Rapid Analysis of Four Alkaloids in Uncaria rhynchophylla by Core-Shell Column HPLC and Quantitative Analysis of Multi-Components by Single Marker(QAMS)

As a traditional herbal medicine,the major alkaloids in Uncaria rhynchophylla have been proven to have blood pressure-lowering and sedative effects.It is essential to develop an effective method for the determination of the major alkaloids in U.rhynchophylla.In this research,a rapid quantitative analysis involving multi-components analysis by a single marker strategy coupled with core-shell column HPLC was adopted to analyse four alkaloids(corynoxeine,isocorynoxeine,isorhynchophylline,rhynchophylline)in U.rhynchophylla.Isorhynchophylline was selected as the internal reference substance,the content of which was determined by the traditional external standard method.Relative correction factors(RCF)between isorhynchophylline and the other three alkaloids were calculated respectively.The results showed that the QAMS method had good robustness under different HPLC instruments.Nineteen batches of U.rhynchophylla were tested.No significant difference was observed between the results by QAMS and EMS(Correlation coefficient>0.99,p>0.05).The QAMS method could be employed as a rapid,effective technique for the quality control of U.rhynchophylla.

HPLC法测定新乐康片相关药材中8种活性成分含量

建立HPLC法同时测定新乐康片中三味原料药材钩藤、酸枣仁和萝芙木中钩藤碱、异钩藤碱、斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、育亨宾、阿义吗啉及利血平等8种活性成分的含量。采用Titank C18(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.4%磷酸水溶液(含0.05%三乙胺)为流动相,梯度洗脱,检测波长204 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃。上述三味药材相关成分之间分离度良好,在λ=204 nm条件下,其在分别的线性范围内与响应值之间的线性关系良好(R^(2)≥0.9990);8种活性成分的平均加样回收率98.37%~101.21%,RSD<2%,仪器精密度、供试品溶液的稳定性与方法重复性均良好。建立的HPLC法可一法对钩藤、酸枣仁和萝芙木三味中药材中8种活性成分含量进行测定,为药业在生产新乐康片前期选材上节约了测定时间,提高了生产效率,同时为新乐康片中活性成分HPLC含量测定方法的建立及其质量标准升级提供参考。

HPLC法测定不同商品规格桂林产钩藤中4种生物碱的含量

[目的]测定不同商品规格桂林产钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱的含量。[方法]采用岛津Inertsil ODS3色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.1%三乙胺(A)-乙腈(B),流速为1.0 ml/min,检测波长为245 nm,进样量为10μl;测定双钩、单钩、混钩(一级、二级)、钩藤枝等不同商品规格桂林产钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱4种生物碱的含量。[结果]钩藤碱含量由高到低依次是:钩藤枝>单钩>混钩(二级)>双钩>混钩(一级);异钩藤碱含量由高到低依次是:钩藤枝>单钩>混钩(二级)>双钩>混钩(一级);去氢钩藤碱含量由高到低依次是:双钩>混钩(一级)>混钩(二级)>钩藤枝>单钩;异去氢钩藤碱含量由高到低依次是:双钩>混钩(一级)>混钩(二级)>单钩>钩藤枝;四种生物碱总含量由高到低依次是:双钩>混钩(一级)>钩藤枝>混钩(二级)>单钩。[结论]本研究所用方法简便快捷,可为市场划分钩藤不同商品规格提供参考依据。

HPLC法测定钩藤提取物中钩藤碱的含量

[目的]测定钩藤提取物中有效成分钩藤碱的含量。[方法]采用HPLC法测定钩藤提取物中钩藤碱的含量,色谱柱为DiamonsilC18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为无水甲醇-水(60∶40,V/V)并含10 mmol/L三乙胺,冰醋酸调pH 7.5;柱温为30℃;流速为1.0ml/min;紫外检测波长为254 nm。[结果]钩藤碱浓度在11.0～110.0μg/ml范围内与峰面积的线性关系良好(R=0.999 6),平均回收率为96.84%,RSD为1.46%。[结论]该方法简单、快速、准确,可用于钩藤提取物中钩藤碱的含量测定。

