期刊文献+
共找到10篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
乳酸菌中幽门螺杆菌ureB基因的食品级表达与优化 被引量:1
1
作者 陈帅印 张荣光 +1 位作者 范清堂 段广才 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2011年第3期396-398,共3页
目的:以乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)为宿主菌构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylo-ri)尿素酶B(UreB)的食品级表达系统。方法:从重组质粒pMD19-T-ureB上酶切得到ureB基因片段,与含有筛选标记lacF基因的L.lactis表达... 目的:以乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)为宿主菌构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylo-ri)尿素酶B(UreB)的食品级表达系统。方法:从重组质粒pMD19-T-ureB上酶切得到ureB基因片段,与含有筛选标记lacF基因的L.lactis表达载体pNZ8149经双酶切后定向连接,应用PCR、酶切和测序的方法鉴定重组子。重组菌用乳联菌肽诱导表达,用正交表实验进行表达条件的优化,通过SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白进行鉴定。结果:重组菌NZ3900/pNZ8149-ureB经鉴定与预期相符。优化结果显示在菌体培养到D600nm为0.40左右时加入终浓度为25μg/L的乳联菌肽诱导5h产量最高,通过Western blot能检测到UreB的表达。结论:构建了ureB基因食品级表达系统,并得到了表达的最优条件。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 ureb基因 乳酸乳球菌 食品级表达载体 条件优化
下载PDF
幽门螺杆菌融合蛋白HspA-UreB在大肠杆菌中的表达与鉴定
2
作者 代丽萍 段广才 范清堂 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期843-846,共4页
目的在大肠杆菌中表达幽门螺杆菌(简称Hp)HspA-UreB融合蛋白,并探索其免疫反应性,为Hp基因工程疫苗的研制奠定基础。方法用PCR方法扩增郑州分离Hp菌株MEL-HP27的hspA和ureB基因,分别克隆入pNEB193中。测序后,回收两种基因片段,并以hspA-... 目的在大肠杆菌中表达幽门螺杆菌(简称Hp)HspA-UreB融合蛋白,并探索其免疫反应性,为Hp基因工程疫苗的研制奠定基础。方法用PCR方法扩增郑州分离Hp菌株MEL-HP27的hspA和ureB基因,分别克隆入pNEB193中。测序后,回收两种基因片段,并以hspA-ureB的顺序连接插入原核表达载体pMAL-C2x进行融合表达。采用蛋白印迹法对表达产物进行鉴定。结果特异PCR法和酶切鉴定证实融合基因hspA-ureB克隆入表达载体中;重组质粒转化大肠杆菌TB1后,经IPTG诱导3h,SDS-PAGE电泳显示在119kDa处出现一条特异蛋白带,即麦芽糖结合蛋白(MBP)与HspA-UreB的融合表达形式,约占细菌总体蛋白含量的31%;该融合蛋白与Hp免疫小鼠血清和Hp阳性病人血清的Westernblot分析结果显示,在119kDa处出现特异杂交带。结论成功地在大肠杆菌中实现了Hp融合蛋白HspA-UreB的高效表达,并证实其具有良好的免疫反应性。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 HSPA ureb 融合蛋白 基因表达
下载PDF
含幽门螺杆菌CagA、UreB蛋白与霍乱肠毒素B亚单位(CTB)融合基因的植物表达载体的构建及遗传转化 被引量:4
3
作者 程畅 陈珍 朱诚 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期29-33,共5页
幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是慢性胃炎和消化性溃疡的主要病因,与胃癌和胃粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的发生也密切相关。目前所用的疫苗制造成本高、运输费用贵,然而利用转基因植物生产的植物疫苗成本低廉、服用方便... 幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是慢性胃炎和消化性溃疡的主要病因,与胃癌和胃粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的发生也密切相关。目前所用的疫苗制造成本高、运输费用贵,然而利用转基因植物生产的植物疫苗成本低廉、服用方便是现有疫苗的良好替代品。