温度和pH值对南美白对虾(Penaeus vannmei)消化酶活性的影响

采用双因子交互的方法研究了不同温度和pH值对南美白对虾淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性的影响。结果表明 ,南美白对虾肝脏、肠道、胃的淀粉酶最适温度分别为 30℃、35℃、30— 35℃ ,最适pH均为 6 2。肝脏、肠道、胃的蛋白酶最适温度分别为 5 0— 65℃、5 5— 65℃、60℃ ,肝脏蛋白酶最适pH为 8 5— 9 0 ,肠道蛋白酶最适pH为 7 5— 8 5 ,胃蛋白酶最适pH为2 0和 5 5— 6 5。脂肪酶的活力很小 ,肝脏、肠道、胃的脂肪酶最适温度均为 37℃ ,最适pH均为 7 7。同时测得南美白对虾肠道、肝脏、胃组织内的pH分别为 6 7— 7 0、5 9— 6 1、5 1—5 3。在三种消化酶各自最适的温度、pH值下 ,比较其活力大小 ,在肝脏、肠道、胃均为蛋白酶>淀粉酶 >脂肪酶。

宁德市南美白对虾副溶血弧菌的分离与药敏试验

为给宁德市南美白对虾(Penaeus vannmei)养殖病害提供精准用药依据,从7个海水养殖场南美白对虾体内分离病原菌,通过形态学观察、生理生化和16s rRNA鉴定,确定其分类地位,并进行药物敏感试验。结果表明,分离的9株病原菌在TCBS琼脂培养基中菌落均呈蓝-绿色,通过革兰氏染色镜检可见为革兰氏阴性菌,呈棒状、弧状、卵圆状,无芽孢。在氧化酶反应、葡萄糖、赖氨酸、鸟氨酸、甘露醇、6%盐胨水、8%盐胨水、动力等8项试验中,结果呈阳性,确定为副溶血弧菌。9株副溶血弧菌对青霉素、新霉素、四环素等3种药物耐受比例较高,对恩诺沙星、呋喃唑酮、万古霉素等6种药物均高度敏感。

凡纳滨对虾热休克蛋白70的原核高效表达

将凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)热休克蛋白70基因(heat shock protein 70,HSP70)克隆到原核表达载体pET-3c中,经酶切和DNA测序鉴定后,将重组质粒转入表达宿主BL21(DE3),在不同温度、时间下经IPTG诱导表达,收集菌液,进行SDS-PAGE和Western blot检测,并用软件Bandscan分析蛋白表达水平。结果表明,成功构建含凡纳滨对虾HSP70基因的重组表达载体pET-3c/HSP70,表达的目标蛋白相对分子量约为72 kD,并能与小鼠抗人HSP70抗体特异性结合。37℃诱导5 h目标蛋白表达量最高;但25℃诱导目标蛋白的可溶性比例达80%,目标蛋白占全菌总蛋白70%以上,均较37℃为高。

响应面法优化南美白对虾虾仁无磷保水工艺

利用响应面分析法(RSM)研究氯化钠、海藻糖和褐藻酸钠裂解物质量浓度对南美白对虾虾仁保水性的影响。在单因素试验基础上,采用Box-Benhnken中心组合试验,以氯化钠、海藻糖、褐藻酸钠裂解物质量浓度为影响因素,以虾仁解冻损失率、蒸煮后感官评分为响应值建立二次回归方程,通过响应面分析得到优化组合。结果表明:感官品质与解冻损失率之间存在一定的联系,感官分值高,相应的解冻损失率低。无磷保水优化工艺参数:氯化钠质量浓度2.5g/L,海藻糖质量浓度5.0g/L,褐藻酸钠裂解物质量浓度10.0g/L,在此条件下,测得虾仁感官分值为8.2,解冻损失率为2.29%。