HPLC法对钩藤超临界萃取物中钩藤碱的分析

通过超临界二氧化碳萃取技术(SFE-CO_2)和高效液相色谱法(HPLC),以甲醇-水(70∶30,V/V)为流动相,对钩藤碱进行分析。研究表明,方法回归方程为y=7.000 0×10^(-8)x-0.000 6(R^2=0.994),即钩藤碱浓度在0.015~0.022 mol/m L内呈良好的线性关系。该分析方法快速、简单、灵敏,具有良好的准确度和精密度,可用于钩藤碱常规分析检验。

RP-HPLC测定市售钩藤中钩藤碱的含量

目的:建立反相高效液相色谱测定市售钩藤中钩藤碱的方法。方法:KromosilTMC18柱;检测波长254nm;柱温:30℃;流速:1mL.min-1;流动相:甲醇:水(0.01mol/L三乙胺,冰醋酸调pH7.2)=70∶30;进样量:20μL。结果:在0.244～1.22μg范围内线性关系良好,r=0.9997,平均回收率为100.13%。6批市售钩藤药材钩藤碱含量为0.1349～0.2107mg/g。结论:市售钩藤药材中钩藤碱含量变化较大。该方法简便,结果准确,可有效控制钩藤质量。

HPLC法测定小儿七星茶口服液有效成分的含量

目的为制定小儿七星茶口服液的定量标准提供参考。方法采用高效液相色谱法测定有效成分钩藤碱和甘草苷的含量。结果钩藤碱在0.0258-0.258μg范围内有良好的线性关系,线性回归方程：y=1486205x-3621,r^2=0.9999;精密度、重复性、稳定性、回收率的RSD分别为0.12%、2.5%、1.5%、2.4%,样品平均含量达1.405 mg.L^-1。甘草苷在1.346-4.093μg范围内有良好的线性关系,线性回归方程：y=3E＋7x-37274,r^2=0.999;精密度、重复性、稳定性、回收率的RSD分别为2.63%、4.02%、2.71%、0.55%,样品平均含量达129.28 mg.L^-1。结论采用高效液相色谱法测定钩藤碱和甘草苷的含量可以作为小儿七星茶口服液的定量标准。

HPLC-ELSD法测定中药钩藤中钩藤碱的含量

目的建立中药钩藤中钩藤碱的高效液相色谱-蒸发散射检测器法(HPLC-ELSD)的测定方法。方法采用甲醇冷浸超声法处理钩藤药材,经0.22μm的滤膜过滤后进样分析;色谱柱为Diamonsil C18(4.6mm×200mm,5μm),流动相组成,乙腈:0.01mol/L醋酸铵=20∶80,采用梯度洗脱方式,乙腈比例在20min内从20%变为60%,流速为1.0mL/min,柱温为室温30℃,进样量为20μL。ELSD参数:飘移管温度105℃,载气(N2)流速3.0mL/min。结果钩藤碱测定的浓度范围内呈良好线性(r=0.999 0),加标回收率大于96.1%,日内、日间变异系数均小于8.0%,重复性试验RSD为4.7%,稳定性试验钩藤碱高、中、低浓度溶液室温48h内RSD为6.8%、7.2%、9.1%。结论该方法成功地应用于钩藤碱含量的测定,成为一个全面评价钩藤质量的新方法。

