VNP对碾压撕脱皮瓣P-选择素表达的影响

目的:探讨血管钠肽(Vasonatrin peptide,VNP)对碾压撕脱伤皮瓣P-选择素表达的影响。方法:24只大鼠随机分为3组(n=8),分别为SHAM手术组、碾压撕脱组及VNP+碾压撕脱组,于术前、术后12h及24取材,用免疫组织化学染色标记不同方式处理组皮瓣中P-选择素的表达。结果:碾压撕脱组皮瓣中P-选择素表达水平较高,而采用VNP治疗组皮瓣中P-选择素表达量较前者显著降低(P<0.05)。结论:VNP可显著降低碾压撕脱皮瓣中P-选择素的表达量,进而减轻炎症反应并抑制血栓形成,可为临床上提高碾压撕脱皮瓣成活率提供一种新的治疗思路。

VNP减弱NE刺激的心肌细胞c-fos表达

目的 :研究血管利钠肽 (VNP)对去甲肾上腺素 (NE)刺激的心肌细胞c fos表达的影响。方法 :分离纯化SD乳鼠心肌细胞 ,随机分为四组 :对照组、NE组、VNP组和VNP +NE组。以免疫组织化学染色方法观察各组c fos的表达情况 ,采用放射免疫方法测定了细胞内cGMP水平。结果 :NE( 10 -6mol/L)可以显著升高Fos样免疫阳性细胞数及染色强度 (P <0 .0 5 ,vs对照组 ) ,VNP( 10 -7mol/L)预处理心肌细胞可以减弱NE的作用 (P <0 .0 5 ,vsNE组 ) ,但fos的表达量仍高于基础水平 (P <0 .0 5 ,vs对照组 )。对照组和NE组细胞内cGMP水平无显著差异 ,VNP组cGMP组水平显著高于对照组和NE组 (P <0 .0 5 )。结论 :VNP能减弱NE诱导的c fos表达 ,其 10

血管钠肽(VNP)在大肠杆菌中的表达、纯化及活性分析

利钠肽家族成员在维持机体心血管平衡等方面发挥着重要的生理作用。人工设计的新型利钠肽分子血管钠肽(VNP)由C-型利钠肽和A-型利钠肽的功能结构域嵌合组成,具备两种利钠肽分子的优势功能。采用分子生物学方法,构建了BL21(DE3)/pGEX-4T-1-VNP原核表达系统,在大肠杆菌中实现了融合蛋白GST-VNP的可溶性表达。经离心、超声波破碎、GST亲和层析、G25凝胶过滤和肠激酶酶切后超滤离心便可获得电泳纯的目的产物VNP,最终每升发酵液可获得20 mg重组VNP蛋白。大鼠离体血管环张力法和去膀胱尿液收集法活性评价显示,VNP具有扩张血管和利尿双重功效。

血管钠肽、C型钠尿肽和心房钠尿肽舒血管作用的对比

本实验采用离体血管灌流方法，观察和比较血管钠肽（VNP）、C型钠尿肽（CNP）和心房钠尿肽（ANP）对大鼠肺动脉、腹主动脉和腹腔静脉的舒张作用。结果表明，VNP、CNP和ANP对离体大鼠的保留内皮与去内皮的肺动脉、腹主动脉和腹腔静脉均有浓度依赖性舒张作用。对内皮完整的肺动脉、腹主动脉和腹腔静脉的最大舒张反应（Rmax），VNP分别为（76±17）％，（51±14）％和（62±14）％；CNP分别为（31±8）％，（22±7）％和（41±8）％；ANP分别为（38±10）％，（41±10）％和（11±4）％。内皮完整的肺动脉、腹主动脉和腹腔静脉最大舒张的半数有效浓度（EC50），VNP分别为16±11nmol/L，35±18nmol/L和12±8nmol/L；CNP分别为148±112nmol/L，299±84nmol/L和14±12nmol/L，；ANP分别为66±47nmol/L，16±15nmol/L和909±445nmol／L。VNP的舒张作用显著强于CNP和ANP，有显著差异（P＜0．05～0．01）。但在保留内皮组与去内皮组间无显著差异（P＞0．05）。松弛肺动脉的作用依次为VNP＞ANP≥CNP；松弛腹主动脉的作用依次为VNP＞ANP＞CNP；松弛腹腔静脉的作用依次为VNP＞CNP＞ANP。以上结果提示，VNP的舒血管作用显著强于CNP和ANP，它是一个新合成的、强效的、非内皮依赖性的血管松弛多肽，较CNP和ANP更具有潜?