海带多酚制备及其对南美白对虾保鲜效果的研究

采用超声波、微波复合浸提的方法预处理海带,制备具有抗菌活性的海带多酚。选取五因素(料液比、乙醇浓度、浸提温度、浸提次数、浸提时间)四水平的正交实验,以海带多酚提取率为评价标准,对海带多酚的提取工艺进行优化,并初步分析了海带多酚对南美白对虾的保鲜效果。结果表明:料液比1∶7(匀浆∶乙醇),乙醇浓度85%,浸提温度70℃,浸提次数2次,浸提时间4h为最佳提取工艺条件,其提取率可达0.4050%。0.2g/L的海带多酚可有效地延缓南美白对虾pH的升高,抑制其细菌总数和TVB-N值的增加,保持较好的感官质量。与对照组相比,应用海带多酚可延长南美白对虾货架期48h,使其保鲜期达到144h以上(-1.2±0.2℃)。

副溶血弧菌对南美白对虾生理生化指标的影响

在自然条件下从患红体病的养殖南美白对虾肝脏内分离出病原菌——副溶血弧菌,将该菌通过肌肉注射的方式,对南美白对虾做感染实验,以探讨副溶血弧菌对南美白对虾生理生化指标的影响。注射弧菌后南美白对虾死亡率与时间、浓度呈正相关,与半致死剂量呈负相关;虾体肌肉、肝脏组织的超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LSZ)酶活性随弧菌浓度的增加呈下降的趋势,而过氧化物酶(POD)酶活性呈上升趋势,这可能是应激反应;酯酶同工酶(EST)酶带表现出缺失,苹果酸脱氢酶同工酶(MDH)具有明显的组织特异性,并且两种酶在肌肉组织中表达最强。副溶菌弧菌感染后破坏了虾体的免疫系统,导致免疫机能的损坏,防病、抗病能力下降,进一步导致虾体患病,甚至死亡。

凡纳滨对虾在冰温贮藏下品质特征的评价

以基本营养成分分析和描述性分析为基础,并结合生化分析及仪器检测,研究凡纳滨对虾Penaeus vannmei品质特征的变化,通过因子与距离相关分析,建立冰温下凡纳滨对虾的食用品质评价体系。结果表明:随着贮藏时间的延长,凡纳滨对虾的基本营养成分、感官、质构、色差以及生化指标均存在显著性差异(P<0.05)。经因子分析及距离相关分析发现,得到的9组因子在置信度95%范围内,营养成分因子Fn、质构因子Ft、色差因子Fc,以及生化因子Fb之间都呈现出较显著的相关性(P<0.05),而描述性分析因子Fd与质构因子Ft、色差因子Fc相关性不显著(P>0.05),因此在一定程度上还不能完全用描述性分析来代替仪器检测和理化分析,三者必须有机结合才能更全面地反映凡纳滨对虾在冰温贮藏过程中的品质变化。

对虾无公害生态育苗

利用稳定性二氧化氯对对虾育苗用水预先消毒处理,再配合使用有益微生物制剂进行凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)封闭式生态育苗。结果表明,稳定性二氧化氯能杀灭水体中的病原体,有益微生物制剂能促进氨氮转化,稳定pH值,确有改善水质之功效,可做到育苗全过程不用抗生素和换水。该方法能提高对虾育苗存活率和生长速度,培育出的虾苗个体大小均匀、丰满度高。用假设检验法进一步证实实验组虾苗平均体长与对照组明显差异(显著性水平a≥0.05),两批幼体体长T检验值分别为-5.0和-5.5,实验组个体差异小于对照组,S2<S1。

凡纳滨对虾熟虾仁的工艺研究及保藏特性分析

研究了凡纳滨对虾(Penaeus vannmei)虾仁在煮制过程中煮制时间及NaCl添加量对其感官品质的影响。通过测定失重率、感官评分等指标,得到凡纳滨对虾虾仁的优化煮制工艺为虾质量规格41/50,沸盐水煮制,NaCl添加量4%,煮制时间2min。测定真空包装后的虾仁在常温(25℃)下保藏过程中的细菌总数。结果显示其保藏期能达到7d。