HPLC测定安神养血口服液中3种生物碱延胡索乙素、钩藤碱和异钩藤碱含量

目的:深入研究安神养血口服液(钩藤、金不换、制何首乌、首乌藤、松针)含量测定方法,为该药质量标准研究和完善提供科学依据。方法:HPLC测定该药中3种生物碱延胡索乙素、钩藤碱和异钩藤碱含量,色谱柱:依利特Kromasil C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm),流动相:甲醇-水(55∶45)(含0.01 mol/L三乙胺,用冰醋酸调pH值至7.5),柱温:25℃,15 min前检测波长为281 nm,15 min后为254 nm,流速1.0 mL/min。结果:延胡索乙素、钩藤碱、异钩藤碱平均回收率分别为98.47%,99.04%,98.75%,延胡索乙素在进样量0.01μg～0.10μg范围内、钩藤碱在进样量0.16μg～1.6μg范围内,异钩藤碱在进样量0.12μg～1.2μg范围内与峰面积呈良好线性关系。结论:该方法简便、快速和准确,可用于该药质量控制。

钩藤的HPLC指纹图谱研究

目的建立钩藤药材的HPLC色谱指纹图谱。方法以钩藤碱为参照物,采用HPLC法,色谱条件:Kro-mosil C18(250 mn×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-10 mmol磷酸二氢铵溶液,梯度洗脱进行色谱分离;检测波长:254nm;流速:1.0 ml.min-1;柱温:室温。结果 12批不同产地的钩藤药材中,除4批外,其余8批与系统生成的对照指纹图谱的相似度均在0.97以上;归纳出钩藤药材15个共有峰;通过与对照品的保留时间比较,11、12号峰分别为钩藤碱和异钩藤碱;不同产地钩藤药材中主要化学成分组成相似,但相对比例有明显的差异。结论所建立的方法简单可行,能有效控制钩藤药材的质量。

RP-HPLC法测定钩藤煎剂中钩藤碱含量及变化

[目的]测定钩藤中钩藤碱在沸水后下煎药法中煎出量及变化规律。[方法]采用RP-HPLC法,HypersilBDSC18柱,(150mm×4.6mm,5μm),以甲醇∶水(70∶30)为流动相,流速1.0ml/min,波长254nm,柱温25℃。[结果]钩藤碱在0.19μg～0.95μg范围内与峰面积线性关系良好r=0.9990。[结论]钩藤在沸水后下煎药法中,其钩藤碱在汤药中的含量在11.4min达高峰,其后汤药中钩藤碱的含量逐渐降低。

HPLC法测定中药钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的含量

目的：建立高效液相色谱法测定中药钩藤中有效成分钩藤碱和异钩藤碱的含量。方法：色谱柱Lichrospher C18（4.0＆#215;250 mm，5μm），流动相：甲醇：水（含10 mmol/L的三乙胺，冰醋酸调节pH值为7.4-7.6）=55：45，检测波长为254 nm，加入1%盐酸10μL作为改性剂。温度为25℃，测定钩藤碱和异钩藤碱的线性关系方程。结果：钩藤碱与异钩藤碱的回归方程分别为Y=9.2×10^4-0.281×10^4，Y=7.6×10^4-0.375×10^4，线性范围分别为0.100-1.60μg/mL（r=0.9999），0.211-1.379μg/mL（r=0.9998），钩藤碱的平均回收率为99.154%，异钩藤碱的平均回收率为99.40%。结论：HPLC法测定中药钩藤中两种成分的含量，方法简单、快速，精密度及稳定性好，可以用于控制中药材钩藤的品质。

HPLC测定大鼠血浆中钩藤碱的浓度

目的建立HPLC测定大鼠血浆中钩藤碱浓度的方法。方法色谱柱为ZORBAX SB C18柱（150mm×4.6 mm,5 m）。以甲醇-水（80：20）（含0.0025 mol.L-1三乙胺,冰乙酸调pH至7.5）为流动相,检测波长为254 nm,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,进样量为20 l。结果钩藤碱与内源性杂质有较好分离度,钩藤碱在0.39~12.50g/ml浓度范围内呈良好线性关系;最低检测浓度为0.39 g/ml;回收率大于95%;日内和日间RSD均小于7%。结论此方法准确可靠,可用于测定钩藤碱的血药浓度。

