多发性子宫肌瘤患者血清ANGPTL2、VASH1的表达及临床意义

目的 分析血清中血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)和血管生成抑制蛋白1(VASH1)的表达水平,探讨其在多发性子宫肌瘤中的临床意义。方法 选取2018年1月至2022年1月于东南大学医学院附属南京同仁医院就诊的312例多发性子宫肌瘤患者为研究对象(观察组),同时期来本院体检的312名健康女性作为对照(对照组);酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中ANGPTL2和VASH1水平;Pearson相关分析血清中ANGPTL2和VASH1水平的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清中ANGPTL2和VASH1水平对多发性子宫肌瘤的诊断价值;Logistic回归分析多发性子宫肌瘤发生的影响因素。结果 观察组血清中ANGPTL2和VASH1水平显著高于对照组,差异有统计学意义(t=12.870、9.935,P<0.05);血清中ANGPTL2和VASH1水平与阴道不规则出血、肌瘤数量、最大肌瘤直径以及平均肌瘤体积有关,差异有统计学意义(P<0.05),而与年龄、月经情况、绝经情况、妊娠史、流产史、ER、PR以及肿瘤部位无关,差异无统计学意义(P>0.05);Pearson相关分析结果显示,多发性子宫肌瘤患者血清中ANGPTL2和VASH1水平呈正相关(r=5.440,P<0.05);ROC曲线分析结果显示,血清中ANGPTL2和VASH1水平联合诊断多发性子宫肌瘤的曲线下面积(AUC),效果较ANGPTL2和VASH1单一指标更好(P<0.05);Logistic回归分析结果显示,ANGPTL2、VASH1是多发性子宫肌瘤发生的影响因素(P<0.05)。结论 多发性子宫肌瘤患者血清中ANGPTL2和VASH1水平显著升高,两者联合可辅助诊断多发性子宫肌瘤。

血清IL-19、VASH-1、NLR在2型糖尿病肾病中的水平及临床意义

目的探讨血清白介素19(IL-19)、血管生成抑制蛋白1(VASH-1)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)在2型糖尿病肾病(T2DN)中的水平及意义。方法选取2020年12月—2022年12月在邯郸市第一医院内分泌一科治疗的T2DN患者100例作为T2DN组,同时收集单纯2型糖尿病(T2DM)患者100例作为T2DM组,比较2组血清IL-19、VASH-1、NLR水平,并分析血清IL-19、VASH-1、NLR对T2DN的预测价值。结果T2DN组血清IL-19、VASH-1、NLR明显高于T2DM组(t/P=8.374/<0.001、8.277/<0.001、8.762/<0.001)。经二元Logistic回归分析,IL-19、VASH-1、NLR升高是发生T2DN的危险因素[OR(95%CI)=1.120(1.037~1.210)、1.006(1.001~1.012)、2.586(1.165~5.740),P<0.05]。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,IL-19、VASH-1、NLR及三者联合预测T2DN的曲线下面积(AUC)分别为0.807、0.799、0.822、0.854,约登指数分别为0.520、0.490、0.550、0.740,IL-19在最佳截断值对应的敏感度、特异度分别为0.940、0.580,VASH-1为0.660、0.830,NLR为0.920、0.630,三者联合为0.860、0.880。结论T2DN患者血清IL-19、VASH-1、NLR水平升高,且血清IL-19、VASH-1、NLR三者联合对T2DN具有较高的预测价值。

