纤维蛋白凝胶携载血管内皮生长因子修复大鼠坐骨神经损伤的组织学观察

目的探讨局部应用纤维蛋白凝胶携载血管内皮生长因子,对损伤坐骨神经再生的影响,为临床药物治疗坐骨神经损伤提供实验依据。方法将36只Wistar大鼠左侧坐骨神经切断,神经两断端原位缝合,制作大鼠坐骨神经损伤动物模型。然后将大鼠随机分成实验组(纤维蛋白凝胶携载血管内皮生长因子给药组)与对照组(血管内皮生长因子基因转染给药组),每组18只,于用药后8、12周行肉眼观察、光镜观察,图像分析仪行神经断面分析,测轴突直径、髓鞘厚度和有髓神经纤维数目。结果实验组8周的轴突直径、髓鞘厚度和有髓神经纤维数目和对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),12周时2组差异无统计学意义(P>0.05)。结论纤维蛋白凝胶可以作为血管内皮生长因子的载体。纤维蛋白凝胶携载血管内皮生长因子给药可以促进损伤神经结构和功能的恢复。

带血供肌瓣作为骨形态发生蛋白载体修复骨缺损实验研究

目的 探讨带血供肌瓣作为骨形态发生蛋白（BMP）载体修复骨缺损的可行性。方法 观察带血供肌瓣复合BMP和单纯BMP组修复骨缺损时的成骨情况,对四种不同载体的成骨能力进行比较。结果 以指深屈肌支为蒂制备的带血供肌瓣复合BMP修复骨缺损,效果优于单纯BMP组。带血供肌瓣联合纤维蛋白粘合剂复合BMP组修复骨缺损,效果优于其它载体。结论 带血供肌瓣可作为BMP的良好载体,带血供肌瓣联合纤维蛋白粘合剂作BMP的载体效果更优。

有机阴离子转运蛋白1在人血管平滑肌细胞表达的意义

目的检测有机阴离子转运蛋白1(OAT1) mRNA和蛋白质在人血管平滑肌细胞的表达以及尿酸刺激对其表达的影响。方法分离培养人脐动脉血管平滑肌细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR方法扩增特异性OAT1cDNA片断,制备探针,用Northern blot方法检测OAT1 mRNA的表达,提取细胞膜蛋白和总蛋白,用Western blot方法检测OAT1的蛋白表达;用800μmol/L的尿酸刺激细胞,观察OAT1的表达变化。结果从人血管平滑肌细胞检测到OAT1 mRNA和蛋白的表达。尿酸可以明显增强OAT1的表达。结论人血管平滑肌细胞有明确的OAT1表达,OAT1可能部分介导了血管平滑肌细胞对尿酸的摄取过程。

人胶质细胞源性神经营养因子和血管内皮生长因子165双基因真核表达载体的构建与鉴定（英文）

背景:人胶质细胞源性神经营养因子(glialcell line-derived neurotrophic factor,GDNF)和血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF165)在细胞分化过程中有重要作用。目的:构建双基因共表达载体pIRES2-GDNF-VEGF165并对其进行鉴定。方法:采用PCR法从人外周血单个核细胞的基因组DNA中获取人胶质细胞源性神经营养因子基因,然后将人胶质细胞源性神经营养因子的cDNA片段插入到pIRES2-EGFP多克隆位点构建成为pIRES2-GDNF-EGFP。人血管内皮生长因子165 cDNA片段是通过双PCR的方法从pIRES2-VEGF165-EGFP质粒中获取,接着将血管内皮生长因子165 cDNA片段以替换EGFP的方式插入pIRES2-BDNF-EGFP中,最后构建成为含有内部核糖体进入位点(IRES)的pIRES2-GDNF-VEGF165双基因共表达载体。通过双酶切和DNA测序方法对其鉴定,将重组的双基因共表达载体感染HEK293细胞,利用RT-PCR与Western-blot方法检测双基因的表达。结果与结论:DNA测序显示,提取的人胶质细胞源性神经营养因子和血管内皮生长因子165均与基因库报道序列一致,相对分子质量分别为636 bp和576 bp。构建的pIRES2-GDNF-VEGF165双基因共表达载体经Bgl II/Bam HI切出GDNF条带,经Bam HI/Not I双酶切后切出IRES-VEGF165片段,经Bgl II/Not I双酶切后切出GDNF-IRES-VEGF165片段。RT-PCR与Western-blot方法检测显示,此载体转染后,HEK293细胞均能表达人胶质细胞源性神经营养因子和血管内皮生长因子165 mRNA和蛋白。说明实验成功构建了能表达人胶质细胞源性神经营养因子和血管内皮生长因子165的双基因真核表达载体。

