山莨菪碱下行调节培养的内皮细胞表达纤溶酶原激活物抑制剂1

为了探讨山莨菪碱对正常及内毒素脂多糖刺激过的内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂 1表达的作用及机制。本文采用酶消化法培养人脐静脉内皮细胞 ;用酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法检测人脐静脉内皮细胞条件培养基纤溶酶原激活物抑制剂 1和组织型纤溶酶原激活物蛋白量 ;用Northern印迹方法检测人脐静脉内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂 1的mRNA表达 ;用电泳迁移检测法对人脐静脉内皮细胞的核因子κB核内转移情况进行研究。结果发现 ,脂多糖能使人脐静脉内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂 1蛋白及mRNA表达显著增强 ,但加入山莨菪碱后 ,脂多糖的这种作用明显减弱。而且 ,山莨菪碱还能抑制人脐静脉内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂 1基础水平的表达。经脂多糖刺激的人脐静脉内皮细胞核提取物与核因子κB探针结合明显增强 ,而山莨菪碱则能阻止脂多糖致核因子κB的核内转移现象。提示山莨菪碱不仅下行调节脂多糖所致内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂 1的蛋白分泌和mRNA表达 ,而且下行调节其纤溶酶原激活物抑制剂 1基础水平表达 。

男性高尿酸血症患者血尿酸与PAI-1和内皮素的关系

目的:探讨中老年男性高尿酸血症患者血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)与内皮素(ET)水平变化,观察高尿酸对血管内皮细胞功能的影响。方法:随机选择35岁以上的男性高尿酸血症患者138例(高尿酸血症,UA组),年龄、地域相匹配的健康者80例为正常对照组。采用酶联免疫吸附双抗体夹心法测定PAI-1,采用放射免疫法测定ET。胰岛素抵抗指数采用稳态模型评估(HOMA-IR)。采用尿酸氧化酶法测定血尿酸。结果:(1)UA组PAI-1、ET水平高于正常对照(均P<0.01)。(2)UA组收缩压、舒张压、腰围与臀围比值、体质量指数与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(3)UA组胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、空腹血糖、糖负荷后2h血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR均显著高于正常对照组(P<0.05或P<0.01)。(4)UA组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)低于正常对照组(P<0.05)。(5)在以PAI-1为因变量的逐步回归分析中血尿酸、腰围与臀围比值、HOMA-IR进入回归方程(调整后R2=0.77,P<0.01)。(6)在以ET为因变量的逐步回归分析中,血尿酸、血肌酐、腰围与臀围比值、HOMA-IR进入回归方程(调整后R2=0.70,P<0.01)。结论:高尿酸是血管内皮细胞功能障碍独立的危险因素,降低血尿酸水平有望改善血管内皮细胞功能,减少动脉粥样硬化的发生和发展。

脂肪酸对人血管内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂-1表达的影响

为探讨不同种类脂肪酸对血管内皮细胞 (ECs)纤溶酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)表达的直接影响及影响水平 ,以不同浓度的亚麻酸、亚油酸、油酸、硬脂酸诱导培养ECs ,逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测PAI 1的mRNA和蛋白表达 ,随后以上述脂肪酸诱导转染了由PAI 1启动子控制表达的报告基因的ECs,ELISA检测PAI 1启动子转录活性 ,结果ECs中亚麻酸、亚油酸和油酸均浓度依赖地诱导PAI 1mRNA和蛋白表达 ,硬脂酸无影响 ,而它们对PAI 1启动子转录活性的影响与上述作用一致 ,提示不饱和脂肪酸通过提高PAI

尿酸对人脐静脉内皮细胞增殖及PAI-1分泌的影响

目的探讨尿酸(UA)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖及纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)分泌的影响,以阐明其在动脉粥样硬化发生中的作用。方法用MTT比色法观察不同浓度UA(0、2、4、8、16 mg/dL)作用24 h对HUVECs增殖的影响;用ELISA方法评价不同浓度UA(0、2、4、8、16 mg/dL)作用HUVECs 24 h及8 mg/dLUA作用HUVECs 1、3、6、12、24 h对细胞培养液中PAI-1的影响。结果UA呈剂量依赖性抑制内皮细胞增殖,8、16 mg/dL UA组与对照组(0 mg/dL UA)比较均有统计学意义(P<0.01)。UA诱导HUVECs分泌PAI-1呈浓度依赖性增加,8、16 mg/dL UA组与对照组比较均有统计学意义(P<0.01);UA诱导HUVECs分泌PAI-1亦呈时间依赖性,与1 h比较,3、6、12、24 h均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论UA抑制HUVECs增殖,诱导HUVECs分泌PAI-1,这可能与高尿酸血症致动脉粥样硬化作用机制有关。

