结直肠癌组织中的表达水平及其过表达对人结直肠癌HCT116细胞功能的影响。方法:运用Real-time PCR及IHC方法检测结直肠癌及癌旁组织中USP53的表达情况;利用UCSC CANCER BROWSER提供的TCGA数据库,检测USP53 mRNA表达水平与临床特征及预后的关系;HCT116细胞中瞬时过表达USP53,利用CCK-8及克隆形成实验检测HCT116细胞增殖变化。结果:免疫组化结果显示,USP53在癌旁组织中的表达显著高于肿瘤组织[91.67%(44/48)vs 18.75%(9/48),P<0.01]。癌旁组织中USP53 mRNA水平也高于癌组织[(0.85±0.32)vs(0.46±0.27),P<0.05]。组织中USP53 mRNA表达水平与预后有关,表达越低预后越差(P<0.05)。过表达USP53后,细胞克隆形成数目显著下降[(123±27.22)vs(338±55.24)个,P<0.01];CCK-8实验结果显示,肿瘤细胞增殖受到显著抑制[(0.14±0.01)vs(0.18±0.04),P<0.05;(0.23±0.01)vs(0.32±0.01),P<0.01;(0.45±0.03)vs(0.80±0.05),P<0.01;(0.83±0.03)vs(1.18±0.10),P<0.01]。结论:USP53在结直肠癌中表达下调与不良预后相关,USP53可抑制肿瘤细胞增殖,提示USP53可作为诊断及治疗结直肠癌的新靶标。

泛素特异性蛋白酶53稳定表达细胞株的构建

目的构建稳定过表达泛素特异性蛋白酶53(USP53)的食管癌Eca109细胞株。方法以GE公司购买的含USP53全长序列的质粒作为模板,使用聚合酶链反应(PCR)的方法扩增出USP53全长基因,将构建好的USP53慢病毒质粒和包装质粒共转染293T细胞获得浓缩慢病毒颗粒,再将慢病毒颗粒感染Eca109细胞,最后通过含有嘌呤霉素的培养基筛选稳定转染细胞株。结果过表达细胞株中的USP53的mRNA表达量(45.070±0.942)分别与对照组(1.091±0.075)及正常组(1.000±0.023)比较,差异均有统计学意义(P<0.05),Western blot实验显示过表达细胞株中标签蛋白HA明显高表达,对照组及正常组未见标签蛋白表达。结论成功构建人去泛素化酶USP53稳定高表达细胞株。