Nano无载体药物支架对PCI后非罪犯病变进展的抑制作用

目的探讨Nano无载体药物支架对经皮冠脉介入治疗(PCI)后非罪犯冠状动脉(冠脉)病变(NCCLs)进展的抑制作用及其可能机制。方法入选2015年1月至2018年6月于东南大学医学院附属江阴医院心血管内科行PCI患者106例,依据植入支架类型分为Nano组(n=65)和Firebird2组(n=41)。检测所有患者术后1周和术后1年高敏C反应蛋白(hs-CRP)及白介素-6(IL-6)水平,随访1年后NCCLs进展情况。结果Nano组患者PCI后1年NCCLs进展比例明显低于Firebird2组患者(P=0.016),并且Nano组患者因为NCCLs进展而行PCI的患者比例也明显低于Firebird2组患者(P=0.036)。两组患者术后1周hs-CRP和IL-6水平比较无统计学差异(P>0.05),术后1年随访发现两组患者hs-CRP和IL-6水平均较术后1周明显降低(P<0.05)。术后1年比较,Nano组患者hs-CRP和IL-6水平均低于Firebird2组患者(P<0.05)。术后1年hs-CRP≥4.0 mg/L(P=0.041,OR=4.148)和IL-6≥25 ng/L(P=0.026,OR=4.219)是NCCLs进展的危险因素,植入Nano支架是NCCLs进展的保护因素(P=0.023,OR=0.233)。结论植入Nano支架较Firebird2支架术后1年炎症反应更低,且对NCCLs进展有抑制作用,可能与其无载体特性有关。

基于好氧丝状生物膜的白腐真菌垃圾渗滤液处理体系构建

如何实现白腐真菌好氧丝状生物膜的连续生长,是白腐真菌废水处理技术面临的难题。针对此问题,作者研发中空的脉管载体,其上固定的Phanerochaete chrysosporium好氧丝状生物膜可从载体的外部和中空内部同时获取氧和基质,实现生物膜的连续生长;继而还构建出新型的白腐真菌反应器控制气泡和废水流向,减少对生物膜的冲击,并在非灭菌条件下以批次运行的方式实现P.chrysosporium好氧丝状生物膜连续401 d的木质素过氧化物酶(33~199 U/L)表达;完成了18批次(401 d)的垃圾渗滤液的连续处理,NH3-N和COD去除率分别达83%~97%和56%~74%。这表明:固定于脉管载体的P.chrysosporium好氧丝状生物膜实现了在垃圾渗滤液中长期的连续生长,并成功构建出能连续运行的白腐真菌垃圾渗滤液处理体系,为白腐真菌废水处理技术的工程应用奠定了基础。

磷酸胆碱聚合物载反义c—myc寡核苷酸对兔髂动脉球囊损伤后血管狭窄的影响

目的探讨局部转运磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70载反义c—myc寡核苷酸（c—mycAS—ODN）基因复合物对兔髂动脉球囊损伤后血管狭窄的影响。方法40只家兔随机分为对照组、多聚赖氨酸（PLL）组、裸c—mycAS—ODN组、PLL载基因复合物N／P=3：1组和N／P=5：1组，每组各8只。构建兔髂动脉球囊损伤模型，于血管损伤段行PLL、c—mycAS—ODN、PLL载N／P=3：1和N／P=5：1基因复合物的局部转运。24h后应用共聚焦显微镜观察基因复合物在髂动脉的分布情况；4周后苏木精-伊红染色光镜下观察髂动脉的组织形态学变化，包括新生内膜面积（NIA）、中膜面积（MA）和新生内膜／中膜面积比（I／M）；Western blot法检测各组损伤血管处c—myc蛋白的表达情况。结果共聚焦显微镜可见转染N／P=3：1、N／P=5：1基因复合物的血管内膜有均匀的绿色荧光分布。苏木精-伊红染色光镜下对照组、PLL组、裸c—mycAS—ODN组均可见显著的内膜增生，组间比较NIA、I／M无显著性差异（P〉0．05）；与对照组比较，N／P=3：1组和N／P=5：1组NIA、I／M均明显减少（P〈0．05），后两组间比较无显著性差异（P〉0．05）。Western blot显示对照组、PLL组、裸c—mycAS—ODN组c—myc蛋白表达均明显增高，组间比较无显著性差异（P〉0．05）；与对照组比较，N／P=3：1组和N／P=5：1组c—myc蛋白表达明显减少（P〈0．05），后两组间比较无显著性差异（P〉0．05）。结论多聚赖氨酸可促进MPC30-DEA70／c—myc AS—ODN复合物进入髂动脉血管，有效抑制球囊损伤后新生内膜的过度增生，为基因治疗血管内狭窄提供了新型的非病毒类转基因手段。

