辅助生殖助孕中棕色卵子对妊娠结局的影响

目的探讨辅助生殖技术中棕色卵子对妊娠结局的影响。方法回顾性分析2020年8月至2023年4月在昆明市第一人民医院接受辅助生殖助孕治疗的217例患者的临床资料,根据患者卵子透明带颜色将其分为棕色卵子组(n=69)和正常卵子组(n=148),比较两组患者的基础性激素[卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)、血清抗苗勒管激素(AMH)]水平、促性腺激素(Gn)使用天数、Gn总量以及获卵数、卵子成熟率(MⅡ)、受精率、卵裂率、D3优胚率、囊胚形成率、体外受精(IVF)/卵胞浆内单精子注射(ICSI)的正常受精率;比较两组患者的临床妊娠率、累积妊娠率、活产率及流产率;比较两组患者的颗粒细胞线粒体DNA含量及线粒体膜电位(MMP)水平。结果棕色卵子组患者AMH为(2.21±1.42)ng/mL,明显低于正常卵子组的(3.34±3.26)ng/mL,Gn用量为(3124±758.52)IU,明显高于正常卵子组的(2563±612.40)IU,差异均有统计学意义(P<0.05),但两组患者的平均年龄、体质量指数(BMI)、基础FSH、LH、E2、P水平及Gn的使用天数比较差异均无统计学意义(P>0.05);棕色卵子组患者的获卵数、D3优胚率、囊胚形成率分别为8.9±1.30、(34.2±12.20)%、(34.6±10.90)%,明显低于正常卵子组的11.2±1.01、(45.1±19.80)%、(48.4±11.80)%,差异均有统计学意义(P<0.05),但两组患者的MⅡ、IVF/ICSI的正常受精率、ICSI退化率、卵裂率比较差异均无统计学意义(P>0.05);棕色卵子组患者的临床妊娠率、累积妊娠率、活产率分别为28.99%、39.13%、21.74%,明显低于正常卵子组的53.38%、58.11%、39.86%,差异均有统计学意义(P<0.05);棕色卵子组患者的线粒体膜电位MMP平均灰度值为15.33±1.20,明显低于正常卵子组的22.33±0.33,差异有统计学意义(P<0.05),但两组患者的mtDNA拷贝数比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论人类辅助生殖助孕中棕色卵子形成机制与Gn用量相关,其获卵数、D3优胚率、囊胚形成率均显著降低,膜电位也显著较低,线粒体功能异常,颗粒细胞受损,胚胎质量及发育受影响,因此,应避免移植棕色卵子。

油茶未授粉胚珠愈伤组织诱导及形态学和细胞学特征

【目的】筛选适合油茶‘华金’Camellia oleifera‘Huajin’未授粉胚珠诱导愈伤组织的最适培养基,并对愈伤组织进行细胞学观察,为油茶单倍体育种提供依据。【方法】以油茶‘华金’为试材,筛选未授粉胚珠诱导愈伤组织的最适培养基配方,研究基础培养基类型MS培养基、木本植物用培养基(WPM)、MT培养基、1/2MS培养基、B5培养基、生长素萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)、二氯苯氧乙酸(2,4-D)和细胞分裂素苄氨基嘌呤(6-BA)、激动素(KT)、噻苯隆(TDZ)组合,以及植物生长调节剂浓度对愈伤组织诱导的影响;选取不同外部形态的愈伤组织进行石蜡切片,并根据流式细胞仪的倍性鉴定结果,研究愈伤组织来源及发育进程。【结果】MS作为基础培养基,添加1.0mg·L^(-1)NAA+2.0 mg·L^(-1)TDZ+40 g·L^(-1)蔗糖的诱导率最高,为92.97%,NAA和TDZ对诱导率影响显著(P<0.05),其中TDZ的影响程度大于NAA。胚性愈伤组织呈浅绿色颗粒状,细胞学特征为排列紧密,核大,倍性鉴定为六倍体。【结论】油茶未授粉胚珠诱导胚性愈伤组织的最适培养基配方为:MS+40 g·L^(-1)蔗糖+7 g·L^(-1)琼脂+1.0 mg·L^(-1)NAA+2.0mg·L^(-1)TDZ;愈伤组织由外珠被细胞脱分化形成。