妊娠期高血压疾病患者血清UA、PAI-1水平与血液流变学指标关系

目的:探讨妊娠期高血压患者血清尿酸(UA)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAl-1)水平与血液流变学指标的关系。方法:以2017年2月-2018年2月本院治疗的216例妊娠期高血压患者为观察组,另选取正常妊娠孕妇216例为对照组。比较两组血清UA、PAI-1水平与血液流变学指标及其相关性。结果:观察组UA、PAI-1、全血低切还原黏度(LRV)、血浆黏度(PV)、纤维蛋白原(Fib)水平均低于对照组(P<0.05),两组全血中切还原黏度(MRV)、全血高切还原黏度(HRV)未见差异(P>0.05);UA、PAI-1水平分别与LRV、PV、Fib呈现正相关,且UA、PAI-1、LRV、PV、Fib均为妊娠期高血压患者的独立危险因素(P<0.05)。结论:妊娠期高血压患者血清UA、PAI-1水平与血液流变学指标呈显著相关性。在疾病治疗过程中,可以根据上述指标分析并开展干预治疗,保障母婴安全。

雌激素对血液凝固与纤维蛋白溶解的影响及对心血管的保护作用

为了探讨雌激素促纤溶、抗凝血的心血管保护作用及其细胞和分子生物学机制，应用全自动血凝／纤溶分析仪和发色底物显色测定、组织和细胞原位杂交及激光共聚焦扫描显微镜等技术，观察去卵巢大鼠纤维蛋白原、组织型纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂－１活性及基因表达，以及补充雌激素的影响。同时观察人脐静脉内皮细胞中雌激素对组织型纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂－１基因表达和活性的影响以及单个内皮细胞胞内游离钙离子的变化。结果发现，去卵巢大鼠血浆纤维蛋白原含量和纤溶酶原激活物抑制剂－１活性高于对照组（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），血浆组织型纤溶酶原激活物活性低于对照组，补充雌激素后，血浆纤维蛋白原含量和组织型纤溶酶原激活物活性接近对照组。去卵巢大鼠冠状动脉及心肌组织中纤溶酶原激活物抑制剂－１ｍＲＮＡ明显增高。还发现，当雌激素浓度为１０－８和１０－６ｍｏｌ／Ｌ时内皮细胞培养液中组织型纤溶酶原激活物活性高于对照组（Ｐ＜０．０５）；内皮细胞中组织型纤溶酶原激活物ｍＲＮＡ水平随雌激素浓度而升高；而纤溶酶原激活物抑制剂－１ｍＲＮＡ水平在各组中无统计学差异；内皮细胞胞内游离钙离子浓度在雌激素浓度为１０－８ｍｏｌ／Ｌ时降低，１０－６ｍ?

人参皂甙对血管内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂1和核因子-κB的作用

目的 研究人参皂甙对内毒素脂多糖 (lipopolisaccharide ,LPS)致血管内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂 1(plasminogenactivatorinhibitortype 1,PAI 1)表达和核因子 κB (NF κB)激活的影响 ,探讨人参皂甙对心血管疾病的保健和防治机制。方法 用酶消化法培养人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells ,HUVEC) ;ELISA方法检测HUVEC条件培养液PAI 1蛋白量 ;Northernblot检测HUVECPAI 1的mRNA表达 ;免疫荧光检测HUVECNF κB的分布 ;电泳迁移变动检测法检测HUVEC核提取物NF κBDNA结合活性。结果 LPS能使HUVECPAI 1蛋白及mRNA表达显著增强 ,人参皂甙则使LPS的这种作用明显减弱。免疫荧光显示 ,LPS促使HUVECNF κB向细胞核内转移 ,人参皂甙则能阻止LPS诱导的NF κB核内转移 ;电泳迁移变动检测法研究发现 ,人参皂甙能完全阻止LPS致内皮细胞核提取物NF κBDNA结合活性。结论 人参皂甙对心血管疾病的防治机制之一是通过拮抗LPS致HUVECPAI 1的表达。而且 ,这种拮抗作用可能通过NF κB途径来转导。