Vasohibin-2慢病毒过表达载体的构建及相关增殖功能研究

目的:构建Vasohibin-2(VASH2)慢病毒过表达载体,获得稳定表达的肝癌细胞株HepG2,并观察其对HepG2增殖的影响。方法:通过逆转录、PCR技术从细胞总RNA中获得VASH2目的基因,引入NheⅠ和PstⅠ酶切位点,连接到pTA2 vector中,经NheⅠ和PstⅠ双酶切后再连接到Lv-CMV-EGFP vector中,并对重组后的质粒进行双酶切和测序分析;VASH2过表达载体、pVSV-G及delta8.91 3个质粒共转染293T细胞,获得慢病毒感染肝癌细胞株HepG2,经流式细胞仪分选阳性细胞;提取细胞总RNA和总蛋白,利用real-time PCR和Western blot鉴定稳转细胞株中VASH2的表达,用MTT法和细胞周期法检测各组HepG2的增殖能力。结果:成功构建VASH2慢病毒过表达载体,感染肝癌细胞株HepG2后能够稳定高表达VASH2;稳定高表达VASH2的HepG2增殖能力明显增强(P<0.05)。结论:成功构建了VASH2慢病毒过表达载体,并发现VASH2可以促进HepG2的增殖能力,这为进一步研究VASH2在肝癌中的功能及作用机制奠定了基础。

应用CRISPR/Cas9技术制备Vasohibin-2基因敲除小鼠模型及验证

目的 :利用Cas9/RNA system gene targeting技术高效构建Vash2基因敲除小鼠模型。方法 :根据Vash2基因序列,设计2对Vsah2基因的单链向导RNA(single-guide RNA,sg RNA)引物序列并克隆进入p U57-T7-GDNA载体。利用T7 RNA聚合酶体外转录sg RNA和Cas9 m RNA。将体外转录的g RNA/Cas9 m RNA显微注射入小鼠受精卵,通过PCR和基因测序对Vash2移码突变进行检测和鉴定。繁育Vash2基因敲除小鼠并分析后代突变情况。结果:顺利构建表达sg RNA载体并体外转录,成功将有活性的sg RNA和Cas9 m RNA直接注射入受精卵。基因测序鉴定获得5只F0代初建鼠。选取5号鼠与野生型鼠回交,得到F1代鼠,再相互交配得到F2代鼠。PCR显示F2代鼠Vash2基因移码突变,成功建立Vash2基因敲除小鼠模型并传代繁育。结论:通过Cas9/RNA systemgene targeting技术可以成功制备Vash2基因敲除鼠模型,是用于Vash2研究的有效工具。

VASH2在肿瘤血管生成中的作用研究进展

肿瘤是高度血管化的疾病,肿瘤的血管生成作用是其发生发展以及转移等生物学过程的基础,但具体形成机制仍未完全明确。血管抑制素2(VASH2)是血管抑制素家族的成员之一,在肿瘤中广泛表达,通过参与增强血管内皮细胞增殖和迁移、促进血管生成相关因子的表达、调节肿瘤微环境及影响微管动态平衡等形式,促进肿瘤血管生成。尽管VASH2已被认为是肿瘤抗血管生成疗法的潜在靶点之一,但其蛋白质结构功能和下游信号转导仍不明确,还需要未来进一步研究,以探索新型抗血管生成方案。

血清血管生成抑制蛋白-1、血管内皮生长因子与2型糖尿病视网膜病变的相关性研究

目的探究血清血管生成抑制蛋白-1(VASH-1)、血管内皮生长因子(VEGF)与2型糖尿病视网膜病变的相关性。方法选择2019年7月—2020年6月在本院内分泌一科住院治疗的189患者作为研究对象,根据1999年WHO糖尿病诊断及分型标准、专业眼科医师行眼底检查和(或)荧光素血管造影(FFA)结果进行分组,其中2型糖尿病+无糖尿病(T2DM+NDR)组63例,2型糖尿病+非增殖期糖尿病视网膜病变(T2DM+NPDR)组63例,2型糖尿病+增殖期糖尿病视网膜病变(T2DM+PDR)组63例;另选取同时期常规体检健康组46名作为对照组。比较四组相关指标,如性别、体重指数(BMI)、糖尿病病程、血压、空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、C肽(C-P)0分水平、空腹胰岛素水平(FINS)等。运用酶联免疫吸附法(ELISA)对四组受试者血清中VASH-1、VEGF水平进行测定并分析其相关性。结果血清中VEGF表达水平比较:T2DM+PDR组>T2DM+NPDR组>T2DM+NDR组>对照组,两两组间差异具有统计学意义(P<0.01);血清VASH-1表达水平比较:T2DM+PDR组>T2DM+NPDR组>T2DM+NDR组>对照组,两两组间差异具有统计学意义(P<0.01)。Pearson分析:四组受试者血清中VEGF、VASH-1表达水平均与2型糖尿病视网膜病变发展程度呈正相关,各组中VEGF、VASH-1表达水平呈正相关。结论VEGF、VASH-1水平随着2型糖尿病视网膜病变程度的加深表达水平逐渐升高,存在一定的差异性,在PDR期较为明显,提示两者在2型糖尿病视网膜病变早期阶段诊断及治疗有着重要的作用。

