温针灸对兔膝骨关节炎软骨中ASC、Caspase-1和P2X7蛋白表达的影响

目的 观察温针灸对膝骨关节炎(KOA)模型兔关节软骨组织中凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、嘌呤能离子通道型受体7(P2X7)表达的影响,研究温针灸治疗KOA的作用机制。方法 取40只雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、抑制剂组和温针灸组,每组10只。除空白组外,其余各组采用经典右后肢膝关节伸直位,用石膏管型固定4周制备兔KOA模型。造模成功后,各组给予相应干预措施。应用Lequesne MG评分量表评估兔膝关节状态改变与行为学改变,HE染色观察膝关节软骨病理形态学改变,免疫组织化学法和Western blot法检测软骨组织中ASC、Caspase-1、P2X7蛋白的表达,免疫荧光检测Caspase-1蛋白的表达。结果 造模前,各组实验兔Lequesne MG评分差异无统计学意义(P>0.05);造模后,与空白组相比,其余组Lequesne MG评分均上升(P<0.05);干预治疗后,与模型组比较,温针灸组和抑制剂组评分降低(P<0.05)。HE染色显示,空白组软骨表面结构完整,软骨细胞排列均匀;模型组软骨表面粗糙不平,软骨受损明显,软骨细胞形态大小不一,排列紊乱;抑制剂组和温针灸组软骨表面相对光滑、完整,软骨细胞分布较为均匀,软骨层结构相对清晰。与空白组比较,模型组Mankin’s评分升高(P<0.05);与模型组比较,温针灸组和抑制剂组Mankin’s评分降低(P<0.05)。免疫组织化学法、免疫荧光及Western blot检测结果显示,与空白组比较,模型组ASC、Caspase-1、P2X7的表达均升高(P<0.05);与模型组比较,温针灸组和抑制剂组ASC、Caspase-1、P2X7的表达均降低(P<0.05);温针灸组和抑制剂组相比,ASC、Caspase-1、P2X7表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 温针灸可减轻兔KOA软骨损伤,其机制可能与ASC、Caspase-1、P2X7表达降低及细胞焦亡抑制有关。

人重组骨形态发生蛋白7通过下调半胱氨酸蛋白酶-1/焦孔素D信号通路抑制高糖诱导的近曲小管上皮细胞的焦亡

目的 观察人重组骨形态发生蛋白-7(recombinant human bone morphogenetic protein-7,rhBMP-7)对高糖诱导的人肾皮质近曲小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2)的焦亡和炎症反应的作用。方法 体外培养高糖(high glucose,HG)刺激的HK-2细胞模拟糖尿病肾病模型。分为正常浓度葡萄糖对照组(Control)、高浓度葡萄糖组(HG)、Control+rhBMP-7组、HG+rhBMP-7组。采用免疫荧光方法检测HK-2细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SAM)、焦孔素D(gasderminD, GSDMD)蛋白和焦孔素E(gasderminE, GSDME)蛋白;TUNEL染色检测细胞死亡情况;蛋白质印迹法检测各组HK-2细胞中焦亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、半胱氨酸蛋白酶-4(caspase-4)、半胱氨酸蛋白酶-5(caspase-5)、 N-GSDMD和GAPDH的表达;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组HK-2细胞培养上清液中炎症因子白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果 与Control组相比,高糖组HK-2细胞Tunel染色的阳性率明显增加,差异具有统计学意义(P<0.000 1),α-SMA蛋白和α-SMA mRNA表达量也显著增加(P<0.000 1),E-cadherin蛋白和Ecadherin mRNA表达量显著下降(P=0.000 6,P<0.000 1);HG组添加rhBMP-7后α-SMA蛋白和m RNA水平显著下降(P=0.011 7, P=0.002), E-cadherin蛋白和m RNA水平明显升高(P=0.001 5,P<0.000 1)。与对照组比较,HG组HK-2细胞GSDME/GSDMD蛋白的荧光信号明显增强。进而,HG组添加rhBMP-7后GSDME/GSDMD蛋白荧光信号显著减弱。同样,HG组HK-2细胞中焦亡相关蛋白caspase-1、caspase-4、caspase-5以及GSDMD的表达量显著高于对照组,差异明显(均P<0.001)。HG组添加rhBMP-7后焦亡相关蛋白的表达明显下降(分别P<0.001,P=0.002,P<0.001)。与对照组比较,HG组HK-2细胞培养上清液中IL-1β和IL-18蛋白浓度显著增加(均P<0.001)。进而导致rhBMP-7干预后HG组细胞上清液中IL-10和IL-1β蛋白浓度明显减少(P<0.001)。结论 rhBMP-7具有抑制HK-2细胞焦亡的作用,其通过调控caspase-1/GSDMD信号通路减缓高糖诱导的HK-2细胞焦亡。