热激对甜瓜未授粉子房培养胚珠膨大期内源激素的影响

为探究热激处理对甜瓜未授粉子房培养中胚珠膨大发育与内源激素的影响,以期为揭示胚珠膨大和单倍体培养的机理研究奠定基础。以热激和对照培养不同天数的甜瓜未受粉子房为试材,对胚珠膨大率进行动态监测,并采用UPLC-ESI-MS/MS法测定顺式玉米素核糖核苷(CZR)、赤霉素3(GA3)、反式玉米素(ZT)、吲哚-3-乙酸(IAA)及脱落酸(ABA)含量,并分析了这5种内源激素与胚珠膨大发育的关系。结果表明,与对照25℃室温培养相比,32℃热激处理4 d有利于胚珠的膨大及内源激素的积累,且在胚珠膨大期5种内源激素的变化趋势一致,均为递增。各内源激素间的比例关系处于动态变化中,且在整个膨大期,热激处理下IAA/(ZT+CZR)、IAA/ABA和IAA/GA3均较对照25℃室温培养高;胚珠膨大率与内源激素IAA呈极显著正相关,相关系数达0.818,与ZT、CZR和ABA均呈显著正相关,与(ZT+CZR)/GA3呈显著负相关。

西葫芦胚囊再生植株倍性鉴定方法研究

利用根尖细胞染色体压片和叶片保卫细胞叶绿体压片方法对西葫芦胚囊再生植株进行了倍性鉴定,结果表明,单倍体、二倍体和四倍体植株叶片表皮保卫细胞叶绿体数的均值分别为(4.15±0.37),(8.05±0.76)和(16.05±0.69),其比例约为1:2:4,说明叶片保卫细胞叶绿体压片方法能有效用于倍性鉴定;单倍体、双单倍体和四倍体叶片表皮保卫细胞的长度分别为(20.31±3.38)μm、(30.80±2.19)μm和(41.78±1.03)μm,其比例约为1:1.5:2,在胚囊再生植株倍性鉴定时也可以参照。

西葫芦未受精胚珠离体培养条件的优化及胚囊植株的产生

目的建立西葫芦离体雌核发育高频植株再生体系,以加速自交系选育,有效缩短西葫芦杂种一代育种周期。方法将西葫芦未受精胚珠接种至附加2,4-D、NAA、BA的N6培养基上可形成胚状体,该胚状体转接至无激素的N6培养基上可形成再生植株。结果试验共获得120棵再生植株(R0),其中41株因生活力低下死亡,8株用于摸索移栽方法死亡,71株移栽成活且生长正常,其中42株性状表现符合二倍体特征且育性正常,已有10株获得自交果实及种子,其余29株育性异常。试验结果表明,胚珠发育时期、培养基、供体基因型及供体栽培季节等均显著影响胚状体诱导频率。结论胚状体起源于胚囊成员细胞,再生植株为胚囊植株。试验筛选出3种诱导频率较高的培养基;以开花前1日及当日的胚珠诱导频率较高;秋播材料诱导效果最好。

针刺对胚泡着床障碍大鼠胚泡着床及发育的影响

目的:探讨针刺提高辅助生殖技术成功率的作用机制。方法:将孕鼠随机分为正常组、模型组及针刺组。模型组和针刺组均采用米非司酮造模,针刺组自妊娠第1天连续接受1w针刺治疗。观察各组大鼠妊娠率及平均着床胚泡数,比较其子宫、卵巢重量及单个胚泡大小、重量的差异;并用光镜观察各组大鼠子宫内膜及卵巢的形态结构差异。结果:针刺组妊娠率及平均着床胚泡数较模型组显著提高(P<0.01);模型组子宫、卵巢重量等均较正常组及针刺组轻,且子宫内膜发育不良;针刺组子宫内膜发育与正常组相似。结论:针刺可在一定程度上逆转米非司酮抗着床的作用,促进大鼠胚泡着床及胚泡发育。

黄瓜未授粉子房离体培养的研究进展

根据近年来国内外黄瓜未授粉子房离体培养的最新研究进展,主要对离体培养至成苗过程中的主要影响因素进行了全面总结、对比和分析,讨论了目前该技术在黄瓜育种应用上存在的问题及展望,以期对黄瓜分子育种技术提供丰富的理论支持。

非洲菊未受精胚珠离体培养影响因素研究

以3个基因型的非洲菊未受精胚珠为试材,研究胚珠发育时期、培养基及供体基因型对非洲菊未受精胚珠离体诱导效果的影响,并以根尖染色体计数为基础对获得的33株再生植株的倍性进行了流式细胞术鉴定。结果表明,胚珠发育时期、培养基及供体基因型均极显著影响愈伤组织和胚状体的诱导频率,且①外轮舌状花完全水平展开、内轮管状花开放前1 d,剥取的胚珠诱导频率较高;②MS中的大量元素和有机物+Heller中的微量元素+1/2铁盐+0.5 mg/L 2,4-D预培养7~10 d有利于启动雌核发育诱导胚状体形成;③经胚状体或愈伤组织2种途径可再生植株,经胚状体途径再生的植株单倍体频率较高。

