血管活性肠多肽对老龄勃起功能障碍大鼠的作用及机制研究

目的 观察血管活性肠多肽(VIP)对老龄勃起功能障碍(ED)大鼠的作用及其机制。方法40只SPF级雄性SD大鼠饲养至18月龄构建老龄模型大鼠,采用阿扑吗啡实验筛选老龄ED大鼠,阿扑吗啡实验结果阳性的老龄勃起功能正常大鼠为正常组,实验结果阴性的老龄ED大鼠为ED组和干预组,每组7只。干预组大鼠使用VIP 25 ng/kg隔日腹腔注射,治疗28 d。检测阴茎海绵体内压(ICP)及平均动脉压(MAP)评估勃起功能;酶联免疫吸附法检测大鼠阴茎海绵体组织环磷酸腺苷(cAMP)、一氧化氮(NO)含量;组织免疫荧光技术(IF)测大鼠阴茎海绵体组织血管性血友病因子(vWF)表达水平;蛋白质印迹法检测海绵体蛋白激酶A (PKA)、内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)、血管性血友病因子(vWF)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平。结果 正常组、ED组和干预组基础ICP分别为(20.41±5.92)mmHg、(21.76±5.37)mmHg和(18.54±3.97)mmHg(1mmHg=0.133 kPa),MAP分别为(123.52±14.74)mmHg,(118.83±10.97)mmHg和(114.28±12.21)mmHg,各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,ED组Max ICP、Max ICP/MAP明显降低[Max ICP:(42.10±6.57)mmHg比(94.82±9.71)mmHg;Max ICP/MAP:(0.36±0.08)比(0.78±0.16),P均<0.01]。与ED组比较,干预组Max ICP、Max ICP/MAP明显升高[Max ICP:(59.52±2.20)mmHg比(42.10±6.57)mmHg,P<0.01;Max ICP/MAP:(0.52±0.06)比(0.36±0.08),P<0.05]。与正常组比较,ED组vWF荧光强度明显减少,干预组明显增加。与正常组比较,ED组cAMP和NO含量均降低[cAMP:(33.11±11.82)pmol/mg比(94.63±9.36)pmol/mg;NO:(3.05±1.51)nmol/mg比(11.59±2.43) nmol/mg,P均<0.01];PKA、eNOS、vWF及VEGF蛋白表达水平降低[PKA:(0.66±0.08)比(1.04±0.22);eNOS:(0.54±0.13)比(0.71±0.09);vWF:(1.22±0.30)比(2.04±0.24);VEGF:(0.45±0.13)比(0.82±0.18),P<0.05或P<0.01];与ED组比较,干预组cAMP、NO含量均增加[cAMP:(58.46±9.48)pmol/mg比(33.11±11.82)pmol/mg;NO:(5.31±1.39)nmol/mg比(3.05±1.51)nmol/mg,P<0.05或P<0.01];PKA、eNOS、vWF、VEGF蛋白表达水平增加[PKA:(0.97±0.11)比(0.66±0.08);eNOS:(0.68±0.10)比(0.54±0.13);vWF:(1.82±0.39)比(1.22±0.30);VEGF:(0.65±0.07)比(0.45±0.13),P<0.05或P<0.01]。结论 VIP可能通过调控cAMP/PKA信号通路与海绵体内皮细胞功能从而改善老龄大鼠ED。

薯蓣皂苷元通过激活VIP/cAMP/PKA通路改善慢性阻塞性肺疾病大鼠气道炎症和肺损伤

目的探讨薯蓣皂苷元对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠及血管活性肠肽(VIP)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)通路的影响。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、薯蓣皂苷元组(100 mg/kg)、阳性组(地塞米松0.81 mg/kg)、薯蓣皂苷元+H89组(100 mg/kg薯蓣皂苷元+1 mg/kg VIP/cAMP/PKA通路抑制剂H89),每组12只。4周后,采用全身体积描记系统检测大鼠肺功能,采用酶联免疫吸附试验检测大鼠血清中炎症因子水平及肺组织cAMP水平,采用HE染色检测肺组织病理变化,采用流式细胞术测定肺Th17、Treg细胞比例,采用蛋白质印迹法检测肺组织VIP、PKA蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠肺组织有炎症细胞浸润、部分血管破裂等损伤,炎症评分、白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-17、Th17细胞水平及Th17/Treg均升高(P<0.05),肺功能、Treg细胞、VIP、cAMP水平及p-PKA/PKA降低(P<0.05);与模型组比较,薯蓣皂苷元组、阳性组大鼠肺功能损伤缓解,炎症评分、IL-6、IL-8、TNF-α、IL-17、Th17细胞水平及Th17/Treg均降低(P<0.05),肺功能、Treg细胞、VIP、cAMP水平及p-PKA/PKA升高(P<0.05);与薯蓣皂苷元组比较,薯蓣皂苷元+H89组大鼠肺功能损伤加重,炎症评分、IL-6、IL-8、TNF-α、IL-17、Th17细胞水平及Th17/Treg升高(P<0.05),肺功能、Treg细胞、VIP、cAMP水平及p-PKA/PKA降低(P<0.05)。结论薯蓣皂苷元可能通过激活VIP/cAMP/PKA通路,改善COPD大鼠气道炎症和肺损伤。