HPLC测定天麻钩藤饮中天麻素和松脂醇二葡萄糖苷的含量

目的:建立天麻钩藤饮中天麻素和松脂醇二葡萄糖苷的含量测定方法。方法:采用Inertsil ODS(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相乙腈(A)-0.2%磷酸水(B)进行梯度洗脱(0-20min,A:B=2:98;20-22min,A:B=2:98—A:B=11:89),流速为1.2mL/min,检测波长220nm,柱温30℃。结果:测定天麻素在19.3-193.2μg线性关系良好(r=0.9997),松脂醇二葡萄糖苷在6.12-61.2μg线性关系良好(r=0.9999),平均回收率分别为100.2%和98.5%。结论:本方法简便、准确,可同时测定天麻钩藤饮中天麻素和松脂醇二葡萄糖苷的含量。

建立2D-HPLC同时检测钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的方法

目的建立二维高效液相色谱法(2D-HPLC)同时检测钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱四种钩藤生物碱含量的方法。方法采用Aston SC2(3.5 mm×25 mm,5μm)一维色谱柱,Aston SH C_(18)(3.5 mm×10 mm,5μm)中间色谱柱,Aston SCB(4.6 mm×125 mm,5μm)分析色谱柱,一维流动相为CAA-1,分析流动相为BPI-1∶MPI-1∶OPI=45∶14∶41,流速1.0 mL/min,柱温40℃,检测波长254 nm,进样量500μL,分析时间9.5 min。结果钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱线性范围分别为9.77~10000.00 ng/mL(r=0.9996)、10.74~11000.00 ng/mL(r=0.9997)、10.74~11000.00 ng/mL(r=0.9997)、10.74~11000.00 ng/mL(r=0.9996),精密度、稳定性和重复性相对标准偏差(RSD)<5.00%,准确度为95.20%~104.01%,方法回收率为93.63%~101.38%。结论建立的2D-HPLC同时检测钩藤中四种生物碱含量的方法简单准确,可作为钩藤药材质量控制的新方法。

采用HPLC-MS-AIS法测定钩藤中四种生物碱含量

目的采用高效液相-质谱联用-自体内标法(HPLC-MS-AIS)测定钩藤中四种主要的吲哚类生物碱(钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱)含量。方法采用C_(18)色谱柱(3.0 mm×50 mm,3.3μm);0.1%甲酸水溶液∶乙腈=82∶18为流动相;流速0.5 mL/min;柱温30℃。质谱条件:电喷雾离子源;正离子多反应监测模式;毛细管电压为4000 v;选择质子数/电荷数(m/z):385.25/160.10(钩藤碱)、385.30/160.10(异钩藤碱)、383.25/160.15(去氢钩藤碱)、383.25/160.15(异去氢钩藤碱)作为检测离子对;进样量2μL。结果钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱线性范围分别为2.30~600.00 ng/mL(r=0.9993)、2.30~600.00 ng/mL(r=0.9992)、2.47~650.00 ng/mL(r=0.9994)、2.47~650.00 ng/mL(r=0.9992),精密度和稳定性的相对标准偏差(RSD)均<5.00%,准确度为92.40%~104.10%,加样回收率为95.90%~104.60%。结论采用HPLC-MS-AIS法测定钩藤中四种生物碱含量简便准确,可作为钩藤药材质量控制的新方法。

HPLC法同时测定复方制剂中4种钩藤生物碱成分含量

目的建立钩藤复方制剂中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱HPLC定量方法。方法 Kromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相：甲醇-乙腈-醋酸铵缓冲液（pH=5.2）梯度洗脱,流速：1 mL.min-1,检测波长：245 nm,柱温45℃。结果 4种生物碱线性分别为：钩藤碱（rhynchophylline,RIN）：1.76~26.40 mg.L-1,异钩藤碱（isorhynchophylline,IRN）：1.66~24.90 mg.L-1,去氢钩藤碱（corynoxeine,COR）：2.50~37.50 mg.L-1,异去氢钩藤碱（isocorynox-eine,ICO）：1.64~24.60 mg.L-1,r均大于0.999 7,平均回收率分别为98.3%~103.4%,RSD〈2.5%。采用上述HPLC测定了天麻钩藤饮模型制剂和3种市售钩藤复方制剂中4种钩藤生物碱成分的含量。结论本法可作为复方制剂中4种钩藤生物碱成分的含量测定。