三种钠尿肽抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖效应的比较

本文比较了心房钠尿肽 (ANP)、C 型钠尿肽 (CNP)、血管钠肽 (VNP)抑制肺动脉平滑肌细胞 (PASMCs)增殖的效应。用蛋白激酶C激动剂佛波酯 (PMA)刺激体外培养大鼠PASMCs的增殖 ,以总蛋白含量和MTT比色OD值为指标 ,观察三种钠尿肽对PMA刺激大鼠PASMCs增殖的影响。结果表明 ,PMA (10 -9～ 10 -7mol/L)显著升高(P <0 0 5 )PASMCs的总蛋白含量和MTTOD值 ,VNP (10 -8～ 10 -6mol/L)、ANP和CNP (10 -7～ 10 -6mol/L)均可显著降低 (P <0 0 5 )PMA (10 -8mol/L)刺激PASMCs的总蛋白含量和MTTOD值。结果提示 :PMA对大鼠肺动脉平滑肌细胞有促增殖作用 ,ANP、CNP、VNP均可抑制PMA刺激大鼠肺动脉平滑肌细胞的增殖 ,VNP的抑制效应最强。

血管钠肽抑制低氧对大鼠心成纤维细胞内钙浓度升高的作用

为了观察血管钠肽 (vasonatrinpeptide ,VNP)对低氧作用时心成纤维细胞增殖的影响 ,将分离纯化乳鼠心成纤维细胞 ,随机分为 4组 :对照组、低氧组 ( 2 %～ 3 % )、VNP组 ( 10 -8～ 10 -6 mol/L)和VNP +低氧组。用MTT比色法、3H TdR掺入法观察细胞增殖情况 ,采用激光共聚焦方法研究VNP对细胞内钙浓度 ( [Ca2 +]i)水平的影响。旨在探讨VNP对低氧刺激心成纤维细胞增殖的影响及机制。我们发现 ,低氧可以使培养的乳鼠心成纤维细胞MTT光吸收值 (OD值 )较对照组显著增高 (P <0 0 5 )。VNP ( 10 -6 mol/L)可以显著降低低氧刺激的心成纤维细胞MTTOD值和细胞内 3H TdR掺入量的增高 (P <0 0 5 )。对照组 [Ca2 +]i 水平无显著差异 ,低氧组 [Ca2 +]i 水平显著升高 ,而VNP ( 10 -6 mol/L)能使升高的 [Ca2 +]i 水平较对照组、低氧组显著降低 (P <0 0 5 )。结果表明 ,VNP能减弱低氧对心成纤维细胞生长的刺激作用 ,其机制可能与Ca2 +等信号转导分子有关。

血管钠肽对中度低氧诱导的心肌细胞蛋白合成有抑制作用

实验探讨了心房钠尿肽家族新成员血管钠肽 (vasonatrinpeptide ,VNP)对中度低氧诱导的心肌细胞蛋白合成的影响。在培养的新生大鼠心肌细胞上 ,用四唑盐 (MTT)比色实验、总蛋白含量测定和3H 亮氨酸掺入实验等方法观察细胞数和蛋白合成情况 ,并用放免法测定VNP对细胞内环鸟苷酸 (cGMP)和环腺苷酸 (cAMP)以及培养上清液中内皮素含量的影响 ,探讨VNP的作用机制。结果显示 ,重度低氧 2 4h ,心肌细胞数和蛋白合成均降低 ,而中度低氧显著增加蛋白的合成 ,具有促心肌细胞肥大的作用。VNP浓度依赖性地抑制中度低氧诱导的心肌细胞蛋白合成增加 ,并且升高细胞内cGMP水平 ,降低低氧诱导的培养上清液中内皮素的含量。结果提示 :VNP抑制中度低氧诱导的新生大鼠心肌细胞蛋白合成增加 ,该作用与其升高细胞内cGMP浓度、降低低氧诱导的内皮素合成和

