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恶性疟原虫海南株var2csa基因DBL区蛋白的原核表达及功能分析 被引量:1
1
作者 康巍 常志广 +3 位作者 陆慧君 姜宁 尹继刚 陈启军 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期37-41,共5页
目的克隆、表达恶性疟原虫海南株变异抗原基因(var)家族之一var2csa基因的血型抗原结合基团(duffy anti-gen-binding ligand,DBL)4、DBL5、DBL6区,比较其与硫酸软骨素A(chondroitin sulfate A,CSA)黏附能力的差异。方法 PCR扩增恶性疟... 目的克隆、表达恶性疟原虫海南株变异抗原基因(var)家族之一var2csa基因的血型抗原结合基团(duffy anti-gen-binding ligand,DBL)4、DBL5、DBL6区,比较其与硫酸软骨素A(chondroitin sulfate A,CSA)黏附能力的差异。方法 PCR扩增恶性疟原虫海南株基因组DNA中3个目的片段,将扩增产物与pMD18-T克隆载体连接,经酶切、测序鉴定正确后克隆至表达载体pET-22b上,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,并用组氨酸标签融合蛋白纯化柱(His GraciTrap)纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹(Western blotting)检测目的蛋白。ELISA检测不同DBL区重组蛋白与CSA的结合情况。结果 PCR扩增获得目的片段分别为996、859和894bp,酶切及DNA测序结果均显示重组质粒构建成功,在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功表达并纯化3个DBL区重组蛋白,DBL4区、DBL5区和DBL6区的相对分子质量分别为Mr 439800,Mr 34500,Mr 36000。West-ern blotting检测结果显示,目的蛋白具有反应原性。ELISA结果显示,不同蛋白浓度条件下DBL5区均明显比其他两个DBL区的吸光度(A405值)高(P<0.05),表明DBL5区与CSA的黏附能力较强。结论 var2csa基因3个DBL区重组蛋白表达成功,DBL5区与CSA的黏附能力较强。 展开更多
关键词 妊娠相关疟疾 恶性疟原虫 var2csa基因 DBL 硫酸软骨素A
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恶性疟原虫海南株var2csa基因的克隆、表达及免疫识别研究
2
作者 康巍 彭帅 +3 位作者 陆慧君 尹继刚 陈启军 姜宁 《热带医学杂志》 CAS 2011年第11期1243-1247,共5页
目的克隆、表达恶性疟原虫海南株HN(2)var2csa基因DBL4、DBL5、DBL6区,通过ELISA方法比较其与硫酸软骨素A(CSA)的亲和能力差异,以及人体对恶性疟原虫海南株HN(1)、(2)VAR2CSA不同DBL区的免疫应答差异。方法根据DBL区序列设计3对引物,PC... 目的克隆、表达恶性疟原虫海南株HN(2)var2csa基因DBL4、DBL5、DBL6区,通过ELISA方法比较其与硫酸软骨素A(CSA)的亲和能力差异,以及人体对恶性疟原虫海南株HN(1)、(2)VAR2CSA不同DBL区的免疫应答差异。方法根据DBL区序列设计3对引物,PCR扩增目的片段,并与pMD18-T克隆载体连接。经PCR、酶切、测序鉴定正确后克隆至表达载体pET-22b,通过转化、诱导、纯化表达重组蛋白质,SDS-PAGE和Western blot检测。通过ELISA方法进行重组蛋白质与CSA的粘附实验以及与患者血清的免疫识别实验。结果酶切及DNA测序结果均表明表达载体构建成功,表达并纯化3个DBL区重组蛋白质,分子量与预计大小相同,Western blott检测目的蛋白质具有免疫反应性,ELISA显示不同蛋白浓度条件下DBL5区均明显比其它两个DBL区有更高的OD405值,并且DBL5区被妊娠相关疟疾病人血清识别水平显著高。结论 var2csa基因3个DBL区重组蛋白质表达成功,DBL5区与CSA的粘附能力较强,人体对DBL5区的免疫应答反应可能在抗病免疫过程中起到关键作用。 展开更多
关键词 妊娠相关疟疾 恶性疟原虫 var2csa基因 DBL 硫酸软骨素A
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妊娠相关性疟疾及其研究进展 被引量:2
3
作者 李萌 尹继刚 陈启军 《热带医学杂志》 CAS 2008年第12期1287-1293,共7页