血管抑制素-2通过调控上皮细胞间质化促进宫颈癌细胞的增殖和转移

目的探讨血管抑制素-2(VASH2)能否促进宫颈癌细胞在体外的增殖和转移及其可能的分子机制。方法在外源性过表达和干扰内源性flotillin-1表达的宫颈癌细胞中,通过公共数据库结合RNA-seq挖掘分析差异表达基因;在宫颈正常上皮细胞(HcerEpic细胞)和宫颈癌细胞(HeLa、C-33A、Ca ski、SiHa和MS751)以及不同淋巴结转移状态的新鲜宫颈癌组织中检测VASH2的表达;运用慢病毒稳定表达载体构建外源性过表达VASH2和干扰内源性VASH2表达的宫颈癌细胞及对照细胞,并检测其增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成的情况;在上述细胞模型中检测上皮细胞间质化(EMT)过程关键分子及TGF-β的表达水平。结果RNA-seq发现在外源性过表达flotillin-1的宫颈癌细胞中VASH2的表达上调(P<0.05),而在抑制内源性flotillin-1表达的细胞中VASH2表达下调(P<0.05),并在公共数据库中证实VASH2在有淋巴结转移的宫颈癌组织中相对于无淋巴结转移的癌组织呈高表达(P<0.01)。相对于HcerEpic细胞和淋巴结未转移的宫颈癌组织,VASH2在Ca Ski、SiHa、MS751细胞和有淋巴结转移的宫颈癌组织中表达上调(P<0.05);相对于对照细胞,外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成能力增强,而抑制内源性VASH2表达的宫颈癌细胞上述能力则受到抑制(P<0.05);相对于对照细胞,外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞中EMT过程的关键分子E-cadherin下调,N-cadherin、Vimentin和VEGF-C上调,而抑制内源性VASH2表达的宫颈癌细胞中E-cadherin上调,N-cadherin、Vimentin和VEGF-C下调(P<0.05);外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞中TGF-β的mRNA表达水平上调,而抑制内源性VASH2表达的宫颈癌细胞中TGF-β的mRNA表达水平下调(P<0.001)。结论flotillin-1可能通过下游靶基因VASH2参与TGF-β信号通路诱导EMT过程在体外促进宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成。

血管抑制蛋白2在乳腺癌中的表达情况及其对患者预后的影响

目的探讨血管抑制蛋白2(VASH-2)在乳腺癌患者中的表达及其对患者预后的影响。方法选取2012年1月至2013年12月新疆医科大学附属肿瘤医院接受标准手术治疗的185例原发乳腺癌患者术后组织标本,采用免疫组化方法对所有患者进行乳腺癌组织和癌旁组织VASH-2检测;在术前所有患者行B超引导下乳腺癌组织富血供病灶穿刺和乏血供病灶穿刺,采用免疫组化方法检测VASH-2蛋白在乳腺癌组织不同血供中的表达情况;分析不同临床病理参数患者VASH-2表达的差异,并采用Kaplan-Meier法分析VASH-2不同表达情况对患者5年无病进展生存期(PFS)的影响。结果VASH-2在乳腺癌组织中表达率为52.43%(97/185),而在癌旁组织中表达率为27.03%(50/185),差异有统计学意义(χ^(2)=24.933,P<0.001)。VASH-2在乳腺癌组织富血供病灶表达率为60.82%(59/97),而在乏血供病灶中表达率为38.64%(34/88),差异有统计学意义(χ^(2)=9.087,P<0.05)。不同肿块大小、分子分型及HER-2是否阳性的乳腺癌患者VASH-2表达情况比较,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌VASH-2低表达者5年PFS优于VASH-2高表达者,差异有统计学意义(χ^(2)=5.635,P<0.05)。结论VASH-2在乳腺癌组织及其富血供病灶中多呈高表达,且此类患者5年PFS较低,可为乳腺癌患者预后判断提供参考。

