基于TRPV1/Ras/p38MAPK信号通路研究电针调节肠易激综合征小鼠内脏痛作用机制

目的基于TRPV1/Ras/p38MAPK信号通路探讨电针抑制肠易激综合征(IBS)小鼠内脏痛外周敏化的作用机制。方法28只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、电针组和抑制剂组,采用三硝基苯磺酸灌肠制备IBS内脏痛敏模型,4周后电针组和抑制剂组分别电针双侧“足三里”、腹腔注射瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)受体抑制剂,连续7 d。腹部回撤反射(AWR)评分评估小鼠内脏痛情况,HE染色观察结肠组织形态,Western blot检测结肠组织TRPV1、p-p38、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6蛋白表达,ELISA检测结肠组织Ras-GTP含量,RT-qPCR检测结肠组织TRPV1、p38 mRNA表达。结果与正常组比较,模型组小鼠各压力下AWR评分显著升高(P<0.05,P<0.01),结肠组织TRPV1、p-p38、TNF-α、IL-6蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001),Ras-GTP含量显著升高(P<0.001),TRPV1、p38 mRNA表达升高(P<0.001);与模型组比较,电针组和抑制剂组小鼠各压力下AWR评分显著降低(P<0.05,P<0.01),结肠组织TRPV1、p-p38、TNF-α、IL-6蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),Ras-GTP含量显著降低(P<0.01,P<0.001),TRPV1、p38 mRNA表达显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。各组小鼠结肠组织形态无明显变化。结论电针能有效缓解IBS小鼠内脏痛敏,其镇痛效应可能与抑制结肠组织TRPV1/Ras/p38MAPK信号通路有关。

TRPV1在新生儿缺氧缺血性脑病中的作用研究进展

瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)在中枢神经系统中广泛分布,是一种非选择性阳离子通道。近年研究发现,TRPV1在神经细胞凋亡和自噬、介导药理性低温、抑制神经细胞炎症反应等方面可能发挥神经保护作用,这提示TRPV1可能与新生儿缺氧缺血性脑损伤有密切关系。本文总结近年来关于TRPV1在新生儿缺氧缺血性脑病中起潜在作用的相关观点,以期为后续实验和临床诊疗提供新的理论基础。

基于热敏通道TRPV1探讨温阳法治疗溃疡性结肠炎作用机制研究

目的研究温阳法对溃疡性结肠炎小鼠的改善作用及其作用机制。方法将60只小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组(0.2g/kg)、干姜水煎液低、中、高剂量组(1、2、4 g/kg)。3%DSS进行造模,造模成功后给予干姜水煎液灌胃7d。用HE染色观察病理学改变,ELISA法检测血清中IL-2、IL-6、IL-8的含量,qRT-PCR法检测结肠组织中TRPV1、p-TRPV1mRNA的表达水平,免疫组化法检测小鼠结肠组织TRPV1、p-TRPV1的蛋白表达。结果与模型组相比,干姜水煎液可显著减轻DSS诱导结肠炎小鼠的病理损伤,降低血清IL-6、IL-8水平,升高IL-2水平,可不同程度地降低结肠组织TRPV1、p-TRPV1mRNA及蛋白的表达。结论温阳法的代表药——干姜,可明显改善结肠炎小鼠的炎症,其机制可能与调节TRPV1热敏通道相关。

