Usp9y基因在不同发育阶段小鼠睾丸组织和睾丸相关细胞系中的表达特征

目的明确Usp9y基因在不同发育阶段小鼠睾丸组织和睾丸相关细胞系中的表达与定位并探究Usp9y的功能。方法利用生物信息学分析结合RT-PCR方法检测小鼠睾丸相关细胞系和C57BL/6J小鼠各个组织(子宫,睾丸,心,肝,脾,肺,肾,大脑,小脑,眼球)中Usp9y基因表达的特异性;利用q PCR法检测不同日龄小鼠睾丸中Usp9y基因的表达差异性。结果生物信息学分析结果显示Usp9y基因在成年小鼠睾丸中特异性表达(P <0. 05)。RT-PCR结果证实Usp9y在小鼠睾丸组织中特异性表达(P <0. 05)。usp9y在小鼠睾丸间质细胞(TM3)中特异性表达,在小鼠精原细胞(GC-1)和小鼠睾丸支持细胞(15P-1)中未检测到表达。q PCR结果显示相比其他日龄小鼠,18日龄的小鼠睾丸Usp9y表达显著升高(P <0. 05)。结论通过RT-PCR的方法确定Usp9y基因在TM3细胞中特异性表达;小鼠Usp9y基因在小鼠出生后18 d表达明显增高,上述结果表明Usp9y基因在精子发生早期发挥着不可替代的作用。

usp9y与Nna1基因的相互作用及对精子发生的影响

目的探究usp9y与引起该小鼠不育表型的突变基因Nna1之间的关系,以及该基因在精子发生中的影响。方法用分子克隆法构建pEGFP-usp9y-(nt1558-1955)真核表达载体,转染到HEK293T细胞中,检测其表达;将pEGFP-usp9y-(nt1558-1955)和pCMV-Myc-Nna1共转染至HEK293T细胞中,通过免疫共沉淀法分析usp9y和Nna1蛋白之间的相互作用;运用单基因表达谱法研究浦肯野细胞变性(pcd)小鼠中usp9y基因、与精子发生相关基因和信号通路关键因子的表达。结果 usp9y与Nna1可形成免疫沉淀复合物;pcd3J突变型小鼠睾丸组织中Nna1表达下调,usp9y表达量明显增高。结论二者之间存在一定的相互作用,可能共同参与小鼠的精子发生,但作用方式不明确;NF-κB细胞信号通路等可能参与了pcd小鼠的精子发生。

USP9Y基因在男性不育等疾病中的研究进展

Y染色体上的基因缺陷是导致男性生精障碍的重要因素之一,其中无精子症因子(azoospermia factor,AZF)区的基因缺失与男性不育关系十分密切。USP9Y(ubiquitin specific peptidase 9,Y-linked)基因是AZF区的重要基因之一,近年来的研究表明USP9Y基因的缺失和突变与不育男性无精子症和严重少精子症之间存在密切联系,因此被认为是Y染色体上的不育基因。明确USP9Y基因的功能及其缺陷在男性不育中的分子作用机制,能为临床男性不育提供早期和确切诊断、合理的治疗方法以及遗传咨询提供理论基础。

南宁市肉牛的Y染色体遗传多样性分析

[目的]为了探究广西南宁市肉牛的父系遗传背景与遗传组成。[方法]利用PCR扩增、限制性酶酶切和生物信息学方法,对南宁屠宰场的73头肉牛Y染色体USP9Y基因的遗传多态性进行分析。[结果]发现73头公牛USP9Y基因的PCR产物具有多态性,2头牛显示471 bp带型,71头牛显示552 bp带型。在71个552 bp带型中,有28个可以被SspI酶切成2条带(338 bp和215 bp),表明这28头牛为Y3单倍型组(38.36%),而其余43个不能被SspI酶切,表明这43头牛为Y2单倍型组(58.90%)。仅有2头牛的PCR产物为471 bp,表明这2头牛为Y1单倍型组(2.74%)。屠宰牛群的单倍型多样度为0.5122±0.0309,表明屠宰牛群的Y染色体遗传多样度较高。[结论]南宁市屠宰牛群的来源比较复杂,有普通牛(Y1与Y2单倍型组)和瘤牛(Y3单倍型组)2个父系起源。