血管钠肽对离体人乳内动脉的舒张作用

为了研究血管钠肽 (VNP)对人乳内动脉 (humanintramammaryartery ,HIMA)的舒张作用及其机制 ,采用离体血管灌流的方法 ,观察VNP对内皮完整和去内皮HIMA的舒张作用 ,以及HS 142 1、TEA、8 Br cGMP和镁蓝 (MB)对这一过程的影响。实验中观察到 ,VNP ( 0 0 0 0 1- 1μmol/L)可引起剂量依赖性的舒张效应 ,且无内皮依赖性 ;8 Br cGMP ( 0 1- 10 0 0 μmol/L)也可引起剂量依赖性的血管舒张效应。钠尿肽鸟苷酸环化酶 (guanylatecy clase ,GC)受体的特异性阻断剂HS 142 1( 2 0 μmol/L)使VNP舒张HIMA的作用几乎完全消失。MB是GC的抑制剂 ,10 μmol/L的MB不但使VNP舒张HIMA的作用完全消失 ,而且可增强HIMA对去甲肾上腺素 (NE)产生的收缩反应。钙激活钾通道 (KCa)的阻断剂TEA( 1mmol/L)可减弱 (但是不完全阻断 )VNP的舒血管作用。上述结果表明 ,VNP对HIMA具有不依赖内皮的舒张作用 ;此作用是通过作用于平滑肌细胞的钠尿肽GC受体 ,引起细胞内的cGMP水平升高实现的 。

血管钠肽对慢性缺氧大鼠离体血管条的舒张作用

观察血管钠肽（VNP）对慢性缺氧大鼠离休肺动脉、腹主动脉和腹腔静脉的舒张作用及内皮细胞的存在与否、ATP敏感性钾通道（K(ATP)）和β受体阻断剂对其作用的影响．方法：采用离体血管灌流方法，以去甲肾上腺素（NE，10μmol／L）使血管环收缩的效应为基础，测定VNP对血管环张力的影响，求出最大舒张反应值（E(max)）．结果：VNP对慢性缺氧大鼠的保留或去内皮的肺动脉、腹主动脉和腹腔静脉均有浓度依赖性舒张作用．内皮完整的肺动脉、腹主动脉和腹腔静脉对VNP的E(max)分别为（83±7）％，（60±5）％和（62±7）％．VNP对肺动脉的舒张作用明显强于腹主动脉和腹腔静脉（P＜0．05），但在保留内皮组与去内皮组间无显著差异（P＞0．05）．在浴槽内预先孵育优降糖（1μmol／L）或心得安（3μmol／L）可显著降低上述3种血管对VNP的舒张效应．结论：新合成的VNP是一个强效的和非内皮依赖性的血管松弛多肽，其舒血管作用部分受K(ATP)通道和β受体阻断剂的调控．

血管钠肽通过抑制白细胞L-选择素表达保护碾压撕脱皮瓣

目的:本研究组以往的工作已证实血管钠肽(Vasonatrin peptide,VNP)对碾压撕脱伤皮瓣有明显的保护作用,本研究拟探讨该作用是否通过抑制皮瓣损伤后白细胞的L-选择素表达介导。方法:24只大鼠随机分为3组(n=8),分别为SHAM手术组、碾压撕脱组及VNP+碾压撕脱组,于术前及术后12h取材,HE染色观察组织学改变和白细胞浸润情况,并通过免疫组织化学染色对表达于白细胞表面的L-选择素进行标记以明确VNP对碾压撕脱皮瓣的具体作用。结果:碾压撕脱组皮瓣组织损伤情况较重,可见大量中性粒细胞浸润,其表面的L-选择素表达也随之升高,而VNP治疗组皮瓣中的中性粒细胞数目明显减少,其所表达的L-选择素也较前者显著降低(P<0.05)。结论:VNP可抑制白细胞表面L-选择素的表达,显著抑制碾压撕脱伤后皮瓣局部白细胞的活化,减轻其粘附和浸润,进而减轻炎症反应,抑制血栓形成,从而为临床上提高碾压撕脱皮瓣成活率并改善预后提供一种新的治疗思路。