基于TRPV1通道蛋白探讨灵芝治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制

目的:观察灵芝对咳嗽变异性哮喘小鼠相关的TRPV1通道受体的调节作用,阐明灵芝治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制。方法:KM小鼠60只随机分为正常组、模型组、灵芝小剂量组、灵芝中剂量组、灵芝大剂量组、苏黄止咳胶囊组,每组10只。用OVA制备咳嗽变异性哮喘小鼠模型,灵芝小、中、大剂量组分别给予3g/kg、6g/kg、12g/kg浓度灵芝提取液灌胃;苏黄止咳胶囊组给予0.675g/kg浓度苏黄止咳胶囊内容物灌胃;模型组和正常组给予等体积生理盐水灌胃,连续6周。比较各组小鼠辣椒素诱导的咳嗽次数、肺泡灌洗液中细胞分类计数、肺组织TRPV1蛋白表达。结果:在给予不同剂量灵芝提取物灌胃后,小鼠辣椒素诱导咳嗽次数均有所降低,且呈现剂量依赖效应,与模型组相比,中剂量组(P<0.05)、大剂量组(P<0.01)存在显著差异。模型组BALF中细胞总数和单核细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞计数具有极显著增加(P<0.01),不同剂量灵芝组小鼠BALF中细胞总数和单核细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞计数呈剂量依赖性减少(P<0.05)。模型组小鼠肺组织存在显著的炎细胞浸润、杯状细胞增生和支气管黏液等病理表征,与正常组相比三项病理指标评分和总分均有极显著差异(P<0.01)。不同剂量灵芝组小鼠肺组织病理改变均有所缓解,并具有剂量依赖关系(P<0.05)。与正常组相比,模型组肺组织中TRPV1的表达量显著增加(P<0.01),不同剂量灵芝组小鼠肺组织TRPV1表达均有所下调,并具有剂量依赖关系(P<0.05)。结论:灵芝可能通过下调TRPV1表达发挥改善咳嗽变异性哮喘的作用。

含有TRPV1受体拮抗剂的修护霜对敏感性皮肤的改善作用

目的:评价含有TRPV1受体拮抗剂的修护霜对敏感性皮肤的改善作用及安全性。方法:采用半脸对照及使用前后自身对照研究,受试者在第一次随访根据随机号将修护霜涂抹于单侧面部,使用本品后进行即刻时间点TI敏感程度评估(30s,1 min、10 min)。随后研究期间全面部涂抹修护霜每天2次,共28天。分别在使用前(TO)、使用后48 h(T2)、使用后28d(T3)进行面部乳酸刺痛实验、生理指标检测及皮肤敏感状态主观评分。由皮肤科医生,眼科医生及耳鼻喉科医生分别在使用前和使用后10 min,48 h及28d对皮肤和眼部鼻部黏膜耐受性进行评估。结果:共收集39例受试者。受试者单侧面部涂抹修护霜10min,与未用修护霜侧相比,敏感评估量表各维度评分下降,具有统计学意义(P{<}0.001),受试者的皮肤刺激症状迅速改善。在使用修护霜30 s,1 min、10 min,48 h以及28 d后,各项敏感评估评分均较使用前下降,具有统计学意义(P{<}0.001)。使用修护霜后28天,乳酸刺痛实验评分和经表皮失水率,分别为1.46±1.52和14.91±3.90g/h·m^(2),较使用前(3.50±1.63,17.82±5.34 g/h.m^(2))降低。受试区角质层含水量(62.90±10.83)较使用前(53.91±16.07)水平增加(P{<}0.001),差异均具有统计学意义(P{<}0.01);红斑指数,pH值变化无统计学差异。研究期间未观察到与修护霜使用相关的皮肤、眼部和鼻部的任何刺激性反应及其他不良反应。结论:含有TRPV1受体拮抗剂的修护霜可快速缓解敏感性皮肤的多种不适症状并可以修复皮肤屏障,耐受性良好。

TRPV1在鼻高反应性疾病中的作用机制

鼻高反应性疾病是临床上常见的上气道疾病,以变应性鼻炎(AR)及血管运动性鼻炎(VMR)为代表,其发病机制复杂,目前的治疗策略仅以改善症状为主,尚不能彻底治愈。近年来研究发现,瞬时受体电位(TRP)家族可能是鼻高反应性疾病治疗的重要靶点。尤其随着对TRP香草酸受体1(TRPV1)研究的不断深入,发现由其主导的神经-免疫调控网络对于鼻高反应性疾病的发生发展有着重要作用。多种药物通过靶向TRPV1,对鼻高反应性疾病显示出良好的治疗效果,反映出TRPV1诱人的临床转化前景。然而,目前对于TRPV1在鼻高反应性疾病中的研究尚缺乏系统性,因此,本文就TRPV1在鼻高反应性疾病中的作用进行综述,以期为鼻高反应性疾病的治疗提供理论依据和新的思路。