对虾养殖池塘内混养鲻鱼和罗非鱼对水环境及对虾生长的影响

通过比较对虾—鲻鱼(SM)、对虾—罗非鱼(ST)混养池塘内营养盐含量、颗粒物质、浮游生物以及对虾生长性能等指标变化,研究了鲻鱼(Mugil cephalus)、罗非鱼(Oreochromis niloticus)在对虾养殖池塘内(1000 m2)的生态效益。实验时间为100 d。结果显示,实验期间SM和ST组池塘水体中氨氮(NH_4^+—N)、总氮(TN)、总磷(TP)、活性磷(SRP)、颗粒物质(TPM)等均表现出增加的趋势;在实验中后期,SM组池塘水体中的溶解态氮(NH_4^+—N、NO_3~–—N)低于ST组,然而TN含量却高于ST组,且在实验后期表现出显著差异(P<0.05);同时,SM组池塘水体中的颗粒物质含量高于ST组,表明SM池塘水体中较高的TN含量是源于悬浮颗粒物质。2个混养池塘内浮游生物和叶绿素a含量变化范围分别为5.72—16.83μg·L^(–1)和4.35—15.32μg·L^(–1),无显著差异。实验表明,鲻鱼的扰动可以促进底部有机质向上层水体迁移,有利于降低NH_4^+—N、NO_3~–—N等物质的积累和促进养殖系统内物质循环;对虾存塘率和鱼类取样结果表明,鲻鱼可以与对虾直接混养,罗非鱼通过围网隔离养殖可以取得更好的效果。鲻鱼和罗非鱼对养殖系统不同粒径浮游植物的滤食能力需要进一步研究。

凡纳滨对虾HSP10基因序列与低温表达分析

【目的】克隆分析凡纳滨对虾HSP10基因,为研究其在寒冷耐受过程中发挥调控功能提供参考依据。【方法】搜索EST库获得凡纳滨对虾HSP10基因序列,再通过RACE-PCR扩增获得凡纳滨对虾HSP10基因cDNA全长序列,对其进行生物信息学分析,并通过荧光定量PCR分析HSP10基因的组织表达及低温胁迫下表达量的变化。【结果】凡纳滨对虾HSP10基因cDNA全长720bp,包含306bp的开放阅读框,编码102个氨基酸。以各物种的HSP10蛋白序列构建系统进化树,能较好反映各物种间的进化关系。荧光定量PCR分析结果显示,凡纳滨对虾HSP10 mRNA在各组织中呈遍在表达,其中以肌肉中的表达量最高。低温表达谱分析结果显示,凡纳滨对虾HSP10 mRNA在低温处理凡纳滨对虾的各组织中均呈下调表达,当处理温度降至13℃,其在肝胰腺中表达量降至最低。【结论】凡纳滨对虾HSP10在结构和进化上较保守,其mRNA表达量在低温胁迫下呈下降趋势,可能在寒冷耐受过程中发挥负调控作用。

凡纳滨对虾肌肉组织cDNA全长文库的构建

【目的】为了在短期内获得大量凡纳滨对虾肌肉组织的功能基因表达信息,为深入了解功能基因在凡纳滨对虾肌肉组织中的表达提供分子生物学依据。【方法】通过构建凡纳滨对虾肌肉组织的全长cDNA文库,并进行EST测序分析。【结果】文库质量分析表明,初始文库库容约8.50×106CFU,重组率在95%左右,插入片断大小为0.5～4.0kb,多数在1.0kb以上。随机测序72条cDNA,可得到有功能注释的37条全长cDNA和18条编码未知蛋白的基因序列。通过Gene Ontology功能分类可将有功能注释的37个基因分为蛋白质合成、细胞骨架、细胞信号传导、代谢、转运、能量、转录、抗病及防御、生殖发育和未知功能基因等10类,其中蛋白质合成类基因最多(27.03%),与细胞骨架(13.51%)、细胞信号传导(13.51%)及代谢类基因(13.51%)共占67.56%。【结论】构建凡纳滨对虾肌肉组织的全长cDNA文库,可实现短期内获得大量凡纳滨对虾肌肉组织的功能基因表达信息。

虾肉香肠工艺配方的优化

以南美白对虾和鸡肉为原料,研究了虾肉香肠的制作工艺配方。通过试验确定了影响虾肉香肠感官和质构的关键因素,完善了虾肉香肠的制作工艺。应用感官评分法对虾肉香肠的切片、气味、滋味、组织状态进行评分,并采用质构剖面分析方法对虾肉香肠的硬度、弹性、胶粘性和咀嚼度进行测定。结果表明:添加6%淀粉,0.6%卡拉胶和3%大豆蛋白时,虾肉香肠的感官得分最高,与质构分析得出的最优组合相一致。由极差分析得出,淀粉添加量对虾肉香肠的硬度、弹性、胶粘性和咀嚼度影响最大;卡拉胶添加量对虾肉香肠的硬度、弹性和咀嚼度影响较大;而大豆蛋白添加量对虾肉香肠的弹性和黏聚性影响较大。

