EFFECTS OF ULTRASONIC TREATMENT ON FEMALE GAMETOPHYTES OF LAMINARIA JAPONICA (PHAEOPHYTA)

This study on the effects of ultrasonic treatment on female gametophytes of Laminariajaponica showed that:1. Ultrasonic treatment had shortening effect on filaments of female gametophytes. Within certainperiod of time, the average length of filamentous female gametophytes was shortened.2. Ultrasonic treatment had emptying effect on cells. The number of empty cells increased with timeof treatment. Ultrasonic treatment had harmful effect on cells.3. Ultrasonic treatment could break down cell walls. The combination of frequency of 20 kHz, out-put of 15 W, 40 s and 60 s of treatment was best for this purpose. After ultrasonic treatment, the regner-ation of female gametophytes into sporophytes was effected. Female gametophytes could not recover aftertoo long period of treatment.

超声波对海带配子体克隆的作用

研究了超声波对海带配子体克隆粉碎效果、存活率及生长发育的作用。实验表明：在４００Ｗ处理３０ｓ后再用２００Ｗ处理６０ｓ，海带配子体克隆簇状体的粉碎效果较好：培养７天时细胞日生长速率为０．１５７；大量扩增７天雌、雄配子体克隆的鲜重增重最大为 ３．４７０ｇ：培养 １４天雌性配子体克隆发育率为 ５２．１％。可作为一种快速、高效、简便的粉碎海带配子体克隆簇状体，制备单细胞悬液的方法。

三十烷醇对海带三个品系雌配子体克隆生长和发育的影响

以海带雌配子休克隆为实验材料，通过施用三十烷醇处理。结果表明，三个品系在供试条件下，LH36生长最好，LH30发育率最高。它们对TA的反应为浓度在0．5～1．0×10-5mg／L时，都有促生长作用，其中LH30反应最敏感，LH10次之。浓度在1．0×10-5mg／L时，发育率最高，其中LH30发育率为51．5％，LH10为18．0％。LH36对各浓度处理的发育反应，差异都不明显。

海带雌配子体对无机碳的利用

采用pH漂移技术(pH drifttechnique) ,对海带雌配子体克隆的碳素营养进行了研究。结果表明 ,海带雌配子体对无机碳的利用能力较弱 ,其pH补偿点为8.85 ,CO2 补偿点为1.635μmol/L。与HCO- 3 利用有关的抑制剂 :Acetazolamide(Az) ,4′4′ diisothiocyanatosilbene 2 ,2 disulfonicacid(DIDS) ,4 acetamido 4′ isothiocyano 2 ,2′ stibene disulfonate(SITS)均未对海带雌配子体无机碳的利用产生任何影响 ,进一步说明了海带雌配子体只以游离的CO2 为无机碳源 ,不能利用HCO- 3;同时还发现 ,海带雌配子体利用无机碳的过程中 ,并未引起碱度的变化 ,从而可以用 pH指示密闭培养过程中无机碳的变化。

光对海带雌、雄配子体lhcf5和lhcf6基因相对转录量的影响

利用实时荧光定量PCR(Q-RT-PCR)方法分析了在不同光照强度、光质及有利于配子产生的条件下,lhcf5和lhcf6基因在海带(Laminaria japonica)雌、雄配子体中转录量的变化。不同光照强度条件下(光源为白光),lhcf5和lhcf6基因在黑暗中接近不转录;雌配子体在光照强度40μmol·m-2·s-1时转录量最高,而雄配子体的最高转录量出现在80μmol·m-2·s-1的光照强度处;高于此光照强度,2个基因的转录量都会随光照强度增加而降低。相对于同强度的白光来说,红光照射无论是短时间(3d)还是长时间(7d),都会促进2个基因的相对转录水平;蓝光对雌配子体中2个基因转录的促进作用不明显,而对它们在雄配子体中的转录有一定的促进作用。将海带配子体从营养生长转至有利于配子发生的条件下,雌、雄配子体lhcf5和lhcf6基因在第1天的转录量都明显增加;雌配子体在第4天以及第12天(lhcf6)或第14天(lhcf5)均显著增加,第6天及第10天接近不转录;雄配子体在第8天及第14天增加,第10天也近似不转录;发育阶段其他时间内的转录量都低于营养生长期的。结果表明,海带配子体lhcf5和lhcf6的转录受光诱导,其中红光的促进作用最明显;其转录可能因有利于配子体细胞叶绿体结构的完善及物质与能量的积累而利于细胞分裂与营养生长。

海带雌性原生质体的分离与培养

于1993年1月-1993年4月，为了制备遗传性纯一的基因工程受体，用酶法从海带雌配子体单性生殖系分离雌性单倍体原生质体。从皱纹盘鲍消化腺及消化器官提取出鲍酶，在250℃下、1％（W／V）的鲍酶与2％（W／V）的纤维素酶（OnozukaR－10）合用能有效解离单细胞和原生质体。海带雌性原生质体经2d培养再生了细胞壁。