轻型商用车的VPG技术及应用研究

为了提高悬架系统零部件耐久分析精度,减少开发周期,降低开发成本,首先本文制定了适用于轻型商用车使用场景的悬架系统耐久分析工况和试验工况,然后建立整车多提动力学模型,应用虚拟试验场(DVP)技术,进行时域下的虚拟试验场道路的整车动力学仿真,并对悬架系统零部件进行载荷分解。最后采用分解后的载荷进行零部件的有限元分析。该方法更真实的反映了整车在实际路面悬架受力情况,考虑因素更加全面,精度更高,分析方法更加有效。

甘蔗条纹花叶病毒HC-Pro、P3N-PIPO、CP和VPg基因酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测

为探索甘蔗条纹花叶病毒与甘蔗的互作机制,利用酵母双杂交技术筛选与SCSMV互作的甘蔗因子基因,利用PCR技术克隆了SCSMV的HC-Pro、P3N-PIPO、CP和VPg的编码区,构建到酵母双杂交诱饵载体p GBKT7上,获得了p GBKT7-HC-Pro、p GBKT7-P3N-PIPO、p GBKT7-CP和p GBKT7-VPg 4个诱饵载体。结果显示,将重组质粒转化酵母Y2HGold酵母菌株后,酵母菌株在SD/-Trp平板上生长良好,表明重组诱饵质粒表达产物对酵母细胞无毒性;在SD/-Trp/X-α-gal平板上长出白色菌落未变蓝,在SD/-Leu、SD/-Trp/-Ade、SD/-Trp/-His和SD/-Trp/X-α-gal/Ab A平板上不能生长,表明重组诱饵质粒表达产物对MEL1、ADE2、HIS3和AUR1-C报告基因无自激活作用。构建的诱饵表达载体可以作为诱饵用于文库筛选,为探索SCSMV侵染机制和发病机理奠定了基础。

利用改良SOE-PCR技术定点突变TuMVC4-VPg基因

芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,Tu MV)是白菜类蔬菜生产上的重要病害,其中Tu MV VPg基因在Tu MV侵染白菜类蔬菜的过程中起着至关重要的作用,且不同Tu MV株系的致病性不同。本试验采用改良的重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术,以Tu MV C4-VPg基因序列为模板,定点突变Tu MV C4-VPg与Tu MV CDN1-VPg基因间5个差异核苷酸位点(决定5个氨基酸差异)。结果表明:通过SOE-PCR技术获得了5个Tu MV C4-VPg基因的单点突变体,即Tu MV C4-VPg-Ⅰ、Tu MV C4-VPg-Ⅱ、Tu MV C4-VPg-Ⅲ、Tu MV C4-VPg-Ⅳ和Tu MV C4-VPg-Ⅴ。

应用酵母双杂交系统检测NIa-vpg与PRSV-CP蛋白间互作

将NIa-vpg与GAL4-BD蛋白融合作为DNA结合域蛋白,将PRSV-CP与GAL4-AD蛋白融合作为激活域蛋白,排除自身激活作用后,共转化酵母菌,通过β-半乳糖苷酶活性检测以及氨基酸营养缺陷生长实验分析它们之间的相互作用。结果表明NIa-vpg与PRSV-CP在酵母中存在相互作用,PRSV病毒运动蛋白自身的相互作用在植株感染和致病过程中可能起着重要作用。

病毒末端结合蛋白VPg的功能研究进展

病毒的末端结合蛋白VPg(Viral Protein Genome-linked)是一种多功能蛋白,存在于多种病毒中,与病毒基因组RNA5′-末端共价连接,在病毒的生命周期中以不同的剪切形式存在并行使不同的功能,参与病毒的复制、翻译等基本的生命活动。主要对目前关于VPg如何参与病毒的复制和翻译过程,以及在病毒蛋白质成熟和病毒移动过程中如何发挥作用的研究结果进行了综述。

口蹄疫病毒VPg2基因克隆表达及VPg2-ELISA检测抗体评价

成功亚克隆了口蹄疫病毒(FMDV)太保毒株3ABC中VPg2基因,并将其插入pGEX-4T-1表达载体构建重组表达质粒,Westernblotting分析表明,表达的VPg2蛋白与FMDV阳性血清发生反应。以VPg2表达蛋白为抗原建立间接ELISA方法,对背景清楚的试验牛血清进行检测,结果VPg2表达蛋白与空白对照组(C组)和灭活疫苗反复免疫组(CI组)牛血清均不发生反应,与未免疫直接攻毒组(D组)和免疫后攻毒组(I组)血清均发生反应;对D组和I组,VPg2表达蛋白抗体持续时间最长,可达90d,最早呈阳性反应时间为攻毒后第10天。VPg2表达蛋白抗体持续时间与先前测定的3ABC表达蛋白抗体几乎相同。用VPg2-ELISA方法检测2170份进口阴性牛血清,12份出现假阳性,假阳性率为0.55%,而用3ABC-ELISA方法检测,48份出现假阳性,假阳性率为2.21%。

