熊果酸诱导人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的作用

舌癌发生率高[1],预后差,常采用手术为主的综合治疗方式。由于位置特殊,手术切除范围受限,且易毁损容貌。寻找有效的治疗药物十分迫切。熊果酸（ursolic acid,UA）是一种三萜类化合物,具有抑制肿瘤生长、诱导癌细胞分化的作用[2,3]。目前国内、外尚无关于UA作用于舌癌的报道,本文应用不同浓度的UA作用于人舌癌Tca8113细胞,探讨其对舌癌细胞增殖和凋亡的影响。

熊果酸诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的实验研究

目的:探讨三萜类中药成分熊果酸(UrsolicAcid,UA)诱导乳腺癌MCF 7细胞的凋亡作用,从而为开发应用于治疗乳腺癌的药物提供科学依据。方法:应用细胞培养技术,用不同浓度的药物在一定的时间内处理MCF -7细胞,采用MTT法、活细胞原位光镜和荧光染色技术、流式细胞技术(FCM)、荧光免疫组织化学技术,研究药物诱导细胞凋亡引起的形态改变、细胞周期变化、p53蛋白表达。结果:UA剂量依赖性的抑制MCF -7细胞增殖,半数生长抑制剂量(IC50 )为22. 6±3. 0μmol/L,凋亡促进因子p53蛋白表达量增加,有典型的凋亡形态学特征,核质向边缘固缩,有凋亡小体。结论:UA通过抑制MCF -7细胞生长和上调p53的表达诱导细胞凋亡发挥其抗肿瘤细胞的作用。

熊果酸对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的：复制氧化性低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs）氧化损伤模型,并探讨熊果酸（Ursolic Acid,UA）对其保护作用。方法：以体外培养的HUVECs为实验对象,采用不同浓度（5,10,15,20μM）熊果酸及阳性对照药物维生素E预处理细胞16 h,再加入100μg/ml的ox-LDL培养24 h造成细胞氧化损伤。CCK-8检测细胞存活率,酶联免疫法检测各组细胞培养上清液过氧化氢（H2O2）、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）含量,超氧化物歧化酶（SOD）活力以及各组细胞裂解液中一氧化氮合成酶（NOS）活力;采用SPSS 17.0软件对实验数据进行统计学分析。结果：与正常组相比,模型组细胞存活率、NO、SOD、NOS水平明显降低,MDA、H2O2水平明显增加;与模型组比较,熊果酸在5-20μM范围内,呈剂量依赖性提高细胞存活率,上调NO、SOD、NOS水平,并下调MDA、H2O2水平。结论：100μg/ml的ox-LDL能够诱导HUVECs发生氧化损伤,熊果酸能够通过抗氧化发挥保护作用,其机制可能与维持NOS、SOD活性、减少MDA、H2O2生成等有关。

香青兰化学成分研究

目的:研究香青兰化学成分。方法:采用活性追踪分离的方法,对香青兰全草进行了系统萃取,反复柱层析。结果:从总浸膏中分离得到了1个化合物,命名为α,从石油醚层和氯仿层分别得到3个化合物,分别命名为S2、S3和L1。4个化合物鉴定为:化合物α为田蓟甘(tilianin),化合物L1为熊果酸(ursolie acid),化合物S2为豆甾醇(stigmasterol),化合物S3为乌发醇(uvqol)。结论:化合物S2、S3和化合物L1均为该植物首次获得。

熊果酸诱导SKOV3细胞凋亡与线粒体凋亡通路

目的:观察熊果酸(Ursolic acid,UA)是否通过激活卵巢癌SKOV3细胞的线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。方法:MTT法检测细胞增殖抑制,采用流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位,免疫印迹法检测细胞色素C的表达,分光光度法检测Caspase-9、Caspase-3的活性。结果:熊果酸可以抑制SKOV3细胞增殖,40μmol/L熊果酸,作用于SKOV3细胞48 h,增殖抑制率可以达到76.85±3.1%;UA可以诱导细胞发生凋亡;熊果酸可以降低SKOV3细胞的线粒体膜电位,促进细胞色素C的表达,增强Caspase-9、Caspase-3的活性。结论:熊果酸可以促进SKOV3细胞的凋亡,可能的作用机制之一是可以激活SKOV3细胞的线粒体凋亡通路。

