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Vasorin在非小细胞肺癌中的表达及与临床特征的关系
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作者 何芳 谭皓 +1 位作者 黄语嫣 蒋莉 《检验医学与临床》 CAS 2024年第21期3117-3120,3125,共5页
目的探讨Vasorin在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义。方法收集2020年1—10月川北医学院附属医院收治的40例NSCLC患者的癌组织及癌旁组织标本,应用免疫组织化学染色对所有标本进行Vasorin和CD34检测,分析Vasorin与NSCLC血管生成[... 目的探讨Vasorin在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义。方法收集2020年1—10月川北医学院附属医院收治的40例NSCLC患者的癌组织及癌旁组织标本,应用免疫组织化学染色对所有标本进行Vasorin和CD34检测,分析Vasorin与NSCLC血管生成[微血管密度(MVD)]之间的关系及临床意义。结果NSCLC组织Vasorin的表达评分和MVD明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤最大径、TNM分期患者Vasorin表达评分比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤最大径、TNM分期、淋巴结转移情况患者MVD比较,差异均有统计学意义(P<0.05),但二者在NSCLC中的表达无相关性(r s=0.246,P>0.05)。结论Vasorin在NSCLC中过表达,与肿瘤最大径、TNM分期关系密切,可能是判断NSCLC分期、预测预后的重要参考指标。但Vasorin与NSCLC血管生成无明显相关性,尚不能作为评估NSCLC血管生成的重要指标。 展开更多
关键词 vasorin CD34 非小细胞肺癌 血管生成 临床特征
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人vasorin蛋白的基因克隆、表达及纯化 被引量:3
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作者 丁红梅 赵强 +8 位作者 王玮 李慧 刘农乐 李洁 苏雪婷 黄皑雪 房涛 李少华 邵宁生 《生物技术通讯》 CAS 2014年第1期38-41,共4页
目的:克隆、表达人vasorin(VASN)蛋白。方法:利用PCR方法从HepG2细胞的cDNA中扩增获得目的基因,并插入带有6×His标签的原核高效可溶性表达载体pET28a中,构建重组表达质粒pET28a-VASN,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG... 目的:克隆、表达人vasorin(VASN)蛋白。方法:利用PCR方法从HepG2细胞的cDNA中扩增获得目的基因,并插入带有6×His标签的原核高效可溶性表达载体pET28a中,构建重组表达质粒pET28a-VASN,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后目的基因获得表达,对融合目的蛋白进行Ni2+金属螯合柱纯化。结果:内切酶鉴定及基因序列测定证实重组表达质粒构建成功;对目的蛋白进行了原核表达,SDS-PAGE显示相对分子质量为61×103的特异表达条带;Western印迹证实目的蛋白为VASN,且主要以包涵体形式存在;对经尿素变性的表达产物进行了亲和层析纯化,有利于以后的变性、复性过程。结论:获得了人VASN融合蛋白,为其进一步的生物学功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 vasorin蛋白 原核表达 纯化
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应用高效电融合技术制备小鼠抗人vasorin(VASN)单克隆抗体 被引量:2
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作者 尹茉莉 聂元旺 +4 位作者 刘浩 张爽 刘磊 李秀春 王会岩 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期265-270,共6页
