松萝提取物通过调节HMGB1-RAGE炎症通路治疗类风湿关节炎的机制研究

目的 探讨松萝提取物通过调节(high mobility group protein, HMGB1-RAGE)信号通路治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的机制。方法 54只CIA大鼠随机平均分为空白组,模型组,羟氯喹组,松萝提取物高、中、低剂量组,除空白组外,其余各组CIA大鼠均采用免疫诱导法建立RA模型,从造模第14 d后进行灌胃干预,连续用药14天后取血清及滑膜组织。ELISA检测(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、(interleukin-1,IL-1β)、(interleukin-6,IL-6)、(interleukin-17,IL-17)、、(interleukin-23,IL-23)浓度水平,Rt-PCR检测HMGB1、RAGE mRNA的表达,Western blot法检测HMGB1、RAGE的蛋白活性。结果 模型组检测指标明显高于空白组。经过14天的干预治疗后,羟氯喹组、松萝提取物高、中、低剂量检测指标均有不同程度降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),与羟氯喹组比较,松萝提取物高剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 松萝提取物可抑制HMGB1、RAGE、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、IL-23在CIA大鼠中的表达。提示松萝提取物可能有望通过调节HMGB1-RAGE信号通路治疗类风湿关节炎。

松萝提取物对胶原诱导性关节炎大鼠HMGB1-RAGE自噬通路及关节炎性损伤的影响

目的:探讨松萝提取物对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)-晚期糖基化终产物受体(RAGE)自噬通路及关节炎性损伤的影响。方法:将54只大鼠随机分为空白对照组,模型对照组,松萝提取物低、中、高剂量组和羟氯喹组,每组9只。除空白对照组外,其余组采用Ⅱ型胶原乳剂建立CIA模型。松萝提取物低、中、高剂量组分别给予2mg·kg^(-1)·d^(-1)、6mg·kg^(-1)·d^(-1)、54 mg·kg^(-1)·d^(-1)松萝提取物灌胃,羟氯喹组给予36 mg·kg^(-1)·d^(-1)羟氯喹灌胃,空白对照组及模型对照组则予以等量的生理盐水灌胃。观察各组大鼠关节炎评分、肿胀程度和滑膜病理的变化,采用ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶(MMPs)、血管内皮生长因子(VEGF)、HMGB1的含量,PCR、WB检测蛋白HMGB1、RAGE、Beclin1、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、哺乳动物雷帕霉素靶点(mTOR)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的蛋白浓度及表达情况。结果:模型大鼠出现关节肿胀、变形,活动量减少,关节炎评分提示造模成功。经松萝提取物治疗后,大鼠的关节肿胀减轻,活动量增加,炎症反应减轻。与空白对照组比较,模型对照组血清TNF-α、MMPs、VEGF、HMGB1含量均增高,且HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK蛋白表达量均上升,Beclin1蛋白表达量下降(P<0.05)。与模型对照组比较,松萝提取物中、高剂量组及羟氯喹组HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK、TNF-α、MMPs、VEGF含量均降低,Beclin1蛋白表达量上升(P<0.05);与羟氯喹组比较,松萝提取物中、高剂量组抑制HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK表达,激活Beclin1的效果相当,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:松萝提取物能减轻CIA大鼠关节肿胀程度,降低血清TNF-α、MMPs、VEGF、HMGB1含量,抑制HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK蛋白的表达,提升Beclin1表达,增强细胞自噬,减少滑膜炎症反应。

