实时荧光定量PCR扩增特异性vapA基因检测杀鲑气单胞菌

为实现杀鲑气单胞菌早期快速准确定量检测,研究旨在建立杀鲑气单胞菌的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测方法。根据GenBank中杀鲑气单胞菌毒力阵列蛋白基因(vapA)保守序列设计并合成一对特异性引物,对其特异性、灵敏度、可重复性和应用性进行评价。结果显示,研究设计的引物具有良好的种间特异性,仅对杀鲑气单胞菌及其亚种有阳性扩增,与其他细菌不发生交叉反应。构建的Real-time PCR标准曲线质粒拷贝数与循环阈值呈良好的线性关系,扩增所得标准曲线分别为y=–4.8345x+42.535,相关系数R^2为0.998,最低检测限为34拷贝/μL,较常规PCR的灵敏度高出约1000倍。应用建立的方法检测人工感染的虹鳟病样,15个被检样品呈阳性反应,与细菌常规鉴定方法结果一致。研究表明,所建立的基于实时荧光定量PCR技术的杀鲑气单胞菌检测方法快速、特异、灵敏,可用于临床诊断和疫病监测。

海氏迪茨菌株中VapA/VapB基因质粒子的表达及临床药敏试验结果分析

目的探讨海氏迪茨菌株中VapA/VapB基因质粒子的表达及临床药物敏感性。方法利用16SrRNA技术,采用马红球菌株ATCC133701p+为应变标准,评价海氏迪茨菌株分子性状,纸片扩散法进行药敏试验。结果海氏迪茨菌株与马红球菌株的相似度为80%,对万古霉素、利福平、环丙沙星、氧氟沙星、氯霉素、头孢三嗪的耐药率为0,对复方磺胺甲嗯唑、青霉素G的耐药率为100%,红霉素耐药率为7.3%,头孢他定耐药率为11.5%,阿米卡星耐药率为23.7%,头孢噻吩耐药率为32.7%,头孢唑啉、苯唑西林、氨苄西林耐药率为65.5%～91.8%。结论海氏迪茨菌株与马红球菌株的相似性为80%,是马、猪、牛等动物的致病菌,也是人类罕见的致病菌,能够引起呼吸道、尿道感染和败血症等。在临床应用抗生素时,应根据药敏试验结果选用,可延缓该菌耐药性的产生。