天津地区猪伪狂犬病毒变异株的分离鉴定及主要相关毒力基因分析

为了鉴定猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株及其携带毒力基因的变异情况,本研究采集1份天津地区某猪场免疫过Bartha-K61疫苗但患严重神经症状的仔猪脑组织样品,采用荧光定量PCR(q PCR)检测PRV g E基因,并将检测为PRV的阳性样品接种PK-15细胞分离培养,并传3代后采用Reed-Muench法测定分离病毒的TCID_(50),采用q PCR和间接免疫荧光试验(IFA)进一步鉴定分离病毒。结果显示,经q PCR检测仔猪脑组织样品出现扩增曲线,阳性样品分离培养后测得病毒滴度为10^(7.57)TCID_(50)/m L,分离病毒的q PCR结果出现扩增曲线,且其感染的细胞出现绿色荧光。表明分离到一株PRV,命名为TJbd2023株。采用PCR分别扩增TJbd2023株主要相关毒力基因g B、g C、g D、g E、g G、g I和TK,采用Meg Align软件分析分离病毒与Gen Bank登录的PRV参考株上述各毒力相关基因序列的同源性,通过Neighbor-Joining(NJ)法构建上述各毒力相关基因的进化树,采用Meg Align软件分析各毒力基因编码氨基酸主要位点的变异情况。结果显示,分别扩增到TJbd2023株的各相应毒力基因;各毒力基因的同源性分析结果显示,TJbd2023株与国内2012年后流行变异株的相似性高达98.4%~100.0%,与疫苗株(Bartha-K61)的相似性为89.6%~93.2%。进化树结果显示,这7个毒力基因均与国内GD0304株(MH582511)、BJYT株(KC981239)和DL1408株(KU360259)等PRV变异株位于同一分支,与疫苗株(Bartha-K61)未在同一分支。g B、g C、g E氨基酸序列除出现PRV变异株相同的突变位点外,g B还出现R^(223)H和E^(836)K的突变、g D出现R^(320)S和g E出现T^(242)A的突变。将TJbd2023株分别以5个剂量(10^(2.57)TCID_(50)/m L~10^(6.57)TCID_(50)/m L)感染6周龄KM小鼠,通过小鼠的临床症状、死亡率、死亡小鼠各组织的病理变化评估该病毒的致病性。结果显示,在5 d的观察期内,感染组小鼠陆续出现奇痒及神经症状,各实验组小鼠的死亡率分别为60%、80%、100%及100%,对照组小鼠均健活。死亡小鼠各组织病变观察可见肺组织浸润性出血、肝组织血管充血及淋巴细胞增多、脑胶质细胞增多及血管周围炎性细胞聚集形成血管套等病变,对照组小鼠各组织均无明显病变。上述结果表明,本研究在天津地区分离到一株PRV变异株,其毒力因子发生了独特的氨基酸位点突变,对小鼠的致病性较强,该结果丰富了PRV的致病性及其毒力因子变异的特征,为PR的综合防控提供参考。

1株伪狂犬病病毒的基因变异及其对小鼠的致病性分析

本研究旨在了解我国猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)流行毒株的分子遗传变异及毒力特点。对1株分离自1个接种了Bartha-K61疫苗的规模猪场的PRV ZJ株进行了主要糖蛋白基因序列(gB、gC和gE)的测定分析及对6周龄BALB/c小鼠的致病性研究。遗传变异分析显示,该毒株与我国2012年后的流行毒株高度同源,具有变异毒株基因特征,但gE基因的510位氨基酸出现了不同于变异株的独特变化S^(510) G。ZJ株对小鼠具有较高的致病性,攻毒小鼠呈现典型的神经症状,以100 LD_(50)感染小鼠,第5天死亡率达100%。本研究为进一步探索该病毒的毒株变异特点与致病机理奠定基础。

当前我国鸡群传染性法氏囊病感染情况调查

传染性法氏囊病是严重危害家禽业的疾病之一,由传染性法氏囊病病毒引起,目前呈全世界分布,其田间毒株流行情况也在不断变化。为了解目前国内传染性法氏囊病的最新流行情况,近期采集了一定数量不同类型鸡群的法氏囊组织用于PCR病原学监测,采样鸡群日龄主要集中于传染性法氏囊病高发的3~5周龄。监测结果表明不同类型鸡群都存在一定比例的传染性法氏囊病毒感染情况,包括经典毒株、超强毒株及变异株,且以新型变异株传染性法氏囊病毒感染为主,其与美国变异株在进化树上同属变异株,但与美国变异株不同,氨基酸序列一致性为96.81%~98.24%;序列分析识别了6处变异株特异性氨基酸位点,8处新型变异株特有位点,为后续传染性法氏囊病毒的防治提供了依据。

伪狂犬病病毒变异株和经典株对小鼠致病力差异的研究

为评价伪狂犬病病毒(PRV)变异株和经典株对小鼠的致病力差异,本研究将PRV变异株(PRVTJ)和经典株(PRVSC)以103 TCID50的剂量经肌肉注射途径接种小鼠之后,通过观察小鼠的临床症状、记录小鼠的体质量变化和死亡率,利用荧光定量PCR(qPCR)检测小鼠各组织中病毒基因拷贝数,分析小鼠各组织脏器的病理学变化,系统评价PRV变异株和经典株的致病力差异。研究结果显示,接种PRVTJ和PRVSC的小鼠在临床表现上无明显差异,但接种PRVTJ的小鼠体质量下降明显,死亡率相对更高;qPCR检测结果显示,PRVTJ对小鼠的组织嗜性增强,尤其是对脑组织的嗜性增强;病理组织学分析结果显示,接种PRVTJ的小鼠脑组织的炎性病变更明显。本研究初步证实,PRVTJ对小鼠的致病力增强,且其毒力增强的主要原因是对小鼠的神经嗜性增强。本研究为PRV变异株致病力增强机制研究奠定了基础。