纳米微载体介导的低氧诱导因子-1圈套寡核苷酸对小鼠HepG_2细胞血管内皮生长因子的作用

目的:以低氧诱导因子(HIF)-1为靶点,观察HIF-1转录因子圈套寡核苷酸(HIF-1 decoy ODN))对小鼠HepG2细胞内血管内皮生长因子(VEGF)的作用,在分子水平为肝细胞癌干预靶点提供实验依据。方法:用ELISA法测定小鼠HepG2细胞内VEGF浓度。用逆转录-聚合酶链式反应测定小鼠HepG2细胞内VEGFmRNA。结果:HIF-1 decoy ODN在体外能有效抑制HIF-1活性。DecoyODN治疗后小鼠HepG2细胞内VEGF表达明显下降,而变异的decoyODN无效果。结论:纳米微载体介导的HIF-1 decoy ODN能下调HepG2细胞的VEGF水平。

糖尿病肾病患者血清Cys C、NGAL、ACR水平与血管病变的相关性

目的研究糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)患者血清胱抑素C(cystatin C,Cys C)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatase-associated lipid carrier proteins,NGAL)、尿微量白蛋白/肌酐比值(albumin/creatinine ratio,ACR)水平与血管病变的相关性。方法选择本院2019年5月至2020年10月诊治的110例DN患者作为研究对象,进行回顾性分析,均检测患者Cys C、NGAL、ACR水平。另选择同期本院收治的59例单纯糖尿病患者作为对照组,另根据DN患者是否发生大血管病变设为A组(单纯DN,41例)和B组(DN合并大血管病变,69例),比较三组患者血清Cys C、NGAL、ACR水平,并分析上述血清指标与血管病变的相关性。结果B组患者血清Cys C、NGAL、ACR水平均显著高于对照组和A组(P<0.05);两组患者糖尿病病程、糖化血红蛋白和低密度脂蛋白水平比较差异有统计学意义(P<0.05),但年龄、性别等其他临床资料比较差异无统计学意义(P>0.05);Logistic多元回归分析发现Cys C、NGAL、ACR水平、糖尿病病程、糖化血红蛋白均是影响DN患者大血管病变发生的独立危险因素(P<0.05);动脉狭窄组患者血清Cys C、NGAL、ACR水平显著高于动脉内膜正常组和内膜增厚组(P<0.05);血清Cys C、NGAL、ACR水平与血管病变程度呈正相关(P<0.05)。结论DN患者存在血清Cys C、NGAL、ACR水平异常升高,是大血管病变发生的独立危险因素,且其水平与血管病变程度密切相关,可能作为临床诊断或预测DN患者血管病变发生的临床辅助指标。

VEGF、LCN2、hs-CRP在老年冠心病患者冠状动脉侧支循环形成中的诊断价值及相关性

目的:分析血管内皮生长因子(VEGF)、脂质运载蛋白2(LCN2)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)在老年冠心病患者中的诊断价值,并探讨其与冠状动脉侧支循环形成的相关性。方法:收集2020年6月-2021年5月本院收治的老年冠心病患者480例作为研究组,根据Retrop-Cohen分级分为侧支循环组250例和无侧支循环组230例,侧支循环组又分为循环良好组150例和循环不良组100例;同期收集体检中心健康体检者100例作为对照组。比较VEGF、LCN2、hs-CRP在各组的表达差异,分析其诊断价值,探讨其与冠状动脉侧支循环形成的相关性。结果:研究组VEGF、LCN2、hs-CRP均明显高于对照组(P<0.05);循环良好组VEGF、LCN2均明显高于循环不良组,hs-CRP明显低于循环不良组,差异均有统计学意义(P<0.05);VEGF、LCN2、hs-CRP对冠状动脉侧支循环是否良好的ROC曲线结果显示,联合诊断的AUC为0.861,灵敏度和特异度分别为81.6%、62.7%;Spearman相关性分析显示,VEGF、LCN2、hs-CRP与冠状动脉侧支循环分级均密切相关(P<0.05)。结论:血清VEGF、LCN2、hs-CRP水平与老年冠心病患者冠状动脉侧支循环形成密切相关,联合检测有助于病情的诊断和评估。