Vpg在单股正链RNA病毒生命活动中的作用

在多种动、植物单股正链RNA病毒基因组的5'末端往往共价结合一个小分子Vpg蛋白,它可以与多种病毒蛋白或宿主细胞因子相互作用,并形成复合物,参与了病毒的翻译、复制或致病等基本生命活动,研究该蛋白的结构与功能对于阐述单股正链RNA病毒的生命本质具有重要意义,本文对近年来的相关研究进展进行了概括介绍。

兔出血症病毒VPg蛋白的原核表达及抗体制备

【目的】构建重组兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)VPg(Viral Protein Ge-nome-Linked,VPg)蛋白基因的原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达和纯化VPg蛋白,制备多克隆抗体,并检测抗体的基本特性。【方法】用PCR方法扩增RHDVVPg基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导,使之重组表达VPg蛋白,并用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白。PCR扩增获得了345bp的VPg基因,用纯化的重组VPg蛋白免疫试验兔,制备抗VPg的多克隆抗体,用Western blot检测其特异性。【结果】构建了pET-30a/VPg原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株后,成功表达了VPg蛋白。用该蛋白免疫试验兔后,制备的多克隆抗体能与VPg蛋白特异性反应。【结论】成功表达了RHDV VPg蛋白,并制备了特异性良好的多克隆抗体。

液晶显示模块VPG19264在单片机系统中的应用

本文通过介绍检测系统的设计实践,详细介绍了一种使用89C51单片机和液晶显示模块VPG19264进行图形汉字显示的软硬件设计方法和编程技巧。给出了VPG19264与单片机的硬件连接电路和部分程序代码。

猪札幌病毒VPg基因的原核表达及免疫原性研究

为获得猪札幌病毒病毒基因组连接蛋白(viral protein genome-linked,VPg),本试验以中国西北地区猪札幌病毒CH430株RNA为模板,通过RT-PCR扩增VPg基因,将其克隆至pMD19-T Simple Vector,双酶切及基因测序鉴定后,再亚克隆至pET-30a中构建重组质粒,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。将纯化的目的蛋白免疫家兔得到超免疫血清。结果显示,获得的VPg基因全长为339bp,编码113个氨基酸。SDS-PAGE结果显示,重组菌在37℃、1.0mmol/L IPTG诱导表达6h时重组蛋白表达量最高,表达的目的蛋白主要以包涵体的形式存在,大小为22ku,与预期结果相符。Western blotting分析结果表明,该重组蛋白与超免疫血清具有良好的反应原性。超免疫血清ELISA效价可达1∶12 800,且具有良好的特异性。本试验获得的超免疫血清为研究猪札幌病毒非结构蛋白VPg的结构与功能奠定了基础。

小麦黄花叶病毒编码VPg蛋白N端结构是VPg与核仁蛋白Fibrillarin互作区域

小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)属于马铃薯Y病毒科大麦黄花叶病毒属成员,其基因组是由两条正义单链RNA组成,共编码10个蛋白。其中,VPg(Viral protein genome-linked)作为病毒末端结合蛋白,与病毒基因组RNA 5’端共价连接。利用软件分析WYMV VPg蛋白氨基酸序列发现其N端具有核定位信号(NLS)序列,C端具有核输出信号(NES)序列。通过激光共聚焦显微镜观察VPg与GFP融合蛋白在烟草细胞中的表达情况发现,GFP-VPg主要定位于细胞核中。利用eYFP(n)标记核仁结构蛋白Fibrillarin与VPg进行双分子荧光互补实验发现,VPg与Fibrillarin互作且定位于细胞核中。根据VPg结构特点构建一系列缺失突变体与Fibrillarin的互作实验验证了它们之间的互作区域发生在N端NLS区域。

PVX病毒载体介导2种马铃薯Y病毒科病毒VPg蛋白表达诱导烟草叶片系统坏死的研究

芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)和槟榔坏死环斑病毒(Areca plam necrotic ringspot virus,ANRSV)是马铃薯Y病毒科(Potyviridae)中分别可诱导十字花科作物和槟榔产生坏死病症的2种不同属病毒。VPg(Viral protein genome linked)作为与马铃薯Y病毒科病毒基因组5′端的结合蛋白,在病毒复制、翻译和运动等侵染过程中发挥重要作用。本研究利用In-Fusion克隆策略分别构建了可表达3′端融合Strep蛋白标签序列的ANRSV和TuMV VPg全长编码基因的马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)载体pPVX-VPg-AR和pPVX-VPg-Tu。通过农杆菌渗透注射接种本生烟(Nicotiana benthamiana),利用RT-PCR、Strep蛋白标签亲和层析和Western blot等方法证明了PVX病毒载体能够介导VPg-AR和VPg-Tu蛋白在本生烟中系统表达,且发现这2种VPg蛋白的过量表达诱导本生烟叶片产生了不同程度的系统性坏死病症。进一步采用DAB和NBT染色,在产生坏死症状叶片中检测到大量活性氧(reactive oxygen species,ROS)的积累。因此,推测VPg可能是TuMV和ANRSV诱发植物病症产生的一个决定因子,为后续研究这2种病毒诱导症状形成机制奠定了基础。