VASH2对脑胶质瘤血管新生的影响机制

目的通过观察血管抑制素-2(VASH2)对脑胶质瘤微血管内皮细胞增殖、迁移和管形成的调控作用,探究其对脑胶质瘤血管新生的影响机制。方法构建人脑胶质瘤微血管内皮细胞模型,通过稳定转染获得VASH2过表达和表达沉默的细胞系,在后续实验中分组,分别为空白对照组、VASH2过表达阴性对照空质粒组[VASH2(+)NC组]、VASH2过表达组[VASH2(+)组]、VASH2表达沉默阴性对照空质粒组[VASH2(-)NC组]和VASH2表达沉默组[VASH2(-)组]。通过细胞生长抑制实验检测细胞增殖能力的变化;体外管形成实验检测细胞管形成能力的变化;细胞迁移实验检测细胞迁移能力的变化。应用GraphPad Prism v5.01统计软件进行数据分析。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用Newman-Keuls分析。结果在人脑胶质瘤微血管内皮细胞中上调VASH2的表达,VASH2过表达组与VASH2过表达阴性对照空质粒组相比较,细胞的增殖能力、迁移能力和管形成能力均明显增强(P<0.05),表明VASH2过表达能够促进胶质瘤血管的新生。在人脑胶质瘤微血管内皮细胞中下调VASH2的表达,VASH2表达沉默组与VASH2表达沉默阴性对照空质粒组相比较,细胞的增殖能力、迁移能力和管形成能力均明显减弱(P<0.05),表明VASH2沉默能够抑制胶质瘤血管的新生。结论VASH2在胶质瘤管形成的调控方面扮演了重要的角色,可能为胶质瘤的抗血管治疗提供新策略。

VASH-2与肿瘤关系的研究进展

血管生成参与肿瘤的发生、侵袭和转移,在肿瘤发展过程中起到重要作用。Vasohibin家族是最近发现的影响血管生成的调节因子,VASH-1与VASH-2是该家族的重要成员,参与肿瘤生成和发展。VASH-1在肿瘤发病过程中起到负性调控作用,VASH-2则促进血管生成。该文对VASH-2与肿瘤关系进行综述,探讨VASH-2在肿瘤中的作用,为血管靶向抗癌药物的研发提供新思路。

Vasohibin-2在肝癌组织中表达及其与复发和预后的关系

目的:探讨Vasohibin-2在肝细胞性肝癌(HCC)组织中的表达及其与肝癌切除术后复发和预后的关系。方法:采用Western Blot、q-PCR、免疫组化等方法检测45例HCC临床标本中癌组织和癌旁组织中Vasohibin-2的表达,分析Vasohibin-2与HCC的肿瘤细胞分化程度、结节数目、血管浸润及肝外转移等临床病理特征的关系。同时,通过随访分析45例肝癌切除术后复发及预后,分析Vasohibin-2在HCC中预后及复发之间的关系。结果:免疫组化、Western Blot、qRT-PCR结果均显示HCC中Vasohibin-2的阳性表达显著高于癌旁组织(P<0. 05)。结合患者临床病例资料以及随访结果显示,Vasohibin-2在HCC中的表达量与肿瘤血管浸润以及肿瘤分化程度呈正相关,并且Vasohibin-2高表达组患者术后复发转移率高于低表达组(P<0. 05),而术后总生存时间显著低于低表达组(中位数,12 vs 65月;P<0. 001)。结论:Vasohibin-2在HCC中显著高表达,而HCC中Vasohibin-2高表达预示肝癌组织恶性程度和手术后复发转移的风险更高,并且提示不良预后。