熊果酸对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用及机制

目的:研究熊果酸对乙醇所致小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用及其机制。方法:将昆明种小鼠随机分为正常对照组、模型组、熊果酸组(15、30、60 mg/kg)及联苯双酯组(5.625 mg/kg)。每日灌胃给药1次,连续7 d。末次给药1 h后,除正常对照组外,分别灌胃给予50%乙醇14 ml/kg建立急性酒精性肝损伤模型。造模12 h后,处理动物,检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)和甘油三酯(TG)水平,以及肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。苏木素-伊红(HE)染色,观察肝组织病理学变化。结果:与模型组比较,熊果酸组(15、30、60 mg/kg)均能明显降低血清中ALT、AST、GGT和TG水平以及肝组织中MDA、TNF-α含量,升高SOD活性和GSH含量。组织病理学显示,熊果酸可明显减轻小鼠肝损伤的病变程度。结论:熊果酸对乙醇所致的小鼠急性酒精性肝损伤具有保护作用,其机制可能与减轻脂质过氧化,抑制氧化应激以及炎症因子的过量释放,减轻炎症反应有关。

熊果酸对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏的保护作用及机制

目的:研究熊果酸(Ursolic Acid,UA)对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏的保护作用及其机制。方法:取120只大鼠随机分为正常对照组、模型组,熊果酸(10、20、40mg/kg)组和多烯磷脂酰胆碱(64mg/kg)组;采用高脂饲料喂养8周的方法制备非酒精性脂肪肝大鼠模型;造模过程灌胃给药,每天1次。8周后,计算肝脏指数;测定血清中转氨酶(ALT、AST)、胆碱酯酶(CHE)含量以及血脂(TC、TG、LDL-C、HDL-C)和游离脂肪酸(FFA)水平;测定肝脏组织中TC和TG含量;ELISA法测定血清中炎症细胞因子(TNF-α、IL-6)水平;HE染色法观察肝脏组织结构形态学变化并行肝组织脂肪变性分级。结果:与模型组比较,熊果酸(20、40mg/kg)组大鼠肝脏指数显著降低,血清中ALT、AST、CHE含量和TC、TG、LDL-C、FFA水平显著降低,肝组织中TC和TG含量显著降低,血清中TNF-α、IL-6水平显著降低;熊果酸40mg/kg组HDL-C含量显著升高;熊果酸治疗组大鼠肝脏组织病变以及肝细胞脂肪性病变、炎症病变均明显改善,以熊果酸40mg/kg组效果最为显著,熊果酸(20、40mg/kg)组脂肪性病变和炎症病变程度等级较模型组均显著降低。结论:熊果酸对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏组织具有保护作用;作用机制可能与熊果酸能够有效调节血脂,降低炎症因子水平、抑制炎症反应有关。

熊果酸对H_2O_2诱导的HUVECs损伤的保护作用

目的:探讨熊果酸(ursolic acid,UA)对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激的保护及相关分子机制。方法:培养人脐静脉内皮细胞,分组为正常组,H2O2组(400μmol/L,作用8h)、1μmol/L熊果酸预给药组、5μmol/L熊果酸预给药组、10μmol/L熊果酸预给药组、15μmol/L熊果酸预给药组和阳性对照组(0.1g/L Vit E+H2O2)。采用CCK-8检测各组内皮细胞的活性,DCFH-DA荧光探针法检测ROS含量,硝酸还原酶法检测细胞培养上清液中NO含量及细胞内NOS的表达,Western blotting检测有效剂量组内皮细胞Pten、Akt、p-Akt(ser473)、e NOS的蛋白表达水平。结果:H2O2处理后,细胞存活率较正常组明显下降,NO、NOS含量降低,ROS水平升高;熊果酸给药后,其中三组细胞存活率明显升高,NO和NOS的水平明显升高。细胞内ROS含量降低,Pten蛋白水平表达降低,Akt磷酸化水平增加,e NOS表达水平升高。结论:熊果酸预给药能明显改善HUVECs的细胞活性,可能与促进内皮细胞NO的释放和熊果酸潜在的清除ROS而直接抗氧化的作用有关,其机制可能涉及到Pten的下调和Pi3k/Akt信号通路的激活。