钠尿肽抑制SD乳鼠心肌细胞增殖

目的 比较心房钠尿肽 (ANP)、血管钠肽 (VNP)及C-型钠尿肽 (CNP)抑制心肌细胞增殖的效应 .方法 体外培养 SD乳鼠心肌细胞 ,用蛋白激酶 C激动剂佛波酯 (PMA)刺激心肌细胞增殖 ,以总蛋白含量和噻唑蓝 (MTT)比色吸光度值为指标 ,观察 3种钠尿肽抑制心肌细胞增殖的效应 .结果 PMA(10 - 9～ 10 - 7mol· L- 1 )致使心肌细胞的总蛋白含量和MTT吸光度值显著升高 (P<0 .0 5 ) ,ANP(10 - 8～ 10 - 6 mol·L- 1 ) ,VNP和 CNP(10 - 7～ 10 - 6 mol· L- 1 )均可显著降低PMA(10 - 8mol· L- 1 )刺激的心肌细胞总蛋白含量和 MTT吸光度值 (P<0 .0 5 ) .结论 PMA对心肌细胞有促增殖作用 ,ANP,VNP和 CNP均可抑制 PMA刺激的心肌细胞增殖 ,抑制效应以

血管钠肽抑制肺动脉平滑肌细胞增殖及调控钠尿肽B受体表达的研究

目的 :探讨血管钠肽 (VNP)对肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)增殖及钠尿肽 B受体 (NPR-B)基因表达的影响。方法 :体外培养大鼠 PASMC,分别用噻唑蓝 (MTT)比色法、总蛋白含量测定、放免分析及打点杂交的方法 ,观察了VNP作用下 PASMC的 MTT吸光值、总蛋白含量、细胞内 c GMP、c AMP浓度和 NPR-B的 m RNA水平。结果 :VNP可以显著抑制血清刺激的 PASMC增殖 ,升高细胞内 c GMP浓度及 NPR-B m RNA水平 ,但对细胞内 c AMP浓度无明显影响。结论 :VNP对 PASMC增殖及 NPR-B基因表达具有调控作用 ,并且可能通过 c

血管钠肽对低氧大鼠心脏钠尿肽C受体表达的影响

目的 :探讨低氧对大鼠心脏钠尿肽C受体 (NPR C)表达的调节作用 ,以及血管钠肽 (VNP)对这一过程的影响。方法 :将大鼠随机分为 3组 :对照组、低氧组 (3～ 2 8d)和VNP(2 5～ 75 μg/kgbw) +低氧组 ,采用放射免疫的方法测定大鼠血浆心房钠尿肽 (ANP)的浓度 ,并采用定量PCR的方法分析NPR C的mRNA水平。结果 :低氧 2 8d大鼠血浆ANP浓度显著高于正常大鼠 (P <0 .0 5 ) ,而且每天注射 75 μg/kgbw的VNP使ANP浓度进一步升高 (P <0 .0 1)。低氧 3d对大鼠心脏NPR C的mRNA的量没有显著影响 ;低氧 7d使大鼠心脏NPR C的mRNA的拷贝数显著升高 (P <0 .0 5 ) ;低氧 14d、2 8d使大鼠心脏NPR C的mRNA的拷贝数进一步升高 (P <0 .0 1)。每日注射 2 5μg/kgbw的VNP对低氧诱导的大鼠心脏NPR C表达没有显著影响 ;5 0 μg/kgbw的VNP显著降低低氧大鼠心脏NPR C的表达 (P <0 .0 5 ) ;75 μg/kgbw的VNP进一步降低低氧大鼠心脏NPR C的表达 (P <0 .0 1)。 结论 :VNP可以升高低氧大鼠的血浆ANP水平 ;低氧可以使大鼠心脏NPR C表达增加 ,而且具有时间依赖性 ,而VNP对这一过程有抑制作用 。

血管钠肽抑制心肌增殖与机制的研究

应用 NE、低氧或佛波酯 (PMA)等方法刺激心肌细胞和心成纤维细胞的增殖 ,实验证明血管钠肽对增殖有抑制作用 ,它通过升高细胞内 c GMP和降低细胞内 Ca2 + 浓度等发挥作用 ,对肺动脉平滑肌细胞的增殖也有抑制作用 ,表明 VNP对心肌细胞、心成纤维细胞和肺动脉平滑肌细胞有负调控作用 。