将Hp相关蛋白与免疫佐剂CTB的融合基因(ctb-linker-cagA和ctb-linker-ureB)利用PCR、酶切、连接等一系列方法从载体p1300-WxCLCN和p1300-WxCLUN中重组到载体pCAMBIA2301中(含35S启动子),重组载体分别命名为p2301-35SCLCN和p2301-35SCLUN。通过冻融法将载体导入农杆菌EHA105菌株中,以农杆菌介导的方法,将重组载体p2301-35SCLCN和p2301-35SCLUN转化烟草黄苗榆和心叶烟,获得了具有卡那霉素抗性再生植株,经过酶切、PCR、GUS染色和PCR-Southern鉴定结果表明,目的基因分别正确插入载体中并稳定整合到植株中,为利用植物反应器生产幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 CAGA基因 ureb基因 ctb基因 基因融合 表达载体
下载PDF
中国人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的基因克隆及序列分析 被引量:11
4
作者 吴超 邹全明 +1 位作者 张卫军 郭学青 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期328-330,共3页
目的克隆人幽门螺杆菌 (helicobacter pylori,Hp)尿素酶 B基因 (ure B) ,并分析其核苷酸序列的特性。方法用PCR技术从临床分离的 Hp菌株基因组中扩增出 ure B基因 ,将其克隆至 p HP质粒上进行序列分析。结果克隆得到的 ure B基因长度为 ... 目的克隆人幽门螺杆菌 (helicobacter pylori,Hp)尿素酶 B基因 (ure B) ,并分析其核苷酸序列的特性。方法用PCR技术从临床分离的 Hp菌株基因组中扩增出 ure B基因 ,将其克隆至 p HP质粒上进行序列分析。结果克隆得到的 ure B基因长度为 1713bp,其核苷酸序列与 Gen Bank公布的序列有 6 1个碱基存在差异 ,同源为 96 .44 % ,推定的氨基酸序列同源性为99.6 5 %。结论我们所克隆的 ure B基因可用于 Hp保护性抗原 Ure 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 尿素酶b亚单位 基因克隆 序列分析
下载PDF
幽门螺杆菌尿素酶B亚单位在大肠杆菌中的融合表达与鉴定 被引量:2
5
作者 代丽萍 段广才 +1 位作者 范清堂 郗园林 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2003年第2期159-161,共3页
目的 通过对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hipylori)尿素酶B亚单位在大肠杆菌中表达的研究,探索其免疫反应性。方法 用高保真PCR方法扩增H.pylori ureB基因,并定向克隆入pNEB193中,然后经酶切回收后插入原核表达载体pMAL-C2X进行融... 目的 通过对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hipylori)尿素酶B亚单位在大肠杆菌中表达的研究,探索其免疫反应性。方法 用高保真PCR方法扩增H.pylori ureB基因,并定向克隆入pNEB193中,然后经酶切回收后插入原核表达载体pMAL-C2X进行融合表达。采用蛋白印迹法对表达产物进行鉴定。结果 特异PCR和酶切鉴定证实融合基因ureB克隆入表达载体,SDS-PAGE结果显示ureB在大肠杆菌中以融合蛋白形式MBP-ureB高效表达,约占细胞总蛋白量的26.7%。该融合蛋白可与H.pylori阳性病人血清发生特异反应。结论 成功构建了能高效表达H.pylori ureB的重组菌,为Hp基因工程疫苗的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 尿素酶b亚单位 大肠杆菌 免疫反应性 融合基因 克隆 幽门螺杆菌感染
下载PDF
幽门螺杆菌尿素酶B亚单位特异性抗体检测方法的建立与评价 被引量:1
6
作者 王斌 邹全明 +6 位作者 朱凤才 计国欣 毛旭虎 刘开云 鲁东水 李亮 曾明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期527-529,共3页