熊果酸对大鼠肠系膜缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的:研究熊果酸(Ursolic acid,UA)对大鼠肠系膜缺血再灌注损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:将120只清洁级雄性Wistar大鼠随机分假手术组、肠系膜缺血再灌注模型对照组、熊果酸(40、80和120mg/kg)预防组,银杏叶提取物(3.15mg/kg)阳性对照组,每组20只;采用夹闭肠系膜上动脉45 min后去夹的方法制备肠系膜缺血再灌注损伤大鼠模型,于再灌注前10min迅速通过尾静脉给药。再灌注6h后,观察各组大鼠肠组织外观并测定含水量(IWC);通过苏木精-尹红(HE)染色观察肠组织病理学改变并进行肠组织损伤评分(Chiu's氏评分);通过原位末端转移酶标记染色(TUNEL染色)的方法观察肠组织细胞凋亡状况并进行凋亡指数评分;检测肠系膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和内毒素水平;检测肠组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与肠系膜缺血再灌注模型对照组相比,熊果酸治疗组大鼠肠组织颜色明显变红润,熊果酸80、120 mg/kg预防组含水量显著降低;肠组织病理学改变明显减轻,其中熊果酸80、120 mg/kg预防组Chiu's氏评分显著降低;肠组织凋亡状况明显减轻,其中熊果酸80、120 mg/kg预防组凋亡指数评分显著降低;熊果酸80和120 mg/kg预防组大鼠肠组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和内毒素表达水平显著下降且IL-10水平和SOD,CAT活性显著升高,熊果酸80和120 mg/kg预防组大鼠肠组织中MDA含量显著降低;上述作用以熊果酸120 mg/kg预防组最为显著。结论:熊果酸对大鼠肠系膜缺血再灌注损伤具有剂量依赖性的保护作用,其作用机制可能与熊果酸能够有效改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤,抑制炎症反应,改善肠组织病变并抑制肠细胞凋亡有关。

熊果酸对顺铂所致耳毒小鼠耳蜗3-NT及calpain 1表达的影响

目的:观察熊果酸对顺铂致毒小鼠耳蜗3-硝基酪氨酸及钙蛋白酶1表达的影响,探究熊果酸对顺铂引起的耳毒性的防护作用及其机制。方法:选用5周龄健康BALB/c小鼠,随机分成对照组、熊果酸组(80 mg/kg)、顺铂组(4.5 mg/kg)及顺铂(4.5mg/kg)联合熊果酸(80 mg/kg)组。各组动物均连续腹腔注射给药5天,每天1次。应用Western blot技术及显微图像分析观察小鼠耳蜗中3-硝基酪氨酸和钙蛋白酶1的表达,并结合听脑干反应(ABR)检测并观察用药前后小鼠听阈的改变。此外,采用Fluo-3/AM染色法检测小鼠耳蜗内Ca^(2+)的浓度改变。结果:熊果酸(80 mg/kg)联合顺铂小鼠听脑干反应阈移和耳蜗内Ca^(2+)浓度的升高以及耳蜗3-硝基酪氨酸和钙蛋白酶1的表达均明显低于顺铂组。结论:熊果酸(80 mg/kg)可通过显著抑制顺铂所致3-硝基酪氨酸、钙蛋白酶1的高表达以及细胞内Ca^(2+)浓度的升高,从而有效拮抗顺铂的耳毒性,改善听功能。

水栀子醋酸乙酯部位萜类成分及其肾细胞保护活性研究

目的研究水栀子Gardenia jasminoides var.radicans的萜类成分及其肾细胞保护活性。方法采用硅胶、ODS等柱色谱和制备液相色谱等手段分离纯化,根据波谱数据鉴定化合物结构。采用MTT法探究所得化合物对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小管上皮(NRK52e)细胞损伤的干预作用。结果分离并鉴定出17个化合物,分别为3-oxo-2,6,6-trimethylcyclohex-l-ene-lcarboxylic acid(1)、rehmapicrogenin monomethyl ester(2)、jasminodiol(3)、4-hydroxy-2,6,6-trimethylcyclohex-1-enecarboxylic acid(4)、jasminoside A(5)、jasminoside E(6)、6'-O-trans-sinapoyljasminoside L(7)、6'-O-trans-sinapoyljasminoside B(8)、6'-O-(3-methoxyl-4-hydroxyl-coumaroyl)-epijasminoside B(9)、jasminoside S(10)、11-氧代熊果酸(11)、钩藤酸E(12)、(1S*,17R*,20R*,24Z)-1,21,26-trihydroxycycloart-24(25)-en-3-olide(13)、3β,6β,23-三羟基齐墩果酸(14)、冬青酸(15)、栀子花甲酸(16)、栀子花乙酸(17)。结论化合物1为新天然产物,化合物2、9、11为首次从栀子属中分离得到,其余化合物均为首次从该植物中分离得到。化合物1、2、9、14对LPS诱导的NRK52e细胞损伤具有明显的保护作用。