天竺雾化液通过TRPV1通路和TLR2-MyD88-NF-κB通路治疗慢性咽炎

目的本研究旨在探讨天竺雾化液(TZWHY)在治疗慢性咽炎(Chronic Pharyngitis,CP)中的分子机制。我们采用大鼠体内实验来揭示这一机制。方法本研究通过建立细菌性慢性咽炎模型,使用不同剂量的TZWHY进行雾化处理,评估其抗炎作用。使用LC-MS对药物成分进行质谱分析,采用ELISA测定血清中IL-6、IL-1β和TNF-α的水平,实时PCR检测TLR2 mRNA表达,Western Blot分析MyD88、NF-κB p-p65和TRPV1蛋白表达。结果慢性咽炎实验模型显示TZWHY可有效改善大鼠症状,ELISA结果显示TZWHY治疗可有效降低血清中IL-6、IL-1β和TNF-α的升高,WB及qPCR结果显示TZWHY可降低咽部黏膜组织中NF-κB P65、MyD88、TLR-2和TRPV1的升高。结论本研究通过大鼠实验研究,探讨并确认了TZWHY治疗CP的作用机制。研究结果表明,TZWHY可能通过调节TRPV1通路和TLR2-MyD88-NF-κB通路治疗慢性咽炎。

麻杏石甘汤对咳嗽变异型哮喘大鼠IL-6/STAT3信号通路及TRPV1感受器的影响

【目的】探讨麻杏石甘汤对咳嗽变异型哮喘(CVA)大鼠的治疗作用及机制。【方法】将60只大鼠随机分为正常组,模型组,麻杏石甘汤低、高剂量组,麻杏石甘汤高剂量+信号转导和转录激活因子3(STAT3)激活剂Colivelin(Col)组,每组12只。除正常组外,其他各组大鼠采用腹腔注射卵清蛋白结合艾条熏蒸法构建CVA模型。对应治疗后,观察大鼠体征和咳嗽次数,肺功能仪检测气道阻力(RE),Diff-Quik染色计数嗜酸性粒细胞(EOS),苏木素-伊红(HE)染色法观察肺、支气管组织病理学特征,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测肺组织单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,Western Blot法检测肺组织白细胞介素6(IL-6)、STAT3、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)蛋白表达水平。【结果】与正常组比较,模型组大鼠出现明显哮喘症状,肺组织可见炎性细胞浸润严重,支气管上皮细胞坏死、纤毛粘连、黏液多,RE,EOS数目,MCP-1、TNF-α含量,以及IL-6、STAT3、TRPV1蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,麻杏石甘汤低、高剂量组大鼠哮喘症状明显改善,肺及支气管损伤减轻,RE,EOS数目,MCP-1、TNF-α含量以及IL-6、STAT3、TRPV1蛋白表达水平呈剂量依赖性降低(P<0.05);与麻杏石甘汤高剂量组比较,麻杏石甘汤高剂量+Col组大鼠哮喘加重,肺及支气管损伤加重,RE,EOS数目,MCP-1、TNF-α含量以及IL-6、STAT3、TRPV1蛋白表达水平升高(P<0.05)。【结论】麻杏石甘汤可有效改善CVA大鼠症状,其机制与抑制IL-6/STAT3信号通路及TRPV1高表达有关。