目的建立并评价幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)特异性抗体的检测方法。方法应用纯化的重组HpUreB作为包被抗原,建立检测HpUreB特异性抗体的ELISA间接法。以Hp抗体Western blot检测作为“金标准”,评价所建立方法的真实性和可靠性。... 目的建立并评价幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)特异性抗体的检测方法。方法应用纯化的重组HpUreB作为包被抗原,建立检测HpUreB特异性抗体的ELISA间接法。以Hp抗体Western blot检测作为“金标准”,评价所建立方法的真实性和可靠性。结果检测血清特异性IgG的灵敏度为100·0%,特异度为97·7%,阳性预测值为97·2%,阴性预测值为100·0%,约登指数为0·977,符合率为98·7%,试验的一致率为98·5%;检测血清中总的特异性Ig灵敏度为97·1%,特异度为95·3%,阳性预测值为94·4%,阴性预测值为97·6%,约登指数为0·925,符合率为96·2%,试验的一致率为97·8%;检测唾液中特异性sIgA的灵敏度为96·2%,特异度为94·5%,阳性预测值为89·3%,阴性预测值为98·1%,约登指数为0·907,符合率为95·1%,试验的一致率为97·5%;检测粪便标本中的特异性sIgA的灵敏度为92·0%,特异度为90·2%,阳性预测值为85·2%,阴性预测值为94·9%,约登指数为0·822,符合率为90·9%,试验的一致率为98·6%,CV值均小于15%。结论该检测方法真实性、可靠性、重复性良好,能满足临床标本检测的要求。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 尿素酶b亚单位 特异性抗体
下载PDF
H.pylori尿素酶B亚单位在保加利亚乳杆菌的表达与鉴定 被引量:3
7
作者 李月 张德纯 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2008年第1期7-9,14,共4页
目的构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)尿素酶B亚单位(UreB)的基因工程乳杆菌,并对其进行初步的安全性评估。方法采用高保真PCR从H.pylori标准菌株NCTC11637中扩增ureB基因,插入乳酸菌表达质粒pMG36e,将重组质粒电转入... 目的构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)尿素酶B亚单位(UreB)的基因工程乳杆菌,并对其进行初步的安全性评估。方法采用高保真PCR从H.pylori标准菌株NCTC11637中扩增ureB基因,插入乳酸菌表达质粒pMG36e,将重组质粒电转入保加利亚乳杆菌L6032中,获得表达ureB的基因工程乳杆菌。在含乳糖的MRS培养基诱导目的蛋白表达,Western blot鉴定其免疫原性。连续传代培养60代,检测基因工程乳杆菌的稳定性、形态学与生理生化特性以进行初步的安全性评估。结果特异PCR、酶切和测序鉴定均证实ureB基因克隆入表达载体pMG36e,SDS-PAGE结果显示,重组质粒pMG36e-ureB电转入保加利亚乳杆菌所构建的基因工程乳杆菌能表达约64KD的蛋白,Western blot证明该蛋白能与抗H.pyloriureB的兔血清反应。稳定性、形态学与生理生化特性检测结果表明,基因工程乳杆菌与原始菌株保加利亚乳杆菌完全一致。结论成功构建能表达H.pylo-riUreB的保加利亚乳杆菌L6032-UreB,该基因工程菌在形态与生理生化特性上未发生任何变异,从而为探索幽门螺杆菌感染的益生菌制剂调理疗法奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 尿素酶b亚单位基因 保加利亚乳杆菌 表达 益生菌制剂
下载PDF
幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的克隆表达及纯化 被引量:1
8
作者 闫锦锦 闫东明 +3 位作者 邹雪 刘丹 彭超 苏亚南 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期220-225,共6页
为获得高纯度具有生物活性的尿素酶B亚单位(Ure B)蛋白,利用PCR方法扩增出ure B目的基因,将其插入到p ET28a载体中,构建表达质粒p ET28a-ure B。将鉴定正确的质粒转入大肠杆菌中培养,通过IPTG诱导表达获得Ure B蛋白。采用Q Sepharose Hi... 为获得高纯度具有生物活性的尿素酶B亚单位(Ure B)蛋白,利用PCR方法扩增出ure B目的基因,将其插入到p ET28a载体中,构建表达质粒p ET28a-ure B。将鉴定正确的质粒转入大肠杆菌中培养,通过IPTG诱导表达获得Ure B蛋白。采用Q Sepharose High Per formance阴离子交换层析纯化,G-25凝胶过滤层析脱盐,并通过SDS-PAGE和免疫双扩散法对Ure B蛋白进行鉴定。结果表明,该蛋白相对分子质量约为64 k D,与预期结果相符,脱盐后获得的Ure B蛋白纯度为98.5%;免疫双扩散法证明该蛋白具有良好的生物活性和反应特异性。最终确定的纯化工艺,达到了一步纯化即得到高纯度、具有生物活性蛋白的目的,该纯化工艺简单、有效。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 尿素酶b亚单位 ureb蛋白 蛋白纯化
下载PDF
幽门螺杆菌UreB与大肠杆菌LTB基因融合及表达的研究 被引量:10