恶性疟疾是对人类健康危害最为严重的传染病之一。生活在疟疾流行区的人随着年龄的增长和感染次数的增加会逐渐获得保护性免疫即临床免疫。然而,孕妇尤其是初孕妇女在妊娠过程中感染恶性疟原虫后往往呈现急性感染症状,甚至危及孕妇和胎... 恶性疟疾是对人类健康危害最为严重的传染病之一。生活在疟疾流行区的人随着年龄的增长和感染次数的增加会逐渐获得保护性免疫即临床免疫。然而,孕妇尤其是初孕妇女在妊娠过程中感染恶性疟原虫后往往呈现急性感染症状,甚至危及孕妇和胎儿的生命。妊娠相关性疟疾(pregnancy-associated malaria,PAM)主要是由于受恶性疟原虫感染的红细胞和单核细胞在胎盘绒毛间大量聚集引起的。大量的研究表明,黏附在子宫粘膜上的虫体表达一种具有特殊生物活性和抗原性的蛋白质(var2CSA)。Var2CSA可特异性地与子宫粘膜上的硫酸软骨素A(Chondroitin sulfateA,CSA)结合。此外,由于var2CSA的序列相对保守,机体在感染几次以后较容易产生交叉免疫保护反应。对PAM的研究是疟疾领域内的重要内容,目前在很多领域(病原学、分子致病机理、免疫学等)已经取得重要进展。本篇综述概括了近年来在PAM研究方面的进展,包括虫体表达的主要膜蛋白质的功能、相关的人体受体以及免疫学方面等内容。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 妊娠相关性疟疾 var2csa
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合成肽VAR2特异性结合循环肿瘤细胞的检测及临床应用
4
作者 余宏 丁利杰 +2 位作者 刘厚聪 王纪东 杜冀晖 《基础医学与临床》 2023年第11期1662-1667,共6页
目的探讨疟疾蛋白(VAR2)合成肽特异性结合循环肿瘤细胞(CTCs)的检测及临床应用。方法选择疟疾蛋白VAR2CSA功能结构域肽段序列合成VAR2多肽;基于纳米微流控技术富集CTCs,利用VAR2合成肽对富集细胞进行检测,建立一种新型CTCs检测方案。用... 目的探讨疟疾蛋白(VAR2)合成肽特异性结合循环肿瘤细胞(CTCs)的检测及临床应用。方法选择疟疾蛋白VAR2CSA功能结构域肽段序列合成VAR2多肽;基于纳米微流控技术富集CTCs,利用VAR2合成肽对富集细胞进行检测,建立一种新型CTCs检测方案。用细胞免疫荧光染色、流式细胞测量术及肿瘤细胞掺入回收实验,分析VAR2合成肽与不同组织来源肿瘤细胞特异性结合、回收效率,并与免疫荧光原位杂交(imFISH)检测法进行比较。选取22例结直肠癌患者与22名健康者,利用VAR2合成肽检测两者外周血CTCs。比较不同TNM分期患者CTCs阳性检出率。结果合成肽VAR2可以与人结肠癌细胞系SW620、人乳腺癌细胞系MCF7和人食管鳞癌细胞系KYSE180不同组织来源的肿瘤细胞特异性结合,合成肽VAR2检测100个SW620、MCF7、KYSE180肿瘤细胞掺入3 mL外周血中的回收率分别为82.8%±8.41%、56.2%±3.57%、86.6%±8.19%,与imFISH法检测法比较,差异无统计学意义。合成肽VAR2检测50、100、200个3种不同肿瘤细胞的回收率与掺入肿瘤细胞的数量没有明显相关性。合成肽VAR2检测临床结直肠癌患者外周血样本CTCs阳性率为63.6%,高于健康受试者组CTCs阳性率的0.0%,同时与侵袭深度、淋巴结转移、远处转移及临床分期相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论合成肽VAR2可实现对不同组织来源、非抗体依赖性的特异性CTCs检测,对于肿瘤患者临床分期、病情评估具有一定的临床应用价值。 展开更多
关键词 循环肿瘤细胞 疟疾蛋白var2csa(VAR2) 非抗体依赖性 结直肠癌 临床分期
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疟原虫重组蛋白rVAR2及其在肿瘤靶向治疗中的应用进展
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作者 蒋金露 潘海峰 +2 位作者 于思远 李廷栋 葛胜祥 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期69-75,共7页
恶性肿瘤是造成人类死亡的主要原因之一,其发病率和死亡率逐年上升。靶向药物可精确作用于肿瘤,在近年来备受关注。特异性识别和广泛结合肿瘤细胞是实现肿瘤靶向治疗的关键,而目前缺乏高效特异的泛肿瘤靶向工具,这极大地限制了肿瘤靶向... 恶性肿瘤是造成人类死亡的主要原因之一,其发病率和死亡率逐年上升。靶向药物可精确作用于肿瘤,在近年来备受关注。特异性识别和广泛结合肿瘤细胞是实现肿瘤靶向治疗的关键,而目前缺乏高效特异的泛肿瘤靶向工具,这极大地限制了肿瘤靶向治疗的进一步发展。与现有的肿瘤靶向方式相比,疟原虫重组蛋白rVAR2能够特异性结合肿瘤细胞表面广泛表达的癌胚硫酸软骨素(oncofetal chondroitin sulfate,ofCS),具备泛肿瘤靶向的优点,为肿瘤靶向治疗提供了新思路。对rVAR2的特点及其近年来在肿瘤靶向治疗中的应用进展进行分析和总结,并对其未来发展方向进行了展望,以期为临床肿瘤靶向治疗及诊断方法的发展提供参考。 展开更多
关键词 var2csa rVAR2 硫酸软骨素癌胚硫酸软骨素肿瘤靶向
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