PKC/TRPV1通路在大鼠三叉神经痛中的病理作用

目的探究蛋白激酶C(PKC)/瞬时感受器电位香草酸亚型1(TRPV1)通路在大鼠三叉神经疼痛(TN)中的病理作用。方法采用眶下神经慢性收缩术(ION-CCI)来创建大鼠TN的模型。将大鼠随机分为假手术组(Sham组)、CCI组、CCI+DMSO组、CCI+GF109203X(双吲哚马来酰亚胺,一种PKC抑制剂)组。使用Von Frey毛刷检测大鼠的机械痛阈。采用qRT-PCR及Western blot分别检测三叉神经节(TG)内PKC和TRPV1表达量的变化。HE染色观察TG的病理变化。结果CCI组大鼠机械痛阈降低(P<0.05),大鼠TG内的磷酸化的PKC(p-PKC)和TRPV1表达显著增加(P<0.05)。组织病理学结果显示,与Sham组相比,CCI组观察到TG出现明显的炎性细胞浸润增多、神经细胞肿胀等变化。注射GF109203X后降低了大鼠TG内PKC的磷酸化和TRPV1的表达,大鼠机械痛阈升高(P<0.05),光学显微镜下可见TG内细胞肿胀和炎症细胞有所减少。结论PKC/TRPV1通路可能参与了大鼠的三叉神经痛。

构建过表达TRPV1基因的Caco-2细胞株

采用慢病毒载体系统构建辣椒素受体基因TRPV1过表达的人结直肠腺癌细胞Caco-2稳定重组株.将双酶切后的慢病毒空载体pCDH和TRPV1全基因PCR产物通过T4 DNA Ligase连接,构建包含TRPV1基因的过表达载体pCDH-TRPV1.将过表达载体pCDH-TRPV1转化DH 5α感受态细菌,大量扩繁后提取过表达载体pCDH-TRPV1的质粒,与psPAX2和pMD两种含有慢病毒包装所必需元件的质粒混合,再与脂质体混合制备脂质体-载体混合液.将脂质体-载体混合液转染至单层的293T细胞中,培养48h进行病毒包装.收集富含慢病毒颗粒的293T细胞上清液,超离心纯化成浓缩病毒,然后再与polybrene一起感染单层Caco-2细胞,通过GFP绿荧光信号来筛选获得TRPV1基因过表达的稳定细胞株.通过Realtime PCR方法和Western-blot检测TRPV1的mRNA表达量及蛋白表达量,结果表明,Caco-2-TRPV1重组细胞株的TRPV1的mRNA表达量及蛋白表达量均显著高于Caco-2-GFP对照细胞(P<0.05).成功构建了TRPV1基因过表达的稳定细胞株,为后续辣椒素降脂机理的研究提供了正向调控细胞模型.

基于CiteSpace的TRPV1与疼痛相关研究的可视化分析

目的基于CiteSpace软件对TRPV1与疼痛相关研究文献进行可视化分析,探究TRPV1与疼痛相关研究的热点与趋势,为后续工作提供研究方向。方法以Web of Science为数据来源,对2003年1月至2023年8月发表的TRPV1与疼痛相关研究文献的发文量、作者、机构、国家和关键词进行可视化分析并绘制知识图谱。结果经检索相关文献最终符合纳入标准文献5358篇。关键词分析中capsaicin receptor、TRPV1、capsazepine、model、neuropathic pain、ion channel、TRPV1 antagonist、rat、primary sensory neuron、spinal cor、mechanism显著聚集。发文量最多的作者团队为MAKOTO TOMINAGA,发文量最多的机构为首尔国立大学,不同机构间合作紧密。结论目前TRPV1与疼痛相关研究的发文量呈逐年上升的趋势,以基础实验研究及靶点药物研究为主要研究方向将成为今后研究的趋势。

肤黄止痒汤抑制IL-31/TRPV1/ERK1/2信号轴缓解尿毒症小鼠皮肤瘙痒的研究

目的:阐明肤黄止痒汤对尿毒症皮肤瘙痒的疗效及其作用机制。方法:将40只小鼠随机分为5组(Sham、Model、FHZYT、BCTC、FHZYT+BCTC),每组8只,干预完成后计数小鼠搔抓次数。指标检测包括免疫组化染色检测皮肤中TNF-α、IL-1β、Substance P和IL-31的表达。WB检测皮肤中Substance P、TNF-α、IL-1β、IL-31、TRPV1、ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白表达。结果:1.Model组小鼠肌酐、尿素氮水平升高,瘙痒次数增加(P<0.01)。2.Model组中TNF-α、IL-1β的表达上调,FHZYT、BCTC、FHZYT+BCTC组TNF-α表达则降低(P<0.01)。3.与Model组相比,FHZYT、BCTC、FHZYT+BCTC组瘙痒次数相对减少,皮肤中P物质、IL-31、TRPV1、ERK1/2及p-ERK1/2的表达水平降低(P<0.01)。结论:肤黄止痒汤可有效减少尿毒症小鼠皮肤瘙痒,其机制可能是通过抑制IL-31/TR⁃PV1/ERK1/2信号轴,改善皮肤炎症状态并发挥止痒作用。