9
作者 吴超 邹全明 +3 位作者 郭红 张卫军 袁小澎 毛旭虎 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期175-179,共5页
目的 构建和表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位 (UreB)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)的重组融合蛋白 ,并对其基本的生物学及免疫学特性进行研究。方法 采用PCR技术从幽门螺杆菌染色体DNA中扩增出 1713bp的ureB基因 ,并克隆至pFS2 .... 目的 构建和表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位 (UreB)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)的重组融合蛋白 ,并对其基本的生物学及免疫学特性进行研究。方法 采用PCR技术从幽门螺杆菌染色体DNA中扩增出 1713bp的ureB基因 ,并克隆至pFS2 .2载体中与ltB基因融合 ,将ltB ureB融合基因插入改造后的原核表达载体PinPointTMXa Ⅱ ,并在工程菌E .coliJM10 9中诱导表达。结果 经序列分析 ,ltB ureB融合基因由 2 10 3个碱基组成 ,为编码 70 1个氨基酸残基的多肽。SDS PAGE和Westernblot检测发现 ,融合蛋白的相对分子质量 (Mr)约为 75× 10 3 ,并与幽门螺杆菌感染的阳性血清发生抗原抗体反应 ,ELISA检测显示 ,融合蛋白中存在LTB组分。同时发现所表达的融合蛋白无尿素酶活性 ,但保持与LT受体 神经节苷脂GM1结合的活性。结论 LTB 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 尿素酶b 不耐热肠毒素b 基因融合 原核表达
原文传递
幽门螺杆菌重组蛋白脂质体疫苗免疫保护作用的动物实验研究 被引量:3
10
作者 黄文 李兆申 +3 位作者 白杨 王继德 张亚历 周殿元 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第10期978-985,共8页
探讨幽门螺杆菌重组蛋白脂质体疫苗的免疫预防作用及可能的免疫机制.用逆向蒸发法制备以卵磷脂和胆固醇为膜组分包裹的重组蛋白和/无免疫佐剂的口服疫苗,并用透射电镜测定其粒径.BALB/c小鼠分为6组,分别通过灌胃方法给予PBS、空白脂质体... 探讨幽门螺杆菌重组蛋白脂质体疫苗的免疫预防作用及可能的免疫机制.用逆向蒸发法制备以卵磷脂和胆固醇为膜组分包裹的重组蛋白和/无免疫佐剂的口服疫苗,并用透射电镜测定其粒径.BALB/c小鼠分为6组,分别通过灌胃方法给予PBS、空白脂质体、UreB重组蛋白+CT、脂质体包裹UreB重组蛋白、脂质体包裹UreB重组蛋白和CT、脂质体包裹(UreB+Kat+CT),每周1次共4次,末次攻击2周再用活幽门螺杆菌(Hp)攻击3次,5周后处死小鼠,行胃组织快速尿素酶试验、Hp的定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分.RT-PCR检测小鼠脾淋巴细胞中γ-干扰素(INF-γ)和白细胞介素-4(IL-4)表达.脂质体疫苗电镜下负染,显示粒径为(0.7±0.2)μm.PBS组、空白脂质体组、UreB重组蛋白+CT组、脂质体包裹UreB重组蛋白组、脂质体包裹UreB重组蛋白和CT组、脂质体包裹(UreB+Kat+CT)组的免疫保护率分别为0(0/11)、0(0/11)、58.3%(7/12)、54.5%(6/11)、63.6%(7/11)、75.0%(9/12),UreB重组蛋白+CT组免疫保护率与脂质体包裹UreB重组蛋白组比较无显著性差异(P>0.05),脂质体包裹UreB重组蛋白+CT组免疫保护率与脂质体包裹(UreB+Kat+CT)组比较有显著性差异(P<0.05).各疫苗组Hp定植评分均明显低于PBS和脂质体对照组(P<0.01),且UreB+Kat双价疫苗组较三个单价疫苗组比较也有显著性差异(P<0.05).疫苗组不仅能降低Hp的定植,而且能减轻Hp造成的小鼠胃黏膜的局部慢性炎症反应(P<0.05),但各疫苗组间比较未见显著性差异(P>0.05).Hp攻击后,与对照组比较,各疫苗组脾淋巴细胞INF-γmRNA水平较低(P<0.05),而IL-4mRNA水平则较高(P<0.05),各疫苗组间比较未见显著性差异(P>0.05).研究表明,在小鼠Hp感染模型中脂质体能部分代替霍乱毒素的免疫佐剂作用,在Hp攻击后,未经免疫小鼠体内诱导以Th1为主应答,免疫小鼠体内则诱导以Th2为主的免疫应答. 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 尿素酶b亚单位 过氧化氢酶 疫苗 脂质体 免疫应答
下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部