进境美国大豆上Diaporthe ueckerae的检测鉴定

挑选美国进境的黄大豆中变色、皱缩和腐烂等症状的病籽粒进行分离培养,获得1株纯化的间座壳属真菌Duc-0530,该菌株菌落初期白色平铺,气生菌丝少,培养后期背面中央呈黑褐色。病菌α型分生孢子无色透明、光滑、纺锤形至椭圆形,无隔膜,有2个油球,大小为(5~5.8)~(6.5~7.5)μm×(2~2.3)~3.0μm(平均5.86μm×2.54μm)。利用真菌5个基因片段(ITS、β-tubulin、EF-1α、HIS和CAL)的通用引物对菌株Duc-0530进行PCR扩增和序列分析,发现该菌株的5个基因的序列与GenBank中Diaporthe ueckerae的同源性高,达到98%~100%。系统发育分析结果显示菌株Duc-0530与D. ueckerae以自展支持率100%聚集在同一分支。该菌株接种大豆和甜瓜出现茎基部位溃疡,叶片呈变褐皱缩症状。根据上述检测结果,将菌株Duc-0530鉴定为D. ueckerae。该病菌是国际上大豆生产中新发危险性病菌,为我国口岸在美国大豆中的首次截获报道。

石碌含笑枯梢病菌的鉴定及生物学特性

【目的】对广东省徐闻县2~3年生石碌含笑嫁接苗枯梢病进行病原菌的分离鉴定,分析其致病性及生物学特性,为该病的诊断和防控提供理论基础。【方法】将病枝表皮削除后,取病组织接种到PDA培养基中,25~30℃黑暗培养后,得到纯培养物,将其接种到健康寄主,测定其致病性。将病原菌的ITS、组蛋白HIS、延长因子TEF和微管蛋白TUB的基因扩增测序后,在Gen Bank进行序列比对,采用邻接法(NJ)和贝叶斯法(BI)进行多基因位点系统发育分析,确定病原菌与近缘种的关系。根据系统发育分析以及形态学特征对病原菌进行种类鉴定。将菌饼接种到培养基中,测定不同培养基、温度、p H、碳氮源和光照处理对病原菌的菌丝生长和形成分生孢子座的影响。【结果】从病组织中分离到的菌株可引起健康植株发病,其形态学特性与间座壳菌一致。Gen Bank比对结果显示,病原菌ITS序列与间座壳菌几个种的序列同源性高于99%,而HIS、TEF和TUB基因序列与Diaporthe ueckerae的序列同源性为100%。系统发育分析结果显示石碌含笑病原菌与Diaporthe ueckerae以自展支持率99%和后验概率1.00聚集在同一分枝。病原菌在不同培养基、温度、碳氮源条件下,菌丝生长速度和产生分生孢子座数量差异显著,在p H 4-8时菌丝生长和产分生孢子座差异不明显,不同光处理对病原菌生长影响差异不显著,但对产生分生孢子座影响差异显著,12 h光照+12 h黑暗处理与12 h光照+12 h黑暗+10 min紫外线处理不利于形成分生孢子座。【结论】石碌含笑枯梢病的病原菌是D.ueckerae Udayanga et Castlebury 2015,对环境因子适应性广,仅在低于15℃和高于35℃时不产生分生孢子座。