血管紧张素Ⅱ和血管紧张素1-7对内皮细胞释放组织纤溶酶原激活物及其抑制剂-1的影响

目的 :研究血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )和血管紧张素 1 7[Ang ( 1 7) ]对内皮细胞分泌组织纤溶酶原激活物 (t PA)和纤溶酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)的影响。方法 :培养内皮细胞株 (ECV30 4 ) ,分为AngⅡ和Ang ( 1 7)刺激组 ,培养基中AngⅡ和Ang ( 1 7)加至终浓度为 5、10、2 5、5 0、10 0nmol/L ,2 4h后测定上清液中的t PA和PAI 1的含量。结果 :内皮细胞在AngⅡ终浓度为 5 0、10 0nmol/L组刺激 2 4h后 ,其分泌的PAI 1含量较对照组有明显升高 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。而Ang ( 1 7)在同样浓度组却显著降低PAI 1(P <0 .0 5 ) ,AngⅡ和Ang ( 1 7)两组t PA含量差异无统计学意义 ( P >0 .0 5 )。结论 :AngⅡ对内皮细胞株分泌的PAI 1有显著的升高作用 ,而Ang ( 1 7)对PAI 1作用相反。两者对t PA均无显著影响。提示AngⅡ和Ang ( 1 7)

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞纤溶系统的影响

目的探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对血管内皮细胞纤溶系统影响。方法(1)将体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)分为10个实验组(0、10、50、200、500μmol/LHcy组及叶酸和上述各Hcy点共同培养组),培养24h后,酶联免疫吸附实验法(ELISA)测定各组细胞上清液中纤溶酶原激活剂(plasminogenactivator,tPA)及纤溶酶原激活物抑制剂1(plasminogenactivatorinhibitor1,PAI1)抗原含量,逆转录聚合酶链反应分析(RTPCR)法分析各组tPA及PAI1的mRNA表达水平。(2)急性心肌梗死(AMI)患者53例及健康对照组48例,ELISA测定空腹血浆tPA及PAI1含量,高效液相色谱法测定血浆Hcy水平。结果(1)500μmol/LHcy组PAI1抗原及mRNA表达水平均明显增高(P<0.05)。(2)以单纯培养基为对照组,生理浓度Hcy组内皮细胞tPA抗原合成及mRNA表达明显增高(P<0.05),而以10μmol/LHcy组为对照组时,500μmol/LHcy组tPA抗原合成及mRNA表达水平则明显减少(P<0.05)。(3)500μmol/LHcy与叶酸共同培养组和单纯Hcy组相比,可以明显提高内皮细胞tPA抗原的合成及mRNA表达,减少PAI1抗原合成及mRNA表达(P<0.05)。(4)AMI组Hcy、tPA及PAI1均明显高于健康对照组(P<0.05)。结论在体外细胞时,超生理浓度Hcy可以通过下调tPA、上调PAI1的mRNA表达,减少内皮细胞tPA抗原的分泌及增加PAI1抗原的合成,可能降低纤溶系统的活性。叶酸则可以减少Hcy引起内皮细胞纤溶系统的损害,起到保护作用。Hcy是AMI的一个独立危险因素。

肺血栓栓塞症患者凝血纤溶系统及肺血管内皮功能的变化

目的探讨肺血栓栓塞症(PTE)患者体内凝血纤溶系统及肺血管内皮功能的变化及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测80例PTE患者(急性大面积PTE组20例、非大面积PTE组60例)、40名正常人(对照组)的血D-二聚体(D-D)、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、纤溶酶原激活剂抑制物1(PAI-1)、血浆蛋白S(Ps)、血浆蛋白C(Pc)、凝血酶调节蛋白(TM)、抗心磷脂抗体(ACA)、同型半胱氨酸(Hcy)含量;采用发色底物法检测抗凝血酶Ⅲ活性(AT-Ⅲ)。结果急性大面积PTE组患者血D-D、t-PA、PAI-1、Ps、TM、含量分别为(1.46±0.62)mg/L、(11.4±6.9)μg/L、(88.2±27.5)μg/L、(22.40±9.40)mg/L、(6.8±1.1)μg/L,非大面积PTE组分别是(0.92±0.27)mg/L、(6.6±1.5)μg/L、(60.1±26.1)μg/L、(23.90±10.70)mg/L、(6.3±1.5)μg/L,均显著高于正常对照组的(0.38±0.10)mg/L、(4.7±1.4)μg/L、(35.7±9.2)μg/L、(16.10±6.20)mg/L、(3.0±0.5)μg/L(分别P<0.01、<0.05)。急性大面积PTE组患者血AT-Ⅲ含量为(86.0±11.8)%,非大面积PTE组为(90.1±9.0)%,显著低于正常对照组的(102.6±9.20)%(P分别<0.01、0.05)。两PET组患者ACA-IgG、IgM、IgA显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PTE患者存在凝血纤溶系统功能失衡和肺血管内皮损伤。

