农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理研究

该文就农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理进行研究。方法一:分析vpb1基因启动子序列;方法二:对探测载体中vpb1基因启动子的转录活性进行验证;方法三:设计vbpl基因启动子序列突变位点。结果:(1)基于荧光蛋白表达情况来看,在pRSET-A质粒中的vbpl基因启动子能够将荧光基因的表达予以正常启动。(2)能够正确构建pRSET-m1突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着SigmaA结合位点的去除而降低。(3)能够正确构建p RSET-m2突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着转录因子Fnr结合位点中-65位碱基的突变而增强。(4)能够正确构建pRSET-m3突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着转录因子Fnr结合位点中-66位和-68位碱基的突变而消失。结论:深入研究农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理,能够找出影响农杆菌的VBP蛋白表达的相关因素,有可能使所获得的农杆菌菌株具有较高的转化效率,以便能够有效提高植物转基因效率。

根癌农杆菌vbp2基因启动子转录调控的探析

根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)能够将自身质粒上的部分DNA片段(简称T-DNA)以T-复合物的形式转运、整合至宿主基因组,而用作高效的植物转基因工具。vbp2是编码VBP蛋白的3个同源基因之一,VBP蛋白通过与T-复合物上的VirD2结合参与T-DNA的转运过程。根据生物信息学预测,vbp2基因的启动子区可能含有多个转录调控元件。通过同源重组的方法,将A.tumefaciens染色体上的vbp2基因替换成编码红色荧光蛋白的rfp基因,使vbp2的启动子控制rfp的表达,因此,可通过测定所表达的RFP的荧光强度来表征vbp2启动子的活性。结果表明:乙酰丁香酮(AS)和鼠李糖(Rha)均能诱导vbp2启动子表达RFP,AS和Rha的最佳诱导浓度分别为150μmol/L和100μmol/L。通过截短vbp2启动子DNA片段的方法,证明响应AS和Rha诱导的调控区域分别位于上游的165-260 bp和126-165 bp。