凡纳滨对虾幼虾的缬氨酸需要量

通过8周的饲养试验评估饲料中缬氨酸含量对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)幼虾生长性能、常规营养组成、氨基酸代谢酶活性的影响,以确定凡纳滨对虾幼虾的缬氨酸需要量。以鱼粉、豆粕作为主要蛋白质源配制6种等氮等能(粗蛋白质含量约为40.0%,粗脂肪含量约为7.5%)的试验饲料,其实测缬氨酸含量(干物质基础)分别为1.56%、1.64%、1.72%、1.82%、1.90%、1.96%。选择体重在0.3 g左右的凡纳滨对虾幼虾540尾,随机分为6组,每组(饲料)3个重复,每个重复30尾。结果表明:增重率、特定生长率、蛋白质沉积率和饲料效率均随着饲料中缬氨酸含量的增加先升高后降低,并均在缬氨酸含量为1.82%时达到最大。全虾中粗蛋白质含量在缬氨酸含量为1.72%时达到最高,进一步提高饲料中缬氨酸含量则有不同程度降低;肌肉中粗蛋白质含量在缬氨酸含量为1.96%时达到最高,显著高于缬氨酸含量为1.56%和1.72%时(P<0.05);饲料中缬氨酸含量对全虾和肌肉中水分、粗脂肪和粗灰分含量的影响均不显著(P>0.05)。血清和肝胰脏中最高丙氨酸转氨酶活力均出现在缬氨酸含量最高组(缬氨酸含量为1.96%的组),而肌肉中最高丙氨酸转氨酶活力出现在缬氨酸含量为1.90%的组,且肝胰腺中碱性磷酸酶的活力也在缬氨酸含量为1.90%时达到最高;饲料中缬氨酸含量对肝胰腺中天冬氨酸转氨酶活力未产生显著影响(P>0.05)。以增重率为判定指标,通过折线模型得到凡纳滨对虾幼虾的缬氨酸需要量为占饲料干物质的1.79%(占饲料蛋白质的4.48%),考虑到晶体氨基酸在海水中的溶失,以缬氨酸在海水中浸泡30 min内的溶失率为16.81%计,核定凡纳滨对虾幼虾的缬氨酸需要量为占饲料干物质的1.53%(占饲料蛋白质的3.83%)。

日本沼虾和南美白对虾免疫因子的比较研究

对日本沼虾和南美白对虾的5种免疫因子进行了分析比较．分别测定了肌肉组织中的溶菌酶和超氧化物歧化酶(SOD)；血清中的过氧化物酶(POD)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(ALP)活性．结果表明，日本沼虾的SOD和POD活性高于南美白对虾，而南美白对虾的溶菌酶、ACP和ALP活性高于日本沼虾，两种虾中酸性磷酸酶活性均高于碱性磷酸酶活性．

凡纳滨对虾MT基因序列及其在卵巢发育和低温胁迫中的表达分析

在低温处理仔虾全长cDNA文库的筛选测序中,获得凡纳滨对虾(Litopenaeus vannmei)金属硫蛋白基因全长cDNA序列,该序列含有425个碱基,包含177 bp开放阅读框,上游98 bp的非编码区及下游150 bp的非编码区,编码58个氨基酸,其中半胱氨酸含量丰富,富含金属硫蛋白典型的Cys-X(1-3)-Cys结构。多序列比对表明,凡纳滨对虾MT蛋白序列与美洲螯龙虾(Homarus americanus)MT蛋白序列具最高同源性72.4%。Real-time PCR结果表明,凡纳滨对虾MT基因在卵巢组织中呈优势表达,在不同发育期的卵巢中的表达量都很高,在低温处理凡纳滨对虾肝胰腺组织中上调表达。实验所得结果为研究凡纳滨对虾金属硫蛋白基因在生殖发育和低温应激中的功能提供了参考。