vasohibin-2和血管内皮生长因子在乳腺癌中表达及分子机制

目的探讨vasohibin-2和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在乳腺癌组织中的表达及其分子机制。方法 30例乳腺癌患者手术切除的新鲜乳腺癌组织(乳腺癌组)和癌旁乳腺组织(癌旁组),18例乳腺纤维腺瘤患者手术切除的新鲜乳腺纤维腺瘤组织(腺瘤组)。3组采用反转录-PCR检测vasohibin-2和VEGF mRNA水平,采用Western blot检测vasohibin-2和VEGF蛋白表达水平。培养人乳腺癌细胞MCF-7,应用50μg/L VEGF刺激人乳腺癌细胞株MCF-7,于0、6、12、24、48h时采用跨膜迁移实验观察VEGF对乳腺癌细胞迁移的影响。结果乳腺癌组vasohibin-2和VEGF-C mRNA(15.35±1.31、10.75±1.34)和蛋白(2.01±1.29、2.89±1.06)表达水平明显高于癌旁组(mRNA为1.21±0.36、0.92±0.19,蛋白为0.56±0.22、0.83±0.31)和腺瘤组(mRNA为0.51±0.26、0.91±0.31),蛋白为(0.33±0.17、0.85±0.13)(P均<0.05);乳腺癌组淋巴结转移者vasohibin-2和VEGF mRNA(20.19±2.57、16.32±2.24)和蛋白(2.95±1.66、3.66±1.89)表达水平高于未转移者(mRNA为10.22±1.86、8.42±2.16,蛋白为1.74±1.23、2.18±1.56)(P均<0.05);加入VEGF后0、6、12、24、48h时,乳腺癌MCF-7细胞的细胞迁移率分别为3.51%、14.62%、37.18%、71.49%、95.43%,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 vasohibin-2和VEGF在乳腺癌组织中表达上调且其表达与淋巴结转移有关,VEGF可促进乳腺癌细胞迁移并上调vasohibin-2基因表达。

Vasohibin蛋白质家族与肿瘤血管新生

血管新生存在于包括肿瘤在内的多种生理和病理过程中,且受到局部环境中血管生成促进因子和抑制因子的共同调节,这一过程对肿瘤增殖、侵袭、转移能力尤为重要。体内存在着许多内源性血管生成调节因子。最近,vasohibin家族作为一个新的血管新生调节因子进入人们的视线,备受关注。本文就vasohibin家族在肿瘤血管新生过程中的重要角色及其在抗血管生成治疗中的应用做一综述。