USP7和DNMT1在乙肝相关性肝癌中的表达及意义

目的 :研究泛素特异性蛋白酶7(ubiquitin-specific proteinase, USP7)、DNA甲基化转移酶1(DNA methylation transferase 1, DNMT1)在慢性乙型病毒性肝炎(以下简称乙肝)相关性肝癌中的表达及临床意义。方法 :收集乙肝患者17例、乙肝肝硬化患者18例、乙肝相关性肝癌患者30例和健康体检者19例血清,采用ELISA法检测USP7、DNMT1、甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)的表达情况,并分析其临床意义。结果:肝癌患者血清AFP、USP7、DNMT1水平较健康体检者、乙肝及肝硬化患者高(P<0.05)。肝癌患者血清中USP7与肿瘤分期、Child-Pugh分级呈正相关(P<0.05),DNMT1与肿瘤分期、肿瘤个数呈正相关(P<0.05)。AFP、USP7、DNMT1均为乙肝相关性肝癌的影响因素(均P<0.05)。血清AFP、USP7、DNMT1水平均在肝细胞癌中有诊断效能(均P<0.05),且联合检测诊断效能高于单一检测。结论 :肝癌患者血清AFP、USP7、DNMT1水平较高,USP7、DNMT1与临床病理特征相关。三项指标联合测定能提高鉴别乙肝相关性肝癌的诊断效能。

ω-3脂肪酸联合跨膜型TNF-α对MCF-7细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨半胱氨酸蛋白酶(caspase)在ω-3脂肪酸联合细胞外源性跨膜型TNF-α诱导MCF-7细胞凋亡过程中的作用。方法带有脂肪酸受体反应元件的跨膜型TNF-α表达载体转染MCF-7细胞,经ω-3脂肪酸处理后,MTT比色法检测细胞增殖能力,DNA梯形带分析ω-3脂肪酸对细胞凋亡的影响,RT-PCR和W estern b lot方法检测细胞caspase-1、8和9基因的表达变化,应用caspase特异性底物检测肿瘤细胞caspase-8活性变化,观察caspase特异性抑制剂Ac-IETD-CHO对ω-3脂肪酸联合细胞外源性跨膜型TNF-α抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡的拮抗作用。结果与MCF-7细胞相比,MCF-7转染细胞经ω-3脂肪酸处理后,细胞增殖能力减弱,检测到明显的DNA梯形带,caspase-1、8、9基因表达增加,caspase-8活性增高,caspase抑制剂可以部分拮抗ω-3脂肪酸联合跨膜型TNF-α抑制肿瘤细胞增殖和诱导凋亡的发生。结论ω-3脂肪酸联合跨膜型TNF-α可以更有效地诱导MCF-7细胞凋亡,而上调caspase的表达和/或活性可能在此过程中发挥重要作用。