CNTs及其复合材料在医用材料领域的应用

碳纳米管(CNTs)具有良好的强度和韧性,较大的长径比和比表面积,以及独特的力学、电学、磁学和光学特性,并且表现出良好的生物相容性与生物功能性。基于CNTs独特的结构,研究人员可通过对其修饰和改性,制备出性能优良的CNTs及其复合材料,从而广泛应用于医用材料领域。综述了CNTs及其复合材料在神经/骨组织工程、血管修复与再生、药物/基因载体中的应用,讨论了其在医用材料领域中的生物安全性问题,并对目前亟待研究的重要问题及研究方向进行了展望。

人血管内皮生长因子C基因真核表达载体的构建(英文)

目的 :VEGF C基因的真核表达载体 ,以便进一步研究VEGF C基因在淋巴管生成中的作用。方法 :根据人VEGF C的cDNA序列 ,设计合成一对 5’端分别含有EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的特异性引物 ,运用RT RCR方法扩增人乳腺癌细胞MDA MB 2 31中的VEGF CcDNA(1 2 6kb) ;回收PCR产物 (1 2 8kb) ,并将其连接至克隆载体pUMT 18中 ,重组的pUMT 18在大肠杆菌DH5α内扩增后 ,经质粒提取、EcoRⅠ和BamHⅠ酶切 ,筛选出阳性重组子 ,并进行基因测序鉴定 ;琼脂糖凝胶电泳回收含有VEGF CcDNA全长的酶切片断 (1 2 7kb) ,然后在DNA连接酶作用下将其与真核表达载体pcDNA3 1(- )连接 ,重组质粒经EcoRⅠ和BamHⅠ酶切予以鉴定。结果 :RT PCR产物含有VEGF CcDNA ,基因测序显示重组的pUMT 18中含有正确的人VEGF CcDNA全长序列 ,重组的pcDNA3.1(- )中含有人VEGF CcDNA全长序列。结论 :VEGF C pcDNA3.1(- )。

VEGF复合透明质酸钠对异体BPTB重建兔前交叉韧带再血管化的影响

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)复合透明质酸钠(SH)对异体骨-髌腱-骨(BPTB)重建兔前交叉韧带(ACL)再血管化的影响,为提高肌腱移植物愈合质量提供一种新方法。方法将24只成年新西兰大白兔随机分为A、B两组,每组12只24膝。A组随机选择兔双膝中的一侧植入经VEGF和SH复合处理后的BPTB(SH-VEGF组),另一侧植入仅由PBS处理的BPTB(空白对照组);B组同法选择一侧植入经VEGF处理的BPTB(VEGF组),另一侧植入经SH处理的BPTB(SH组)。A、B两组术后2、4、8周分别处死4只实验动物,对移植物进行大体形态学观察,采用苏木精-伊红染色和免疫组化法评估移植物再血管化情况。结果2、4、8周SH-VEGF组和VEGF组肌腱移植物血管化程度大于SH组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);SH-VEGF组和VEGF组间差异也有统计学意义(P<0.05)。结论在兔ACL异体BPTB重建过程中,SH可作为VEGF的良好载体;SH和VEGF复合后更能促进肌腱移植物早期再血管化。

靶向性载体/基因复合物促进内皮细胞增殖

由于人工血管的表面缺乏活性内皮层,特别是小口径人工血管经常面临着长期通畅率低和再狭窄等难题,从而限制了其在临床上的应用。研究表明,通过基因复合物对内皮细胞转染可以在支架表面快速获得新生内皮层。近年来,基于靶向多肽修饰的基因载体为提高转染效率和降低载体毒性提供了有效的途径。本文详细介绍了目前用于基因转染的各种目的基因和基因载体,并以聚阳离子基因载体为基础,重点阐述了促进内皮细胞增殖的靶向性基因载体的研究进展,结合当前小口径人工血管研究进展,对采用基因转染方式实现其快速内皮化进行了分析和展望。

多功能基因递送系统促进内皮细胞增殖

由于自体血管供应不足,人工血管在心血管疾病的临床治疗中发挥着非常重要的作用。人工血管由于表面缺乏活性内皮层,经常面临术后再狭窄等问题,严重限制了其在临床中的应用。人工血管内皮化能够提高其血液相容性并维持其长期通畅率。大量研究表明,多功能基因递送系统可以促进血管内皮细胞增殖,从而实现人工血管快速内皮化。近年来,功能多肽和阳离子聚合物为开发低毒且高效的多功能基因递送系统提供了有效途径。本文详细介绍了目前用于血管内皮细胞基因转染的功能多肽和聚阳离子基因载体,重点阐述了促进内皮细胞增殖的多功能逐级靶向基因递送系统的研究进展,对采用基因转染方式促进人工血管快速内皮化进行了分析和展望。