基于VPG/FFC的商用车BOM的管理方法

为确保大规模定制中整车可配置物料清单(BOM)的完整性和准确性,提出了基于VPG/FFC的商用车BOM的管理方法。通过将商用车BOM按VPG/FFC进行分类,进而对不同的VPG/FFC的零件进行差异化检查来确保BOM的完整性和准确性。

基于VPG白噪声滤波模型在四轴车体系统驾驶室的平顺性研究

采用白噪声滤波法随机产生路面激励模型模拟不平路面下的虚拟测试车场VPG,建立四轴重型汽车半挂车列车机械系统的整车动力学模型,后基于能量法建立整车动力学方程.在微幅振动假设情况下将空间系统简化为平面系统,将某款国产整车参数代入搭建好的动力学模型时新增考虑鞍座刚度和阻尼参数,通过MATLAB的ode15s模块针对1/2整车系统进行微分方程求解后得到具体车体驾驶室相对动载的振动响应,得到系统的计算机仿真结果与实测相同路面等级和车速对比,最后使用实测路面参数进行分析该四轴整车驾驶室的平顺性.为后期利用该种方法在考虑鞍座情况下的多轴重卡开发及车路耦合领域的动力学仿真提供新思路.

基于虚拟试验场(VPG)整车强度耐久开发技术

强度耐久性能作为整车重要的属性性能,耐久属性的开发需要精确的客户使用工况载荷输入,传统的耐久载荷输入需要借助物理样车通过传感器进行测试。本文介绍一种实用性强,时效性强,精度高,经济可靠的疲劳载荷预测方法。基于虚拟试验场仿真技术,将真实路面转化成具有真实路面特征的虚拟路面,在Adams/Car软件虚拟环境下,建立整车虚拟样机,在虚拟环境下模拟仿真实车在试验场虚拟路面上以不同的速度进行运动,从而获得整车不同节点处的载荷谱,支持整车强度耐久属性的开发。

P型PRSV-VPg蛋白与寄主eIF4E蛋白的互作

为研究番木瓜环斑病毒P型株系(PRSV-P)的病毒基因组连接蛋白(VPg)与寄主eIF4E蛋白的互作,采用双分子荧光互补技术(BiFc),通过基因枪转化法轰击洋葱表皮,在荧光显微镜下观察两者间的互作结果。结果表明:番木瓜eIF4E与P型PRSV-VPg,西瓜eIF4E与P型PRSV-VPg蛋白均发生互作。eIF4E与VPg的互作为研究通过转基因方法抑制或过量表达突变关键位点的寄主因子,阻断关键因子互作获得抗病植株提供了可行性依据。

以P型PRSV-VPg为模板多位点突变获得W型PRSV-VPg的研究

以P型PRSV-VPg(Papaya Ringspot Virus,VPggene)基因为模板利用高保真酶通过两对引物(突变4个位点),PCR扩增获得一条276bp和一条141bp的两个小片段.以此为基础,利用长引物延伸和套叠PCR的方法,定点突变剩余5个位点,最后拼接获得W型PRSV-VPg基因.结果表明通过上述方案可以成功改造P型PRSV-VPg基因,获得与W型PRSV-VPg同源的目的基因,成功率为100%.该技术可以绕开传统的通过寻找毒源进行RT-PCR方法和人工合成方法获得病毒基因,其技术操作简单,且节约时间和成本,并在人工合成基因、多位点基因定点突变等方面具有很好的借鉴作用和应用价值.

安世亚太（ANSYS-CHINA）公司：VPG软件

VPG(虚拟实验场)是汽车开发的革命性技术，它提出了整车系统非线性分析的全新概念，是汽车CAE行业全方位的解决方案，分析内容包括动力学、耐久性、NVH、碰撞和被动安全等，其独特的专业化数据库功能使复杂的仿真工作简单化，缩短研发周期、降低研发成本、提高产品质量。

VPG在整车安全性分析中的特色

设计开发，成本控制，安全，节能与环保等已成为当前形势下汽车行业企业普遍关注的大事，仿真软件在其中发挥着越来越大的作用。

整车系统CAE分析软件VPG

以 LS-DYNA 为求解器的 VPG 软件作为世界领先的整车系统非线性分析一体化软件,具有强大的非线性动力学仿真功能。本文对该软件作一简要介绍。