基于TRPV1通路调控脊髓背角神经元痛敏化探讨《武威汉代医简》之瘀方治疗类风湿关节炎炎性疼痛

四肢关节疼痛是类风湿关节炎的首要症状,而炎症诱导的脊髓背角神经元痛敏化是导致类风湿关节炎炎性疼痛的重要原因。脊髓背角神经元痛敏化与细胞内外Ca^(2+)浓度密切相关,细胞内Ca^(2+)浓度的增加促进神经递质及受体表达,介导脊髓背角神经元痛敏化。TRPV1通路可通过调节细胞内Ca^(2+)浓度以减轻脊髓背角神经元痛敏化,是缓解类风湿关节炎炎性疼痛的重要靶点。《武威汉代医简》之瘀方具有活血定痛、温经散寒的作用,前期研究显示瘀方可缓解类风湿关节炎患者关节疼痛,现代药理学亦证明瘀方的重要组分能靶向抑制TRPV1通路发挥镇痛效应。基于此,从Ca^(2+)依赖性TRPV1通路调控脊髓背角神经元痛敏化的角度探讨瘀方治疗类风湿关节炎炎性疼痛,深入挖掘具有地域特色的古代医简宝藏,为临床运用瘀方治疗类风湿关节炎提供理论依据。

TRPV1与儿童支气管哮喘的相关性研究进展

由于当今世界经济快速发展,诸如世界人口暴涨、气候环境变化、生活方式的改变等各种因素的影响,哮喘的患病率逐渐增高。支气管哮喘不仅仅在成年人中高发,更是儿童常见的慢性呼吸道疾病之一。近年来,大量的研究表明瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential family vanilloid subtype 1,TRPV1)与儿童哮喘的发生发展密切相关,TRPV1基因单核苷酸多态性与儿童哮喘易感性相互关联,本文通过系统阐述TRPV1与儿童哮喘的相关性研究进展,为儿童哮喘发病机制提供新的研究方向。

靶向TRPV1通道的镇痛剂研究进展

瞬时受体电位香草酸亚型1(Transient Receptor Potential Vanilloid 1,TRPV1)通道广泛分布于感觉神经末梢、中枢神经系统和其他组织,是响应热痛和化学刺激的离子通道蛋白。近年来,TRPV1受体作为治疗各种疼痛相关疾病的潜在方法引起了人们的广泛关注。本文探讨疼痛治疗中的TRPV1激动剂和拮抗剂,根据其结构特征进行分类和阐述,并对配体的结合模式、构效关系、优势和局限性进行讨论,为今后开发更安全有效的TRPV1镇痛剂提供参考。

TRPV1在痛性糖尿病周围神经病变中的研究进展

近年来,糖尿病(diabetes mellitus, DM)患病率在世界范围内大幅上升,并且DM特异性并发症的发生率较高。痛性糖尿病周围神经病变(painful diabetic peripheral neuropathy, PDPN)是DM的一种常见并发症,其发病机制尚不明确。瞬时受体电位香草酸亚型1 (transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)是一种离子通道蛋白,参与热和化学物质等刺激的信号转导。越来越多的研究表明,TRPV1在PDPN的发生中起着重要作用。本文综述了TRPV1通道的生理功能,总结了TRPV1通道在PDPN中的作用,为PDPN的治疗提供了新思路。

脂质在TRPV1活性调节中的作用及机制

瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)通道是表达在细胞膜上主要通透Ca2+的非选择性阳离子通道,可被内源性和外源性因子激活,参与炎症、疼痛和瘙痒等生理病理过程。本文总结了几种脂质对TRPV1通道的调节作用,并从结构生物学研究所揭示的机制上展开讨论,以供参考。