松萝提取物对胶原诱导性关节炎大鼠高迁移率族蛋白B1介导的细胞自噬及炎症因子的影响

目的:研究松萝提取物对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜细胞中凋亡相关因子的影响,进一步探讨松萝提取物对CIA大鼠关节炎症及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)介导的细胞自噬的影响。方法:将54只Wistar雌性大鼠随机分为空白对照组,模型对照组,羟氯喹组,松萝提取物低、中、高剂量组,每组9只。松萝提取物低、中、高剂量组给药剂量分别为2 mg·kg^(-1)、6 mg·kg^(-1)、54 mg·kg^(-1),羟氯喹组给药剂量为36 mg·kg^(-1)。建立CIA大鼠模型后,连续灌胃给药28 d。ELISA法检测血清中HMGB1、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,RT-PCR检测HMGB1、Beclin1、PI3K C3 m RNA的表达,Western Blot法检测HMGB1、Beclin1、PI3K C3蛋白表达。结果:与空白对照组比较,各模型组HMGB1、TNF-α、IL-1β含量均增高,HMGB1、PI3K C3蛋白表达上升,Beclin1蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);与模型对照组比较,松萝提取物中、高剂量组和羟氯喹组HMGB1、TNF-α、IL-1β含量均降低,且HMGB1、PI3K C3蛋白表达下降,Beclin1蛋白表达上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:松萝提取物通过上调Beclin1蛋白,下调HMGB1、PI3K C3相关蛋白的表达,调节细胞自噬,降低CIA大鼠血清中HMGB1、IL-1β、TNF-α浓度,减轻关节炎症。

西藏长松萝浸提物抑菌作用研究

用苯、乙酸乙酯、乙醇、水等4种溶剂对长松萝进行浸提。浸提物抑菌试验表明,苯、乙酸乙酯、乙醇的浸提物对霉菌、细菌、酵母菌、植物病原菌有抑制作用,而水提物对所示菌种无抑制作用。

几种松萝中松萝酸含量及提取物清除DPPH自由基能力测定

为了得到提取松萝酸的最佳原料,采用紫外分光光度法在波长284 nm处对长松萝、环裂松萝、粗皮松萝、桦树松萝、亚花松萝中松萝酸含量进行提取分析,结果表明,长松萝主要活性成分松萝酸含量最高,达到5.66%以上。以分光光度法测定抗坏血酸清除二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的能力并制作清除率曲线,将IC值作为评价试样清除DPPH自由基能力的指标,应用于松萝提取物清除DPPH自由基能力的测定。将试样和抗坏血酸的测定结果进行比较,发现几种松萝提取物的清除DPPH自由基的能力均不强。

响应面分析法优化松萝多糖提取工艺的研究

采用响应面分析法优化了粗皮松萝(Usnea.montis-fuji)多糖的提取条件。在单因素实验基础上,选取提取温度、提取时间和液/料比为关键因素,根据central composite design(CCD)的中心组合原理设计实验,采用响应面分析法对粗皮松萝多糖的关键参数进行了优化研究,建立了松萝多糖提取含量的数学模型。结果表明:三个因素对松萝多糖提取含量的影响大小依次是提取时间>液/料比>提取温度;松萝多糖提取的最佳工艺参数:提取温度80℃,提取时间3.00h,液/料比40∶1。在此条件下,松萝粗多糖提取含量达到80.16mg/g,在最优条件下进行了验证实验,得到的实验结果与模型预测值比较吻合,验证了数学模型的有效性。

松萝酸提取工艺的研究

以破茎松萝为材料,分别以碱水或碱醇直接提取、制备松萝酸钠,并对松萝酸钠提取影响因素进行探究。对所得提取物进行分离和定性鉴定,并利用高效液相层析技术测定提取物中松萝酸的含量。通过单因素实验考察了NaOH和Na2CO3浓度对松萝酸提取的影响,用HPLC测定不同浓度碱液提取物中松萝酸的含量。实验结果说明,1.5%NaOH和75%乙醇+4%Na2CO3提取松萝酸效果较好,松萝酸提取得率最高,分别为1.75%和1.99%,破茎松萝材料中松萝酸含量为2.4%。

鹿心雪茶色素的研究

本文研究鹿心雪茶色素提取工艺以及色素的理化性能。利用色素的光谱性质,研究了酸、碱、热、光、金属离子以及食品添加剂对该色素稳定性的影响。该色素在不同的酸、碱介质和金属离子中颜色不同、光谱性质不同,但对热较稳定,且有一定的耐光性。研究结果表明:该色素为水溶性红色素,不同的物质或条件对该色素的稳定性影响不同,鹿心雪茶红色素作为一种天然食用色素可用于食品,医药等行业中。本研究可为今后开发鹿心雪茶色素及其综合利用提供依据。