以离子液体为流动相添加剂的HPLC法分离并测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的含量

目的:建立测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱含量的方法。方法:以离子液体1-丁基-3-甲基咪唑氯化盐(C4mimCl)为流动相添加剂,与无添加剂的流动相以及加入传统添加剂三乙胺(对色谱柱有损伤)后对高效液相色谱(HPLC)法分离钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的分离度进行比较,筛选C4mimCl的最佳浓度,用新建立的方法测定江西4个产地钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的含量。色谱柱为Dikmatech Diamonsil Plus C18,流动相为乙腈-缓冲液(0.1%磷酸+3.0 mmol/L C4mimCl),梯度洗脱,紫外检测波长为245 nm,流速为1 mL/min,进样量为10μL。结果:当流动相中无添加剂时、加入3.0 mmol/L三乙胺或3.0 mmol/L C4mimCl作添加剂时,钩藤碱与前峰分离度分别为1.02、1.23、1.72,与后峰分离度分别为1.06、6.00、4.25,对称因子分别为0.81、0.86、1.13;异钩藤碱与前峰分离度分别为0.96、3.89、4.05,与后峰分离度分别为1.02、2.34、2.36,对称因子分别为0.88、0.81、0.96。钩藤碱、异钩藤碱检测质量浓度线性范围分别为4.93~157.76(r=0.9999)、4.98~159.50μg/m L(r=1.0000),定量限分别为0.4864、0.7936μg/mL,精密度、重复性、稳定性和耐用性试验中的RSD均小于5%(n=6),回收率分别为102.9%~107.8%(RSD=1.7%,n=6)、95.4%~106.3%(RSD=3.9%,n=6)。4个产地钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的含量范围分别为0.758~1.343、1.511~1.823 mg/g。结论:C4mimCl加入到流动相中能提高分离度,且以此建立的HPLC法快速、准确、重复性好,可用于钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的含量测定。

HPLC法测定安乐片中钩藤碱和异钩藤碱的含量

目的:建立安乐片中钩藤碱和异钩藤碱的含量测定方法。方法:用高效液相色谱法Agilent XDB C18(4.6 mm×250 mm,5μm);甲醇-0.2%氨水溶液(60∶40)为流动相;检测波长为245 nm,流速为1 mL·min^(-1),柱温25℃。结果:钩藤碱进样量在0.028 5~0.713 3μg(r=0.999 9)与峰面积线性关系良好;异钩藤碱进样量在0.016 6~0.416μg(r=0.999 8)范围内线性良好,钩藤碱的平均回收率为98.61%,RSD为1.56%,异钩藤碱的平均回收率为97.49%,RSD为1.27%。结论:本法灵敏、准确,专属性强,能简便有效的控制安乐片中钩藤碱和异钩藤碱的含量。

HPLC测定钩藤药材中钩藤碱、异钩藤碱的含量

目的:用HPLC法建立钩藤药材中钩藤碱(Rhynchophylline)、异钩藤碱(Isorhynchophylline)的含量测定方法,用于钩藤药材的质量控制。方法:色谱柱为Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇:水=65:35(V/V,含0.01mmol/L三乙胺,冰醋酸调PH7.0)为流动相,流速为1.0 ml.min-1,在245nm检测波长下,测定钩藤药材中钩藤碱、异钩藤碱含量。结果:钩藤碱及异钩藤碱的回归方程分别为Y=1.0E+6x-21142和Y=1.1E+6x-13566,线性范围分别为0.254～1.524μg和0.216～1.296μg,相关系数分别0.9999和0.9999。结论:本法正确、简便、快速,对于控制和评价钩藤药材的品质有重要意义。