大鼠慢性内脏高敏性、肠道高表达TRPV1的模型构建

建立慢性内脏高敏性(VHL)、肠道高表达TRPV1的大鼠模型,可为肠易激综合征患者靶向治疗药物的研发奠定动物实验基础。本实验采用辣椒素(Capsaicin, CAP)作刺激药物构建模型大鼠,应用腹部回撤反射(AWR)评分、RT-PCR和免疫印迹法(western blot)等技术评价不同浓度CAP大鼠肠道敏感性和TRPV1表达量。结果显示,0.1%~0.5%CAP连续给药后,实验组大鼠的AWR评分高于空白组大鼠。间隔刺激组与连续刺激组大鼠的AWR评分无显著差异,但HE染色结果表明,连续刺激组大鼠的肠黏膜组织损伤较多。RT-PCR和western blot检测发现,实验组大鼠注射0.1%~0.3%CAP的空肠、回肠、结肠均有一定程度的TRPV1表达增强作用。通过对不同浓度CAP和刺激间隔的条件分析,结合肠道组织HE染色和TRPV1表达量结果,最终选定0.3%CAP间隔1 d刺激14 d为构建慢性VHL兼TRPV1高表达的最佳大鼠模型。

铁皮石斛多糖对辣椒素激活BV2细胞内TRPV1的调控作用

优化铁皮石斛多糖的提取工艺,对多糖含量、分子量进行表征,研究其对辣椒素(Capsaicin)特异性激活BV2细胞内TRPV1的调控作用。通过正交试验优化提取料液比、提取温度、提取时间3个关键因素对多糖提取工艺的影响,采用苯酚硫酸法测定多糖含量,高效液相色谱联用多角度激光散射测定多糖分子量,利用Capsaicin特异性激活BV2细胞内TRPV1,建立神经高敏反应模型,采用提取制备的多糖处理BV2细胞24h,通过Elisa试剂盒测定和活细胞免疫荧光特异性标记TRPV1抗体,FITC染色研究TRPV1在BV2细胞内的表达情况。结果表明,铁皮石斛多糖提取最佳工艺为:料液比为40g/mL,提取温度为100℃,提取时间为3h,提取次数为2次,制备多糖的收率为13.09%,中性多糖含量为78.72%,保留时间为11~20min,其分子量范围为380~274500Da,其中大于200kDa分子量的多糖占82.75%。与空白对照组相比,Capsaicin刺激能显著提高BV2细胞中TRPV1的特异性表达(p<0.05),采用0.1mg/mL浓度的铁皮石斛多糖进行保护或修复,可以明显降低BV2细胞内TRPV1的活性(p<0.001),抑制BV2细胞中TRPV1的特异性表达,且前期保护效果显著。铁皮石斛多糖对Capsaicin特异性激活BV2细胞内TRPV1的神经高敏反应有明显的保护及修复作用。

基于随机森林的TRPV1通道与调节剂的分子对接重打分模型构建

本研究旨在利用随机森林算法开发一种针对瞬时受体电位香草酸-1(Transient Receptor Potential Vanilloid-1,TRPV1)通道特异性分子对接的重打分模型TRPV1-Rescore,以寻找潜在的TRPV1调节剂。依托ChEMBL数据库检索与TocoDDB网站生成,获得2909个TRPV1通道调节剂和3000个诱饵化合物分别作为建模的正、负数据集,将其与TRPV1通道进行分子对接,得到对接打分和活性位点关键残基结合能等作为特征参数,应用随机森林算法,构建了TRPV1通道与调节剂分子对接重打分模型TRPV1-Rescore,采用内部五折交叉验证对模型进行了评估。结果表明,外部测试集验证显示该模型的准确率、精确度和召回率分别为0.924、0.916、0.923,证明TRPV1-Rescore模型性能稳健,可用于TRPV1调节剂的虚拟筛选,此模型提升了预测TRPV1通道与其调节剂结合能力的准确性。本研究为新型TRPV1调节剂的设计和发现提供了新方法和新手段。