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基于3A组装的多拷贝基因策略优化重组水蛭素变体Ⅲ的生产
1
作者
王亚丽
刘秀霞
+1 位作者
杨艳坤
白仲虎
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第16期1-8,共8页
水蛭素变体Ⅲ(Hirudin varidantⅢ,Hv3)是一种从水蛭中提取的活性成分,在预防和治疗白内障方面具有潜在作用。为了制备足量Hv3用于进一步的临床前应用研究,该研究开发了一种在谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)中高效、稳定表...
水蛭素变体Ⅲ(Hirudin varidantⅢ,Hv3)是一种从水蛭中提取的活性成分,在预防和治疗白内障方面具有潜在作用。为了制备足量Hv3用于进一步的临床前应用研究,该研究开发了一种在谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)中高效、稳定表达重组水蛭素变体Ⅲ(recombinant Hirudin varidantⅢ,Rhv3)的办法。首先,在C.glutamicum中构建含Ptac启动子和CspA信号肽的Rhv3分泌表达菌株,比较其在不同培养基中的表达情况。结果表明在BHI培养基中Rhv3活性最高,达到3.02×10^(3) ATU/L。为进一步提升Rhv3产量,通过核糖体结合位点(ribosome binding site,RBS)筛选,选用RBS1应用于Rhv3多拷贝菌株构建和表达。然后利用3A组装技术构建含不同信号肽和不同拷贝数的Rhv3分泌表达菌株进一步优化其产量。通过放大发酵培养,Rhv3产量达到1.89 g/L,活性达到10.91×10^(3) ATU/L。最后利用镍柱对Rhv3进行简单纯化,其纯度达到90%。该异源表达策略有效提高Rhv3表达量,为Rhv3的重组生产提供了一种质量可靠、低成本的表达体系。
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关键词
重组水蛭素变体
ⅲ
(recombinant
Hirudin
varidantⅲ
Rhv3)
核糖体结合位点(ribosome
binding
site
RBS)
多拷贝
信号肽
谷氨酸棒杆菌
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职称材料
题名
基于3A组装的多拷贝基因策略优化重组水蛭素变体Ⅲ的生产
1
作者
王亚丽
刘秀霞
杨艳坤
白仲虎
机构
江南大学
江南大学
江南大学生物工程学院
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第16期1-8,共8页
基金
国家自然科学基金(21878124,22078128,21938004)。
文摘
水蛭素变体Ⅲ(Hirudin varidantⅢ,Hv3)是一种从水蛭中提取的活性成分,在预防和治疗白内障方面具有潜在作用。为了制备足量Hv3用于进一步的临床前应用研究,该研究开发了一种在谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)中高效、稳定表达重组水蛭素变体Ⅲ(recombinant Hirudin varidantⅢ,Rhv3)的办法。首先,在C.glutamicum中构建含Ptac启动子和CspA信号肽的Rhv3分泌表达菌株,比较其在不同培养基中的表达情况。结果表明在BHI培养基中Rhv3活性最高,达到3.02×10^(3) ATU/L。为进一步提升Rhv3产量,通过核糖体结合位点(ribosome binding site,RBS)筛选,选用RBS1应用于Rhv3多拷贝菌株构建和表达。然后利用3A组装技术构建含不同信号肽和不同拷贝数的Rhv3分泌表达菌株进一步优化其产量。通过放大发酵培养,Rhv3产量达到1.89 g/L,活性达到10.91×10^(3) ATU/L。最后利用镍柱对Rhv3进行简单纯化,其纯度达到90%。该异源表达策略有效提高Rhv3表达量,为Rhv3的重组生产提供了一种质量可靠、低成本的表达体系。
关键词
重组水蛭素变体
ⅲ
(recombinant
Hirudin
varidantⅲ
Rhv3)
核糖体结合位点(ribosome
binding
site
RBS)
多拷贝
信号肽
谷氨酸棒杆菌
Keywords
Rhv3
RBS
multi-copy
signal peptide
Corynebacterium glutamicum
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
TQ920.1 [轻工技术与工程—发酵工程]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于3A组装的多拷贝基因策略优化重组水蛭素变体Ⅲ的生产
王亚丽
刘秀霞
杨艳坤
白仲虎
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2023
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