在我国新发现的一种牛的泰勒虫（Theileria）未定种

对分离自我国西北某地自然感染牛体的一株泰勒虫（Ｔｈｅｉｌｅｒｉａ）未定种，进行了接种试验、形态学观察和部分传播试验。结果表明，该种可在除脾牛体内大量繁殖，寄生物血症达５２．６９％。虫体形态具多形性：有梨子形、圆环形、椭圆形、杆状、三叶形、边虫样、十字架形，还有许多难以形容的不规则形虫体；在同一红细胞内不同数目的边虫样虫体可发育变大，生成的原生质伸延，而后互相连接或交融，重新构成各种不同形态的虫体；有些虫体具有出芽生殖的特性。虫体形态以梨子形和圆环形为主，占所见虫体总数的５１．５％。不能通过长角血蜱和残缘璃眼蜱传播，其病原性、媒介蜱、传播方式、宿主特异性、发育史等尚不清楚。

新疆一例牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体混合感染的病例初报

2021年8月17日,新疆托克逊县一头西门塔尔母牛出现高热、瘤胃胀气、肌肉震颤、呼吸急促、结膜黄染和血红蛋白尿等临床症状。为确认发病原因,采集该牛全血和体表蜱虫样品进行光学显微镜观察、血常规检测和聚合酶链式反应(PCR)检测。血涂片镜检结果显示,患牛疑似牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体混合感染;血常规检测显示,血红蛋白、血红细胞压积、平均血红蛋白浓度和中性粒细胞等指标下降,血小板和淋巴细胞百分比等指标上升,提示该牛机体存在贫血和炎症反应;血液样品PCR结果显示,牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体检测均呈阳性;蜱虫样品PCR结果显示,牛环形泰勒虫检测为阳性。综上,患牛最终被诊断为牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体混合感染。目前,此3种病原共同感染牛的案例极为少见。本研究为今后牛混合感染牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体的临床诊断提供了参考。

羊泰勒虫荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种敏感、快速的羊泰勒虫检测方法,本研究根据GenBank中登录的羊泰勒虫18S rRNA保守区设计1对特异引物,经各反应条件的优化,建立了羊泰勒虫荧光定量PCR检测方法。结果显示该方法可以特异地检测羊泰勒虫,而对卵形巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、羊巴贝斯虫和瑟氏泰勒虫检测均为阴性;该方法的灵敏度可达2.08×10~1拷贝/μL,比普通PCR灵敏度高100倍。组内及组间重复试验变异系数均小于5%。对50份临床样品进行检测,荧光定量PCR和常规PCR的阳性检出率分别为48%和38%。本实验建立的荧光定量PCR检测方法适用于羊泰勒虫定量分析和分子流行病学调查。

羊泰勒虫中国株裂殖子的蛋白分析

采用SDSPAGE和Westernblotting试验对羊泰勒虫临潭株、隆德株、张家川株和夏河株裂殖子蛋白进行了分析。SDSPAGE结果显示,羊泰勒虫临潭株与隆德株的亲缘关系较近;张家川株与夏河株的亲缘关系也比较近。4个虫株的阳性血清分别与4个株裂殖子蛋白的Westernblotting试验结果表明,4个株虫体的阳性血清与临潭株和张家川株的裂殖子蛋白在38ku处有共同反应。提示38ku蛋白多肽有望成为特异性诊断抗原,为重组疫苗的研究提供依据。

羊泰勒虫吉林省分离株18SrRNA基因的克隆和序列分析

为分析羊泰勒虫吉林省分离株的18S rRNA基因序列,根据羊泰勒虫18S rRNA基因的保守区序列设计1对引物,对吉林省的绵羊血液基因组DNA进行PCR扩增,结果扩增出长度为459 bp的基因片段,并成功地将该基因克隆到pMD18-T载体。将经纯化、筛选及酶切鉴定和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序,与已发表的羊泰勒虫基因序列进行比较。序列分析显示,羊泰勒虫吉林省分离株与羊泰勒虫China 1的同源性为100%。

人工感染泰勒虫羊临床症状、血液学以及抗体水平的变化

用从甘肃采集的甘肃血蜱人工感染试验羊,观察其临床症状、血液学及抗体水平的变化。在试验中,试验羊表现出2个高温峰,裂殖体在第2个高温期出现。血液学观察表明,裂殖体产生阶段对试验羊造成的危害最大。通过对试验羊临床症状、血液学及抗体水平变化的统计学分析,表明3者之间存在一定的关联。

小亚璃眼蜱对牛巴贝斯虫未定种和环形泰勒虫传播的试验研究

利用蜱传播试验确定小亚璃眼蜱对中国新分离的牛的巴贝斯虫未定种和环形泰勒虫的传播能力与传播方式,进而明确其在中国牛梨形虫病传播中的流行病学意义。试验结果表明:小亚璃眼蜱可在雌虫阶段受到巴贝斯虫未定种的感染,并可在次代若虫(2/2)和成虫(3/3)阶段将病原传播给试验牛;小亚璃眼蜱幼虫和若虫吸入环形泰勒虫,饱血脱落的幼虫和若虫所蜕化发育的饥饿若虫(2/2)和成虫(2/2)均可将病原传递给敏感动物;感染巴贝斯虫未定种的小亚璃眼蜱饱血雌虫所孵育出的次代幼虫和若虫仍可被环形泰勒虫感染,所发育出的若虫(2/2)和成虫(2/2)可在一次传播试验中将环形泰勒虫和巴贝斯虫未定种同时传播给试验动物。

羊泰勒虫PCR检测方法的建立和初步应用

利用羊泰勒虫18SrRNA基因的序列特点,设计合成种特异性引物,建立羊泰勒虫PCR检测方法,该方法能特异性扩增398bp的羊泰勒虫18SrRNA基因片段,而对羊巴贝斯虫、羊无浆体、牛环形泰勒虫和牛伊氏锥虫的基因组DNA没有扩增带出现。对羊泰勒虫基因组DNA的最小检测量为0.12fgDNA。通过检测124份临床样品,24份为羊泰勒虫感染阳性,其余为阴性。结果表明,建立的PCR检测方法具有极高的敏感性和特异性,可用于羊泰勒虫病和临床健康带虫羊的诊断。