荧光定量RT-PCR检测早期宫颈鳞癌组织中MMP-7和CK20的表达

目的:检测宫颈癌组织中基质金属蛋白酶7(MMP-7)mRNA和细胞角蛋白(CK20)mRNA的表达水平,并探讨其临床意义。方法:采用实时荧光定量RT-PCR检测33例宫颈鳞癌和12例正常宫颈组织中MMP-7 mRNA和CK20 mRNA的表达水平。结果:MMP-7 mRNA在宫颈鳞癌组织中的表达水平高于正常宫颈组织(P=0.018),与宫颈鳞癌病理分级、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与临床分期、年龄因素无关(P均>0.05);CK20 mRNA在宫颈鳞癌组织中的表达水平高于正常宫颈组织(P=0.002),与宫颈鳞癌分期、病理分级、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与年龄无关(P>0.05);MMP-7 mRNA与CK20 mRNA之间存在正相关(r=0.427,P=0.026)。结论:MMP-7 mRNA及CK20 mRNA的高表达与宫颈鳞癌的侵袭转移有关。

乳腺癌中MMP-7和E-cad表达水平及意义

目的研究基质金属蛋白酶-7(MMP-7)和钙黏附素-E(E-cad)在乳腺导管原位癌和浸润性导管癌中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测MMP-7和E-cad在25例乳腺导管原位癌(DCIS)、68例浸润性导管癌(IDC)和17例正常乳腺组织(Control)中的表达,并进行相关分析。结果与对照组比较,MMP-7在乳腺导管原位癌和浸润性导管癌中的表达显著增高(P<0.05);而E-cad的表达明显减低(P<0.05),且MMP-7与E-cad间无相关关系(χ2=0.00,P=1.00);MMP-7及E-cad均与乳腺癌肿瘤分化程度及淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论 MMP-7和E-cad与乳腺导管原位癌和浸润性导管癌的发生发展相关。

NapsinA、CGA及CK7在肺癌患者中的表达及与临床病理的关系分析

目的:探讨天门冬氨酸蛋白酶A(NapsinA)、嗜铬粒蛋白A(CGA)及细胞角蛋白7(CK7)在肺癌患者中的表达及与临床病理的关系。方法:收集109例肺癌患者的癌组织及癌旁组织标本,检测NapsinA、CGA、CK7在癌组织及癌旁正常组织的表达情况,分析其表达与临床病理的关系。结果:NapsinA、CGA、CK7在肺癌组织中阳性率高于癌旁组织(P<0.05)。病理类型为肺腺癌、TNM分期越晚、存在淋巴结转移的患者肺组织内NapsinA阳性表达率越高,TNM分期越晚的患者肺组织内CGA阳性表达率越高,TNM分期越晚、存在淋巴结转移的患者肺组织内CK7阳性表达率越高。NapsinA、CGA、CK7阳性患者预后较差,中位生存期均低于NapsinA、CGA和CK7阴性患者(P<0.05)。结论:NapsinA、CGA、CK7可作为评估肺癌患者预后的重要生物标志物之一。

左西孟旦对脓毒性休克患者肾脏功能保护作用观察

目的观察左西孟旦对脓毒性休克患者肾脏功能保护作用。方法选取脓毒性休克32例,按照治疗方法不同将其分为观察组和对照组两组各16例。观察组先静脉滴注多巴酚丁胺24 h后,改用左西孟旦连续静脉滴注24 h;对照组持续静脉滴注多巴酚丁胺48 h。观察比较两组治疗前后血流动力学参数、左室射血分数(LVEF)、肾血流阻力指数(RI)、血乳酸、血肌酐清除率、尿胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP-7)、尿金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP-2)、其他相关指标,以及治疗期间不良反应发生情况。结果治疗前,两组血流动力学参数、LVEF、肾血流RI、血乳酸、血肌酐清除率及尿IGFBP-7、TIMP-2比较差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组心率(HR)和中心静脉压(CVP)均较治疗前降低;观察组LVEF和血肌酐清除率较治疗前升高,肾血流RI和血乳酸、尿IGFBP-7、TIMP-2较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。治疗后,观察组HR、CVP、肾血流RI、血乳酸及尿IGFBP-7、TIMP-2低于对照组,LVEF及血肌酐清除率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。观察组非连续性肾脏替代治疗患者24 h尿量多于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,两组均未出现相关不良反应。结论左西孟旦治疗脓毒性休克患者可以改善肾血流RI,增加肾脏叶间动脉血流,改善肾脏灌注,对肾脏功能有保护作用。