2型糖尿病合并糖尿病肾病患者血清血管生成抑制蛋白1浓度及其与尿白蛋白肌酐比值的相关性分析

目的探讨2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)合并糖尿病肾病患者血清血管生成抑制蛋白1(vasohibin-1,VASH-1)浓度及其与尿白蛋白肌酐比值(urinary albumin to creatinine ratio,UACR)的相关性。方法回顾性分析大连大学附属新华医院2017年2月至2020年12月196例T2DM患者的临床资料,根据是否合并糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)将患者分为病例组(T2DM合并DN,163例)和对照组(T2DM未合并DN,33例)。病例组再按不同UACR进一步分为正常组(Ⅰ组,UACR<30 mg/g,21例)、微量组(Ⅱ组,UACR≥30~≤300 mg/g,50例)、大量组(Ⅲ组,UACR>300 mg/g,43例)和大量并高血压组(Ⅳ组,UACR>300 mg/g且合并高血压,49例),检测各组患者血清VASH-1、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)以及其他血生化指标。符合正态分布的计量资料两组间比较采用t检验;多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用q检验。计数资料组间比较采用χ^(2)检验。T2DM合并DN影响因素分析采用多因素Logistic回归分析,VASH-1与UACR间相关性采用Pearson相关分析。结果病例组的UACR[(1175.9±120.4)mg/g]、CRP[(9.80±2.01)mg/L]、ESR[(20.61±2.20)mm/h]、TGF-β1[(16.75±2.05)μg/L]、VASH-1[(645.3±183.5)ng/L]高于对照组[(11.5±2.0)mg/g、(4.77±1.34)mg/L、(8.33±1.56)mm/h、(10.63±1.97)μg/L、(416.3±162.1)ng/L],差异均有统计学意义(t值分别为123.39、13.76、30.54、15.75、6.66,均P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,VASH-1(OR=1.881,95%CI 1.146~3.089)、UACR(OR=1.511,95%CI 1.064~2.146)、TGF-β1(OR=1.846,95%CI 1.135~3.001)均为T2DM合并DN的影响因素(P值分别为0.009、0.022、0.012)。Ⅲ组及Ⅳ组患者血清VASH-1[(693.5±201.4)、(709.8±214.7)ng/L]均高于Ⅰ组、Ⅱ组[(585.3±162.1)、(632.9±165.5)ng/L],组间比较差异有统计学意义(F=129.46,P<0.001)。Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组及Ⅳ组患者CRP[(7.08±1.36)、(8.99±3.72)、(10.58±3.48)、(11.64±3.50)mg/L]、ESR[(17.36±1.76)、(19.05±4.12)、(21.45±5.74)、(22.69±9.13)mm/h]、TGF-β1[(14.75±1.97)、(16.50±1.90)、(17.06±1.23)、(18.39±1.46)μg/L]依次增高,差异均有统计学意义(F值分别为73.48、156.61、25.83,均P<0.001)。Pearson相关分析显示VASH-1与UACR有明显正相关性(r=0.532,P=0.008)。结论T2DM合并DN患者血清VASH-1的浓度随UACR的增加而增加,VASH-1可能成为预测T2DM早期DN新的标志物。

VASH1、FGF2在溃疡性结肠炎组织中的表达及其与患者预后的相关性

目的探讨溃疡性结肠炎(UC)组织中血管生成抑制蛋白1(VASH1)、成纤维细胞生长因子2(FGF2)表达及其与患者预后的相关性。方法抽取河南省直属机关第一门诊部和河南省人民医院2014年9月至2019年10月随访资料齐全的63例UC患者作为研究对象,收集其C反应蛋白(CRP)、UC内镜下严重度指数(UCEIS)评分等一般临床资料,并将其分为轻度UC组(26例)、中度UC组(22例)和重度UC组(15例);收集同期64例结肠息肉患者作为对照组,比较对照组、轻度UC组、中度UC组、重度UC组患者组织VASH1 mRNA、FGF2 mRNA表达水平;对63例UC患者进行2年随访,根据预后情况分为预后良好组44例和预后不良组19例,比较预后良好组和预后不良组患者的一般临床资料及患者组织VASH1 mRNA、FGF2 mRNA的表达水平;采用受试者工作特征曲线分析组织VASH1 mRNA、FGF2 mRNA对UC患者预后不良的预测价值。结果对照组、轻度UC组、中度UC组、重度UC组VASH1 mRNA、FGF2 mRNA表达水平依次降低,比较差异有统计学意义(P<0.05)。与预后良好组比较,预后不良组CRP水平较高,UCEIS评分>6分者比例较高,VASH1 mRNA、FGF2 mRNA表达水平较低(P<0.05)。组织VASH1 mRNA、FGF2 mRNA及二者联合预测UC患者预后不良的曲线下面积分别为0.880(95%CI 0.777~0.984)、0.836(95%CI 0.740~0.933)、0.965(95%CI 0.923~0.998),特异度分别为84.2%、94.7%、84.2%,敏感度分别为81.8%、63.6%、95.5%。结论VASH1 mRNA、FGF2 mRNA在UC患者组织中均为低表达,临床检测其表达量可能有助于评估患者疾病严重程度及预后。