血管钠肽抑制异丙肾上腺素增强的大鼠心肌细胞钙瞬变

采用光谱荧光法研究血管钠肽(vasonatrin peptide,VNP)对心肌细胞内钙瞬变的作用及其机制,观察钠尿肽鸟苷酸环化酶(guanylate cyclase,GC)受体的特异性阻断剂(HS-142-1)、8-溴-环磷酸鸟苷(8-Br-cGMP)和镁蓝(methylene blue,MB)对心肌细胞内钙瞬变的影响。结果显示,异丙肾上腺素(isoproterenol,Iso)(10^(-10)～10^(-6)mol/L)可剂量依赖性地引起心肌细胞内钙瞬变增强,相对于对照组分别增强(13±8)%(P>0.05)、(26±13)%(P<0.05)、(66±10)%(P<0.01)、(150±10)%(P<0.01)和(300±25)%(P<0.01)。此效应可被β肾上腺素受体阻断剂普萘洛尔(10^(-6)mol/L)所阻断。VNP(10^(-10)～10^(-6)mol/L)可剂量依赖性地抑制Iso(10^(-8)mol/L)引起的心肌细胞内钙瞬变幅值的升高,相对于Iso(10^(-8)mol/L)分别减弱(99±3)%(P>0.05)、(96±2)%(P<0.05)、(84±6)%(P<0.01)、(66±3)%(P<0.01)和(62±3)%(P<0.01)。8-Br-cGMP(10^(-7)～10^(-3)mol/L)也可剂量依赖性地抑制Iso(10^(-8)mol/L)引起心肌细胞内钙瞬变的增强。HS-142-1(2×10^(-5)mol/L)使VNP的作用几乎完全消失。MB是GC的抑制剂,10^(-5)mol/L MB不但使VNP的作用完全消失,而且增强Iso对心肌细胞内钙瞬变的效应。VNP和HS-142-1本身对心肌细胞内钙瞬变无显著影响。而MB使心?

血管钠肽促进小鼠3T3-L1脂肪细胞合成脂联素及其可能机制

目的探讨血管钠肽(VNP)对脂肪因子脂联素生成的影响及其机制。方法在3T3-L1细胞分化的脂肪细胞中加入不同浓度的VNP,分别用实时定量PCR法和Western blot法检测脂联素的mRNA水平和蛋白表达,放免法测定细胞内cGMP的水平。结果 VNP可显著增加脂联素mRNA水平和蛋白表达,同时提高细胞内cGMP,含量为(38±5)～(265±35)nmol/L,显著高于对照组的(10±2)nmol/L(P<0.01);该效应可用8-Br-cGMP诱导,可被cGMP依赖性蛋白激酶抑制剂KT-5823或钠尿肽受体NPR阻断剂HS-142-1抑制。结论 VNP可通过NPR/cGMP/PKG信号通路增加脂肪细胞脂联素的表达。

血管钠肽抑制低氧刺激心脏成纤维细胞增殖的机制研究

目的 :研究血管钠肽 (VNP)抑制低氧刺激的心脏成纤维细胞增殖的机制。方法 :分离、培养乳鼠心脏成纤维细胞 ,随机分为四组 :对照组、低氧组、低氧 +VNP组和低氧 +8 Bromo cGMP组。以MTT法观察各组细胞的生长情况 ,分别采用放射免疫和免疫组化的方法研究了VNP对细胞内cGMP水平和增殖细胞核抗原 (PCNA)表达的影响。结果 :低氧 2 4h可以使培养的乳鼠心脏成纤维细胞MTTA4 90nm值显著升高 (P <0 .0 5vs对照组 ) ,VNP(1 0 - 7mol/L)和 8 Bromo cGMP(1 0 - 3mol/L)均可以显著降低低氧刺激的心脏成纤维细胞MTTA4 90nm值 (P <0 .0 5vs低氧组 ) ;对照组和低氧组细胞内cGMP水平无显著差异 ,而VNP(1 0 - 7mol/L)能升高细胞内cGMP水平 (P <0 .0 5vs对照组、低氧组 ) ;低氧组PCNA的表达显著强于对照组 (P <0 .0 5vs对照组 ) ,VNP(1 0 - 7mol/L)可以使低氧刺激的心脏成纤维细胞PCNA表达减弱 (P <0 .0 5vs低氧组 )。结论 :VNP抑制低氧刺激的心脏成纤维细胞增殖与升高细胞内cGMP水平。