天花粉对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的研究天花粉对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法取对数生长期人乳腺癌MCF-7细胞以30,60,90,120μg·m L^(-1)的天花粉蛋白处理,作为实验组,对照组用等量的0.9%Na Cl处理,继续培养24,48,72h。观察并比较各组细胞形态学及细胞核凋亡形态学变化,以噻唑蓝(MTT)比色法检测各组人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制情况,分光光度法检测天花粉蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞胱天蛋白酶(caspase)-3和caspase-8表达的影响。结果实验组人乳腺癌MCF-7细胞呈现明显的细胞凋亡及核凋亡现象,且随天花粉蛋白质量浓度的增加,其细胞核凋亡现象越明显;干预24 h后,30,60,90,120μg·mL^(-1)实验组增殖抑制率分别为(1.61±0.94)%,(2.81±1.01)%,(7.05±1.03)%和(9.59±1.12)%;干预48 h后增殖抑制率分别为(2.13±1.01)%,(6.14±1.12)%,(9.05±1.09)%和(19.60±1.15)%;干预72 h后增殖抑制率分别为(3.28±1.07)%,(7.18±1.51)%,(18.39±1.81)%和(29.59±1.63)%。实验组人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制率随作用时间的延长及天花粉蛋白质量浓度的增大而逐渐升高(均P<0.01);90μg·m L^(-1)实验组24,48,72 h caspase-3分别为1.49±0.15,2.36±0.25,2.15±0.23;caspase-8分别为1.94±0.26,1.56±0.19,1.39±0.20。对照组人乳腺癌MCF-7细胞caspase-3及caspase-8随作用时间的延长无显著变化(均P>0.05),而90μg·mL^(-1)实验组caspase-3先升高后降低(P<0.05或P<0.01),以48 h时最高;caspase-8则逐渐降低(P<0.01);且各时间点90μg·m L^(-1)实验组caspase-3及caspase-8均显著高于对照组(均P<0.01)。结论天花粉蛋白可有效促进人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,抑制其增殖,且增殖抑制作用呈时间-剂量依赖性,其作用机制可能与上调人乳腺癌MCF-7细胞caspase-3及caspase-8表达相关。

短期运动预处理对大鼠脑缺血再灌注中炎症小体活化通路的影响

为观察4周运动预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血半暗带区嘌呤能受体7(P2X purinoceptor 7,P2RX7)、天冬氨酸半胱氨酸特异性蛋白酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase 1,Caspase-1)、天冬氨酸半胱氨酸特异性蛋白酶11(cysteinyl aspartate specific proteinase 11,Caspase-11)、消皮素D(gasdermin D,GSDMD)蛋白及炎性因子的影响,探讨运动预处理对脑缺血再灌注损伤产生保护作用的可能机制,将90只SPF级雄性SD大鼠(实验鼠80只,备用鼠10只)随机分为2组,即运动组和非运动组(40只/组)。运动预处理干预后,将运动组随机分成单纯运动组(P组,n=20)和运动预处理模型组(EM组,n=20),将非运动组随机分成假手术组(SS组,n=20)和模型组(CM组,n=20),采用线栓法对CM组和EM组大鼠进行大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)缺血再灌注模型制备。在大鼠脑缺血再灌注24 h后采用Longa评分标准对其进行神经行为学评分。4周后,神经行为学评分显示,CM组大鼠分数显著高于SS组(P<0.05);红四唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色显示,CM组、EM组大鼠患侧大脑出现明显的梗死灶(P<0.05);TTC染色、苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色显示,CM组大鼠患侧大脑梗死面积、组织坏死区域较大,而EM组大鼠患侧大脑梗死程度较CM组有所改善(P<0.05);CM组大鼠血清IL-1β和IL-18水平上升,EM组IL-1β和IL-18水平显著低于CM组(P<0.01);与CM组相比,EM组大鼠脑内P2RX7、Caspase-1、Caspase-11、GSDMD蛋白表达明显下降(P<0.05)。该研究提示,4周运动预处理可能对脑缺血再灌注后起到保护作用。