不同促卵子成熟hCG用量对IVF-ET妊娠结局的影响

目的:探讨减少人绒毛膜促性腺激素(hCG)用量预防卵巢过度刺激综合征(OHSS)的可行性及安全性。方法:选择2009年1月—2011年12月进行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)且发育卵泡数≥14个、hCG日雌二醇(E2)水平≥10 000 ng/L的OHSS高危患者327例,依据hCG用量不同分为2组:204例hCG2 000～4 000 IU者为A组;123例hCG 10 000 IU者为B组,比较2组超促排卵(COH)情况、卵子成熟度、胚胎质量、妊娠结局以及OHSS发生率是否存在差异。结果:A、B组年龄、体质量指数(BMI)、促性腺激素(Gn)起始剂量、COH时间及Gn总量差异无统计学意义,A、B组hCG日E2水平、发育卵泡数、获卵数、受精方式、受精率、两原核(2PN)胚胎数、优质胚胎数、移植胚胎(ET)数、冷冻胚胎数、全胚胎冻存数差异无统计学意义。2组移植周期临床妊娠率差异无统计学意义;A组重度、极重度OHSS发生率明显低于B组。结论:在IVF-ET过程中,对于OHSS高危患者,减少促卵子成熟的hCG用量对卵子的成熟、受精、胚胎质量以及移植周期临床妊娠率无明显的影响,可以有效降低重度和极重度OHSS的发生,是一种有效预防重度、极重度OHSS的方法。

未授粉子房和胚珠离体培养诱导植物雌核发育研究进展

未授粉子房和胚珠培养离体诱导雌核发育的研究已近半个世纪,目前共有20科40余种种子植物的未授粉子房或胚珠离体培养诱导了雌核发育,但成功获得雌性单倍体的植物只有10科25种2变种。本文重点对离体雌核发育的胚胎学的研究资料进行综述,包括离体条件下胚珠中胚囊的发育状况、雌核发育的模式、雌性单倍体形成的途径以及自发胚乳的离体诱导并指出该领域研究中存在的问题,进一步在研究方法上提出了设想和建议。

甜菜花培新品种—中甜花培1号的选育

甜菜花培新品种—中甜花培1号(原组合代号91-5-1)是以K-5的未授粉胚珠培养得到的纯合二倍体株系作父本,与四倍体品系C-87作母本杂交育成的花培三倍体新品种。该品种经过1992～1993年所内小区试验,1993～1995年异地鉴定,1996～1998年全国区域试验和1998年生产示范,具有含糖率高,抗褐斑病性强,较耐根腐病,适应性广,综合农艺性状好等优点,属于标准偏高糖型品种,产质量均优于当地和统一对照种。

生物技术在甜菜育种中的应用研究

通过对甜菜花药与胚珠的培养、后代遗传学分析、优良品系与优势组合选育及产质量鉴定等生物技术与常规技术相结合的方法，选育出一些有价值的高糖、抗病甜菜优良品系及优势组合。其中，组合８８－３０经１９９１～１９９２年２点次异地鉴定结果：块根产量与对照相仿，含糖率比对照提高１．４度，产糖量较对照增加１１．５％，进一步肯定了甜菜未授粉胚珠、花药培养技术在甜菜育种中的应用潜力。

发展甜菊生产大有可为

发展甜菊生产大有可为何毓娟，李元彬（中国农业科学院甜菜研究所）当今，世界上两大糖源为甘蔗与甜菜。随着人们生活水平的提高，对甜味剂的要求不仅仅局限于甜味，而是趋向于低热量、无毒、高营养型方向发展。由于甜菊叶子中甜菊甙具有上述优点，而且成本低、甜度高，广...