归芪白术方联合奥沙利铂通过调节VIP/cAMP/PKA/AQPs信号通路保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障

目的:探讨归芪白术方联合奥沙利铂通过血管活性肠肽(VIP)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)信号通路调控下游水通道蛋白3(AQP3)和水通道蛋白4(AQP4)从而保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障的作用。方法:将密度为1×10^(7)个/mL的胃癌细胞株MFC制成细胞悬液,经荷瘤小鼠右腋下接种细胞悬液0.2 mL,构建胃癌荷瘤小鼠模型,造模成功后将小鼠随机分为5组,模型组、奥沙利铂组(10mg·kg^(-1))、奥沙利铂加归芪白术方高、中、低剂量组(17.68、8.84、4.42 g·kg^(-1)),每组10只,另外余10只作为空白组。各组小鼠经灌胃或腹腔注射中药、奥沙利铂或生理盐水,治疗14 d。末次给药后,次日眼球取血分离血清并取其结肠样本。苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态的变化。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中D-乳酸(D-LA)、二胺氧化酶(DAO)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组小鼠结肠组织中VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组黏膜下层水肿,黏膜层中肠腺排列紊乱,杯状细胞缺失,可见大量炎性细胞浸润及绒毛脱落的现象。而各给药组均有不同程度的改善;与正常组比较,模型组血清中DAO和D-LA水平均显著上升(P<0.01),与模型组比较,联合用药高剂量组DAO和D-LA水平及联合用药中剂量组D-LA水平均有所下降(P<0.05,P<0.01),与奥沙利铂组比较,联合用药高、中剂量组D-LA水平有所下降(P<0.05),其余组DAO和D-LA表达水平也有所下降,但差异无统计学意义;与正常组比较,模型组小鼠的VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各给药组小鼠的VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白表达水平均有所升高,其中联合用药高剂量组VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),联合用药中剂量组cAMP蛋白表达水平升高(P<0.05);与奥沙利铂组比较,联合用药高剂量组cAMP蛋白表达水平明显升高(P<0.05),其余组mRNA及蛋白表达也有所升高,但差异无统计学意义。结论:归芪白术方联合奥沙利铂通过VIP/cAMP/PKA信号通路调节AQP3和AQP4达到保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障的作用。

基于VIP/cAMP/PKA/AQPs信号通路研究肺肠合治法减轻肺水肿治疗急性肺损伤的作用机制

目的:探究肺肠合治法(麻黄汤+大承气汤)减轻脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺水肿的作用和机制。方法:Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、肺肠合治低、中、高剂量组、地塞米松组。采用LPS(10 mg·kg^(-1))腹腔注射复制ALI大鼠模型,造模后开始灌胃给药,正常组给予生理盐水(25 m L·kg;),肺肠合治低(5 g·kg^(-1))、中(7.5 g·kg^(-1))、高(10 g·kg^(-1))剂量组分别给予(麻黄汤+大承气汤)灌胃,阳性药组给予地塞米松(5 mg·kg^(-1)),分别于LPS注射后0、8、16 h给药,共3次。给药结束后取肺组织及血清,肺组织苏木素-伊红(HE)染色,进行肺水肿评分;计算各组大鼠肺组织干/湿(D/W)质量比;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清血管活性肠肽(VIP)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠肺组织水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白5(AQP5)、VIP、环磷酸腺苷(c AMP)、磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)、蛋白激酶A(PKA)蛋白的表达量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠肺组织中VIP m RNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺损伤明显,水肿评分升高,肺组织D/W降低(P<0.01),肺组织AQP1、AQP5、c AMP、p-PKA/PKA明显降低(P<0.05,P<0.01),VIP含量显著升高(P<0.01),肺组织VIP蛋白和m RNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,肺肠合治组大鼠肺损伤减轻,肺组织D/W显著升高(P<0.01),肺组织AQP1、AQP5、VIP、c AMP、p-PKA/PKA升高(P<0.05,P<0.01),肺组织VIP表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论:肺肠合治法能减轻急性肺损伤造成的肺组织水肿,其机制可能通过激活VIP/c AMP/PKA信号通路,进而促进水通道蛋白AQP1、AQP5的表达,增强肺组织的水液代谢有关。