松萝提取物对大鼠体重和运动能力影响的实验研究

目的研究松萝提取物对大强度耐力训练中大鼠体重和运动能力影响的机理,为松萝提取物作为运动补剂提供实验依据。方法以24只SD雄性大鼠为研究对象,随机分为安静组、运动组、运动加药组三组,每组各8只雄性大鼠。通过定时给大鼠灌胃淀粉溶液和松萝提取物溶液以及建立大鼠体重测量模型和大强度耐力训练大鼠动物跑台模型,测定运动大鼠力竭运动的体重和运动时间指标,研究松萝提取物对大强度耐力训练中大鼠体重和运动能力的影响。结果松萝提取物对大鼠的体重没有显著的影响,但对大鼠的运动能力有很明显的提高。因此,可利用松萝提取物开发大强度耐力运动项目的补充剂。

松萝提取物对CIA大鼠HMGB1介导的炎症因子表达的影响

目的:通过构建CIA大鼠模型,探讨松萝提取物对HMGB1介导的炎症因子表达的影响。方法:选择SPF级5周龄的Wistar雌性大鼠共54只,造模成功后随机分为空白组、模型组、羟氯喹组、松萝提取物低(2 mg/kg)、中(6 mg/kg)、高(54 mg/kg)剂量组,每组9只,分别用药干预,采用ELISA法检测血清中IL-1β、IL-6、IL-23、TNF-α、HMGB1的含量,PCR检测HMGB1、TLR2、TLR4 mRNA的表达,WB法检测TLR2、TLR4、HMGB1蛋白表达量。结果:松萝提取物低、中、高剂量组,模型组及羟氯喹组与空白组相比,其血清中的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-23、HMGB1含量均增高,且TLR2、TLR4、HMGB1蛋白表达量均上升,差异具有统计学意义(P<0.05)。松萝提取物中、高剂量组,羟氯喹组与模型组相比,HMGB1、TLR2、TLR4、IL-1β、IL-6、IL-23、TNF-α含量均降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与羟氯喹组相比,松萝提取物中剂量组、高剂量组均能下调HMGB1、TLR2、TLR4、IL-1β、IL-6、IL-23、TNF-α含量,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:松萝提取物能有效降低降CIA大鼠血清中HMGB1、IL-1β、IL-6、IL-23、TNF-α浓度,抑制HMGB1、TLR2、TLR4蛋白的表达。

松萝提取物对胶原诱导性关节炎大鼠HMGB1-RAGE通路及自噬相关基因的影响

目的探讨松萝提取物对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)-晚期糖基化终产物受体(RAGE)通路及自噬相关基因的影响。方法选择5周龄SPF级Wistar雌性大鼠54只,造模成功后分为空白组、模型组、羟氯喹(HCQ)组,松萝提取物低(2 mg/kg)、中(6 mg/kg)、高(54 mg/kg)剂量组,每组9只。空白组、模型组予生理盐水灌胃,其余各组进行相应药物干预。ELISA检测血清中IL-6、HMGB1水平,RT-PCR检测Beclin1、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Ⅲ型磷酸肌醇3激酶(PI3K C3)mRNA表达,Western blot检测HMGB1、RAGE、Beclin1、Bcl-2、PI3K C3蛋白表达。结果与空白组比较,松萝提取物低、中、高剂量组、模型组、HCQ组血清IL-6、HMGB1水平升高,滑膜组织HMGB1、RAGE蛋白表达和Bcl-2、PI3K C3 mRNA及蛋白表达升高,Beclin1 mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,HCQ组和松萝提取物中、高剂量组血清HMGB1、IL-6水平升高,滑膜组织HMGB1、RAGE蛋白表达和Bcl-2、PI3K C3 mRNA及蛋白表达降低,Beclin1 mRNA及蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与HCQ组比较,松萝提取物中、高剂量组上述指标无明显变化(P>0.05)。结论松萝提取物可能通过调控自噬水平,降低炎症反应。