血管钠素肽对大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

目的和方法：采用膜片钳全细胞记录方式观察血管钠素肽（ＶＮＰ）对大鼠单个心室肌细胞Ｌ型钙通道电流（ＩＣａ，Ｌ）的影响。结果：当心室肌细胞由保持电压４０ｍＶ除极到０ｍＶ时，０．１，０．２和０．４μｍｏｌ／Ｌ的ＶＮＰ分别使ＩＣａ，Ｌ内向电流峰值降低３１．０５％，４６．９５％和６０．７５％。该抑制作用与ＩＣａ，Ｌ的ｒｕｎｄｏｗｎ现象无关，且对ＩＣａ，Ｌ的最大激活电位无明显影响。当ＩＣａ，Ｌ被异丙肾上腺素（１０－７ｍｏｌ／Ｌ）预先激活后，ＶＮＰ（０．２μｍｏｌ／Ｌ）仍可使ＩＣａ，Ｌ电流峰值下降１８．２３％。结论：ＶＮＰ对大鼠心室肌细胞ＩＣａ，Ｌ具有明确的抑制作用，该作用可能是ＶＮＰ发挥其心血管效应的离子通道机制之一。

血管钠肽抑制低氧刺激心成纤维细胞c-fos的表达

目的 研究血管钠肽 (VNP)对低氧作用时心成纤维细胞增殖的影响 ,并对其机制进行探讨 .方法 分离纯化乳鼠心成纤维细胞 ,随机分为 4组 :对照组、低氧组 (2 0～ 30m L· L- 1 )、VNP组 (10 - 8～ 10 - 6 mol· L- 1 )和 VNP (10 - 6mol· L- 1 ) +低氧组 .以免疫组织化学染色方法观察各组 c-Fos的表达情况 ,采用激光共聚焦方法测定了 [Ca2 + ]i 水平 .结果 1低氧组较对照组可以显著升高 Fos样免疫阳性细胞数及染色强度 (P<0 .0 5 ) ;2 VNP预处理心成纤维细胞可以减弱低氧的作用 (P<0 .0 5 vs低氧组 ) ,但 Fos的表达量仍高于对照组 (P<0 .0 5 ) ;3对照组 [Ca2 + ]i 水平无显著变化 ,低氧组 [Ca2 + ]i 水平显著升高 ,而 VNP能使升高的 [Ca2 + ]i 水平较对照组和低氧组显著降低 (P<0 .0 5 ) .结论 VNP能减弱低氧对心成纤维细胞生长的刺激作用 ,其机制可能与 Ca2 + 等信号转导分子及 c-

血管钠肽对慢性低氧性肺动脉高压的治疗作用

目的 研究血管钠肽 (vasonatrin peptide,VNP)、C型钠尿肽 (C- type natriuretic peptide,CNP)和心房钠尿肽 (a-trial natriuretic peptide,ANP)对大鼠慢性低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)的治疗作用及其机理 .方法 采用整体给药和离体血管灌流方法 ,测定肺血流动力学参数和离体肺动脉的等长张力变化 .结果 VNP,CNP和 ANP都能有效降低大鼠慢性 HPH的平均肺动脉压(m PAP) ,P<0 .0 5～ P<0 .0 1;除 CNP外 ,VNP和 ANP均能明显降低肺血管阻力 (PVR) ,P<0 .0 5～ P<0 .0 1,其中 VNP降低 m PAP和 PVR的作用明显大于 CNP和 ANP;VNP,CNP和 ANP对体循环血压 (m CAP)和心率 (HR)均无明显影响 ,P>0 .0 5 .VNP,CNP和 ANP对离体肺动脉均有浓度依赖性舒张作用 ,但不受内皮细胞的影响 ;在浴槽内预先加入优降糖或心得安可显著降低肺动脉对 VNP和 CNP的最大舒张反应 (Rmax) ,P<0 .0 5～ P<0 .0 1,而对 ANP却无明显影响 .结论 VNP对大鼠慢性 HPH具有显著的治疗作用 ,它是一个新型的、强效的、非内皮依赖性的血管松弛多肽 ,较