无毒澄清剂检测甜菜参数的误差分析

用Ａｌ＿２（ＳＯ＿４）＿３与ＡｌＣｌ＿３为澄清剂，以Ｐｂ澄清剂为对照对甜研５号４００个混合样品进行了品质参数分析，结果表明：Ａｌ制剂浓度在３‰～４‰间对糖度的检测与对照比绝对误差小于０．２°Ｓ，相对误差小于２％；对Ｋ、Ｎａ的测定结果接近对照（ＡｌＣｌ＿３澄清剂测定结果误差略大）；使用上述Ａｌ制剂浓度测定α－Ｎ结果与对照比差异较大（１倍左右）。故在对甜菜品质分析以测糖为主前提下，使用Ａｌ制剂为澄清剂完全可行。

山羊活体采卵及卵母细胞体外受精研究

选择健康空怀山羊母羊,随机分组,分别用PMSG 1000 u和FSH 325～375 u超数排卵处理,研究利用外源激素进行超排对山羊活体采卵效果的影响,比较活体采集与屠宰场采集的卵母细胞体外受精效果.结果表明,经超排处理后,卵巢明显增大,同时提高了采集卵母细胞的数量和质量.用FSH超排,≥2 mm的卵泡数为23.00个±5.69个,采集卵母细胞数为12.67枚±4.06枚,极显著大于对照组（P＜0.01）.活体采集的卵母细胞的体外成熟率及受精率分别为44.44%和33.33%,均略高于从屠宰场获取卵巢采集的可用卵泡卵母细胞,但差异不显著（P＞0.05）.

植物雌性单倍体的离体诱导

对单倍体的用途和来源作了简略的概括。回顾了通过离体诱导获得雌性单倍体的研究历程 ,并分析了这一方法的优势。离体诱导雌性单倍体的效果受到供体植株的基因型、供体植株的生理状态、胚囊发育时期、材料预处理、花器附属物、培养基、培养方式、培养条件等一系列因素的影响。对这些影响因子的有关研究进行了系统的总结。在雌性单倍体的个体发育方面 。

微刺激促排卵方案的研究进展

在辅助生殖技术应用中,常规促排卵方案因具有促进多卵泡发育、降低周期取消率并增加临床可控性等优势,成为促排卵方案中的主要方案,但是在其临床应用中可以观察到卵子胚胎的质量下降及子宫内膜容受性改变,而且促性腺激素(Gn)用量增加改变了体内激素环境,提高了并发症如卵巢过度刺激综合征(OHSS)及多胎妊娠等的发生率,进而影响患者的依从性。因此,如何选择一个安全、经济、高效的卵巢刺激方案,已成为临床辅助生殖技术应用中的首要问题。随着实验室操作技术及临床药物的发展,微刺激促排卵方案较常规长方案降低了Gn用量,模拟自然状态下卵子及胚胎的发生发育,操作简便,药物周期短,费用低廉并且显著降低了OHSS及多胎妊娠的发生率,改善了出生婴儿的结局,并获得了可观的妊娠率。现就微刺激促排卵方案在临床应用中的优劣因素进行分析。

甜菜未授粉胚珠培养技术研究

甜菜未授粉胚珠接种在附加不同生长素(IAA、2,4—D)、细胞分裂素(KT、6BA)或激素组合(6BA+NAA和IAA+KT)的MS、PGOB、1/2MS等培养基上,可成功诱导出胚状体,分化诱导形成单倍体植株,对其用0.1％～03％秋水仙碱溶液处理使染色体加倍,获得了高度纯合的二倍体株系。试验选配了110种诱导培养基、两种分化和3种生根培养基,选择了143种不同基因型材料.不同基因型材料在不同培养基上的诱导率各不相同.

不同年份橡胶树未受粉胚珠愈伤组织诱导的研究

为探明不同年份橡胶树未授粉胚珠愈伤组织的诱导情况,以云研73-477、云研77-2、云研77-4、热研8-79及RRII105的未授粉胚珠为外植体,于2013-2015年对橡胶树未授粉胚珠愈伤组织的诱导开展研究。结果表明:愈伤组织的诱导率在品种间的差异在3年里均达到极显著水平(P<0.01),且普遍偏低,总体均值仅为26.07%;云研73-477胚珠的愈伤组织诱导率在年度间差异均达到显著水平(P<0.05),另外4个品种的差异达到极显著水平(P<0.01)。从3年的愈伤组织诱导率来看,热研8-79最高,其年份均值达到51.57%,变幅为49.72%~53.62%;其次是云研73-477,其年份均值为28.50%,变幅为26.00%~31.03%;最小的为RRII105,其年份均值仅为8.92%,变幅为5.88%~13.40%。

第四积温带甜菜“大双覆”栽培技术

第四积温带甜菜“大双覆”栽培技术邹风喜，龚继慧（黑龙江省五大连池市农业技术推广中心）五大连池市８０％耕地位于第四积温带，这一带区昼夜温差大，土壤有机质含量高，是甜菜的适宜产区。但由于积温（２１００～２３００℃）不足、生育日数（１１５天）少，耕作粗放、...