目的通过电融合法制备肝癌候选标志物人vasorin(VASN)蛋白单克隆抗体并进行鉴定。方法以人带组氨酸标签的VASN重组蛋白(VASN-His)免疫小鼠后进行细胞电融合,间接ELISA筛选能够结合天然VASN的阳性克隆。通过ELISA检测抗体的效价及亲和力... 目的通过电融合法制备肝癌候选标志物人vasorin(VASN)蛋白单克隆抗体并进行鉴定。方法以人带组氨酸标签的VASN重组蛋白(VASN-His)免疫小鼠后进行细胞电融合,间接ELISA筛选能够结合天然VASN的阳性克隆。通过ELISA检测抗体的效价及亲和力、Western blot法检测抗体能否识别HepG2细胞中VASN蛋白。结果在脾细胞与Sp2/0细胞的比例为2∶1,交变电场场强50 V 2 MHz 20 s,直流脉冲强度500 V 0.5 s时,融合率达0.31%。获得2株小鼠抗人VASN单克隆抗体(4H1和8B9),抗体最高效价为1∶256000,亲和力最高可达到4.9×10^(6)L/mol;2株抗体均可识别HepG2细胞的VASN蛋白。结论运用细胞电融合法成功制备2株小鼠抗人VASN的单克隆抗体。 展开更多
关键词 肝细胞癌 vasorin(VASN) 电融合 单克隆抗体
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人vasorin蛋白胞外结构域单克隆抗体的纯化及应用 被引量:2
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作者 王超男 孙乐桥 +9 位作者 沈雪莲 李少华 李洁 丁红梅 李慧 黄皑雪 郭晓华 郑伟 董洁 邵宁生 《生物技术通讯》 CAS 2016年第2期216-218,共3页
目的:纯化人vasorin(VASN)蛋白胞外结构域的单克隆抗体并鉴定。方法:用表达人VASN蛋白胞外结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞免疫小鼠,收集腹水,纯化抗体;ELISA检测单抗的特异性和亲和力,Western印迹、免疫共沉淀、细胞免疫荧光等实验检测... 目的:纯化人vasorin(VASN)蛋白胞外结构域的单克隆抗体并鉴定。方法:用表达人VASN蛋白胞外结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞免疫小鼠,收集腹水,纯化抗体;ELISA检测单抗的特异性和亲和力,Western印迹、免疫共沉淀、细胞免疫荧光等实验检测单抗的特异性与可能的用途。结果:纯化获得2株抗VASN胞外结构域单抗V20和V21,ELISA结果显示二者均特异性强、亲和力高;Western印迹显示2株单抗均可结合Hep G2细胞中的VASN蛋白,以V20为佳;免疫共沉淀实验结果显示V21能够钓取Hep G2细胞中的VASN蛋白及细胞培养上清中的分泌型VASN;免疫荧光实验结果显示V21能与Hep G2细胞的VASN蛋白结合。结论:纯化获得2株抗人VASN胞外结构域单抗,为进一步研究VASN蛋白的生物学功能提供了实验工具。 展开更多
关键词 vasorin蛋白 胞外段结构域 单克隆抗体
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Vasorin蛋白特异单链DNA适配体的筛选与鉴定 被引量:4
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作者 李慧 王玮 +7 位作者 丁红梅 董洁 黄皑雪 罗昭锋 李洁 白琛俊 李少华 邵宁生 《生物技术通讯》 CAS 2018年第4期459-464,共6页
目的:筛选能特异识别vasorin(VASN)蛋白的单链DNA(ss DNA)适配体并对其进行鉴定。方法:利用SPRSELEX技术筛选VASN蛋白特异ss DNA适配体,通过基因克隆测序、MEME在线软件和RNA structure软件分析富集文库序列并挑选出候选适配体序列,利用... 目的:筛选能特异识别vasorin(VASN)蛋白的单链DNA(ss DNA)适配体并对其进行鉴定。方法:利用SPRSELEX技术筛选VASN蛋白特异ss DNA适配体,通过基因克隆测序、MEME在线软件和RNA structure软件分析富集文库序列并挑选出候选适配体序列,利用EMSA、ELISA、流式细胞术对候选适配体进行特异性与亲和力鉴定。结果:经过5轮SELEX筛选,获得了与VASN蛋白特异结合的ss DNA适配体富集文库,合成候选适配体,经EMSA和ELISA检测分析,证实适配体V4-2能与VASN蛋白特异结合,而不与无关对照牛血清白蛋白结合,其平衡解离常数为281.3±103.7 nmol/L;流式细胞术证实V4-2能够特异识别高表达VASN蛋白的Hep G2细胞。结论:筛选获得特异识别VASN蛋白的ss DNA适配体V4-2。 展开更多