熟制凡纳滨对虾优势腐败细茵的分离鉴定及抑茵剂的筛选

筛选出适用于熟制凡纳滨对虾的生物抑菌剂,以期延长熟制凡纳滨对虾的货架期。对熟制凡纳滨对虾中优势腐败细菌进行分离鉴定,采用牛津杯法研究不同浓度壳聚糖、乳酸链球菌素(Nisin)和溶菌酶对分离到的优势腐败细菌的抑菌效果。结果表明,从熟制凡纳滨对虾中分离到的2株优势腐败细菌,一株属于芽孢杆菌属,一株是白色海球菌;壳聚糖对2株优势腐败细菌均有抑菌作用,抑菌效果随着壳聚糖浓度的增大而增强,2株优势腐败细菌对浓度为15.0mg/100mL的壳聚糖高度敏感。Nisin和溶菌酶对2株优势腐败细菌无抑菌作用。

超声辅助提取-高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法测定南美白对虾中砷形态

应用超声辅助提取-高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICP/MS)测定南美白对虾中的砷形态。以磷酸-水(1∶19,V/V)混合液作为萃取剂,超声辅助提取样品中的砷化合物,采用Hamiton PRP-X100柱分离砷化合物,以20 mmol/L磷酸氢二铵溶液(pH=9.0)为流动相。在优化的检测条件下,9 min内完成4种砷化合物的定量分析,亚砷酸、砷酸、MMA(V)和砷甜菜碱检出限分别可达到0.3、0.7、0.6、0.8μg/L,在2.5-100μg/L范围内均具有良好的线性关系,相关系数均在0.995以上,平均加标回收率为82.5%～98.0%,4种砷形态的批内和批间相对标准偏差分别在2.9%-4.9%和3.1%-4.8%的范围内。该方法具有简单、快速、灵敏度高和定性准确等优点,满足砷形态定量分析的要求。

凡纳滨对虾3个sHSP成员的序列与表达特征分析

通过搜索凡纳滨对虾EST数据库,获得3个包含完整开放阅读框的sHSP cDNA序列。对3个sHSP cDNA和相应蛋白序列进行多序列比对发现,3个sHSP的cDNA序列同源性非常高,均达到95%以上,但在开放阅读框第376 bp之后,3个基因间有多个插入和缺失突变,使编码的蛋白序列在C端有较大差异,sHSP-1与sHSP-2、sHSP-3蛋白的同源性只有86.5%和78.7%。不同物种多个sHSP蛋白序列构建的系统进化树显示,3个sHSP与其他物种的HSP20.6、HSP21.4和HSP Beta亲缘关系都很近,推测不同物种sHSP起源相似,且同一物种的不同sHSP通过基因复制产生。运用荧光定量PCR分析了sHSP-1和sHSP-2基因在凡纳滨对虾不同组织及低温胁迫处理下的表达,结果显示,sHSP-1和sHSP-2均在肌肉组织中优势表达,并在低温诱导对虾肌肉组织中呈上调表达,暗示sHSP基因可能在对虾应对低温时发挥功能。

不同盐度养殖条件对凡纳滨对虾品质特性的影响

以分别养殖90 d和120 d的淡水(盐度0.05%)、低盐度海水(盐度0.69%)和半海水(盐度1.85%)凡纳滨对虾为原料,对凡纳滨对虾的物理指标、生化指标和菌落总数进行测定。结果表明:养殖90 d时,低盐度海水虾的粗蛋白含量显著高于淡水虾和半海水虾(p<0.05),淡水虾水分显著高于半海水虾和低盐度海水虾(p<0.05)。养殖120 d时,淡水虾的粗蛋白含量显著高于半海水虾(p<0.05),淡水虾与低盐度海水虾水分显著高于半海水虾(p<0.05)。养殖120d的不同养殖盐度对虾的体长、体重、壳重和壳厚度均大于养殖90 d的对虾。不同养殖盐度下养殖90 d和120 d对虾的粗脂肪含量无显著差异(p>0.05)。氨基酸、氨基酸总量、必需氨基酸和鲜味氨基酸含量差异不大,其中谷氨酸含量均为最高。