2型糖尿病患者糖耐量正常一级亲属血管内皮功能及炎症因子的研究

目的研究2型糖尿病患者一级亲属糖耐量正常者(FDR)的血管内皮功能、炎症因子水平及其影响因素。方法测定31例正常人、57例FDR的血管内皮功能、血浆纤溶酶原激活物抑制物1(PAI1)及血清可溶性血管细胞黏附分子1(VCAM1)水平,同时测定胰岛素水平,计算胰岛素敏感性(IAI)。结果与正常对照组比较,FDR内皮依赖性血管舒张功能减低[(1245±337)%比(503±034)%],IAI降低[(-379±057)比(-411±046)],血浆PAI1水平升高[(3046±1228)μg/L比(3925±654)μg/L],血清VCAM1水平升高[(63731±10732)μg/L比(74239±12431)μg/L],差异均有统计学意义(P值均<005)。结论糖耐量正常的2型糖尿病患者一级亲属胰岛素敏感指数下降、血管内皮功能受损、纤溶活性降低,且血管内皮功能失调与胰岛素抵抗密切相关。

溶栓和抗凝治疗对肺血栓栓塞患者血管内皮细胞及凝血纤溶功能的影响

目的探讨肺血栓栓塞症(PTE)患者溶栓、抗凝治疗前后不同时相血管内皮细胞和凝血纤溶功能的变化及其临床意义。方法用重组组织型纤溶酶原激活物(rt-PA)溶栓治疗PTE患者7例(溶栓组),用低分子肝素(LMWH)为主的抗凝药物治疗PTE患者17例(抗凝组),动态观察两组患者溶栓、抗凝前后不同时相(溶栓组于溶栓治疗前及治疗结束后4、24h,4、7d5个时相;抗凝组于抗凝治疗前及治疗开始后24h,7、14d4个时相)内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、D-二聚体(D-dimer)等指标的变化,并将两组患者治疗前上述指标的检测结果与20名正常人(对照组)的结果进行比较。结果溶栓组溶栓后4h ET-1、D-dimer均有一明显的高峰出现,分别为(103.7±26.6)ng/L、(5.0±1.7)mg/L,与其他时相比差异均有统计学意义(前者P<0.05、后者P<0.01)。抗凝组抗凝后14d与抗凝前比较,ET-1由(72.0±18.3)ng/L降至(52.8±13.9)ng/L,NO由(48±14)μmol/L升至(66±24)μmol/L,AT-Ⅲ由(90±7)%升至(99±4)%(P均<0.05)。溶栓后4h ET-1的升高与PaO2、D-dimer的升高程度正相关(r值分别为0.751、0.782,P均<0.05)。结论ET-1、D-dimer的水平在溶栓前后,ET-1、NO、AT-Ⅲ的水平在抗凝前后均发生了变化,溶栓后早期ET-1、D-dimer的变化可反映溶栓效果。溶栓和抗凝治疗有助于调节凝血纤溶平衡和保护血管内皮细胞功能。

山莨菪碱抗血栓形成的机制研究

目的 观察中药山莨菪碱对内毒素脂多糖 (LPS)所致血管内皮细胞表达纤溶酶原激活物抑制剂 1 (PAI 1 )的作用和作用机制。方法 用胰蛋白酶消化法培养人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) ;采用酶联免疫吸附试验法和Northern印迹方法观察HUVEC条件培养液PAI 1蛋白量及mRNA表达 ;用免疫细胞化学法检测HUVEC核因子NF κB的核内转移情况。结果 LPS显著增加培养HUVEC的PAI 1蛋白和mRNA表达 ;然而当山莨菪碱和LPS同时作用于HUVEC时 ,LPS对PAI 1的上行调节被明显减弱 ,PAI 1蛋白及mRNA表达量分别为LPS单独作用的 30 %和 2 4%。而且 ,山莨菪碱还可以降低HUVEC基础水平PAI 1的蛋白和mRNA表达 ,分别降低到 74%和 70 %。此外 ,山莨菪碱能阻止LPS所致HUVEC核因子NF κB向核内转移。结论 山莨菪碱不仅抑制LPS诱导的内皮细胞PAI 1蛋白和mRNA表达 ,而且抑制其基础水平的PAI 1表达 ,从而发挥抗血栓形成作用。山莨菪碱可能通过NF κB途径抑制LPS所致的内皮细胞PAI