关键词 vasorin 指数富集的配基系统进化(SELEX) 适配体 单链DNA
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Vasorin基因稳定敲除HepG2细胞株的建立及其生物学功能研究 被引量:4
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作者 耿介 王超男 +9 位作者 李少华 丁红梅 李慧 黄皑雪 李洁 李达 白琛俊 张坦 董洁 邵宁生 《生物技术通讯》 CAS 2018年第2期162-167,共6页
目的:利用CRISPR/Cas9技术建立人Vasorin(VASN)基因稳定敲除的HepG2细胞株,并研究VASN蛋白对细胞增殖和迁移等生物学功能的影响。方法:根据人VASN序列设计向导RNA,将其克隆至表达载体pCas-Guide,获得质粒pCas-gRNA;PCR扩增VASN编码基因... 目的:利用CRISPR/Cas9技术建立人Vasorin(VASN)基因稳定敲除的HepG2细胞株,并研究VASN蛋白对细胞增殖和迁移等生物学功能的影响。方法:根据人VASN序列设计向导RNA,将其克隆至表达载体pCas-Guide,获得质粒pCas-gRNA;PCR扩增VASN编码基因左、右同源臂及潮霉素B抗性基因,通过重叠PCR将三者拼接为一条片段,并克隆至载体pBackZero-T,获得质粒pBackZero-T-VASN;上述2种重组质粒共转染HepG2细胞,经潮霉素B筛选,通过基因组PCR、RT-q PCR和Western印迹实验检测VASN基因是否被敲除。利用CCK-8法和Transwell法检测VASN稳定敲除细胞株的增殖和迁移能力。结果:向导RNA表达质粒pCas-gRNA和DNA供体质粒pBackZero-T-VASN构建成功;基因组PCR结果显示,潮霉素B基因正确重组至VASN基因中;RT-PCR显示VASN m RNA水平显著降低,Western免疫印迹结果显示VASN蛋白表达水平显著降低;VASN稳定敲除细胞株的增殖和迁移能力比野生型细胞明显减弱。结论:构建了pCas-gRNA和pBackZero-T-VASN质粒,获得了VASN缺失的细胞株,验证了VASN蛋白参与细胞的增殖和迁移过程,为深度探讨VASN的生物学功能及其分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9技术 基因敲除 vasorin(VASN)基因 细胞增殖 细胞迁移
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抗VASN-EGFFN3重组蛋白的单克隆抗体的制备
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作者 莫婉灵 李辉 +6 位作者 廖舟翔 温莎 黄雪静 张起 宋振宇 杨丽超 何敏 《广西医科大学学报》 CAS 2023年第4期690-696,共7页
目的:通过大肠杆菌表达系统表达和纯化VASN-EGFFNN3重组蛋白,免疫小鼠制备抗VASN-EGFFN3单克隆抗体。方法:构建p ET30a(+)-VASN-EGFFNN3重组载体,以大肠杆菌BL21(DE3)为载体表达VASN-EGFFNN3重组蛋白。用镍离子亲和层析柱纯化VASN-EGFF... 目的:通过大肠杆菌表达系统表达和纯化VASN-EGFFNN3重组蛋白,免疫小鼠制备抗VASN-EGFFN3单克隆抗体。方法:构建p ET30a(+)-VASN-EGFFNN3重组载体,以大肠杆菌BL21(DE3)为载体表达VASN-EGFFNN3重组蛋白。用镍离子亲和层析柱纯化VASN-EGFFNN3重组蛋白。利用纯化后的VASN-EGFFN3重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,用杂交瘤技术制备抗VASN-EGFFN3单克隆抗体。结果:成功构建pET30a(+)-VASN-EGFFNN3重组原核表达质粒,诱导的重组VASN-EGFFNN3蛋白主要以包涵体的形式存在。纯化蛋白免疫BALB/c小鼠后获得的血清抗体效价大于1∶2187000,免疫效果良好。利用杂交瘤技术获得2株杂交瘤细胞株。结论:成功利用大肠杆菌表达系统制备并纯化VASN-EGFFNN3重组蛋白,通过杂交瘤技术成功制备小鼠抗VASN-EGFFN3单抗。 展开更多
关键词 VASN 单克隆抗体 重组蛋白
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