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一种新的双元表达质粒pCMV-Myc-IRES-EGFP的构建及其表达
被引量:
10
1
作者
严飞
赵新宇
+1 位作者
邓洪新
魏于全
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第3期423-428,共6页
为了研究基因的特征、理化特性及其功能机制,通常需要构建多个真核表达载体,涉及到多次的引物设计、酶切、连接和鉴定等繁琐的亚克隆过程。构建携带易于多种实验研究的多用或通用载体是基因工程载体的发展方向。为此,利用pIRES载体为骨...
为了研究基因的特征、理化特性及其功能机制,通常需要构建多个真核表达载体,涉及到多次的引物设计、酶切、连接和鉴定等繁琐的亚克隆过程。构建携带易于多种实验研究的多用或通用载体是基因工程载体的发展方向。为此,利用pIRES载体为骨架质粒,在A和B多克隆位点上分别插入c-Myc标签蛋白序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列,从而构建了一个包含c-Myc标签蛋白序列并携带有核糖体结合位点(IRES)介导的增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pCMV-Myc-IRES-EGFP。通过荧光检测和免疫印迹实验证实该载体能在哺乳细胞中表达。该载体可用于监测细胞的转染效率、分选稳定表达的阳性细胞群体、体外转录和翻译、检测或纯化目的蛋白以及捕获相关作用蛋白等多种实验研究,为基因功能研究提供了便利。
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关键词
载体构建
绿色荧光蛋白
核糖体结合位点
下载PDF
职称材料
pcDNA3与pIRES1.neo筛选克隆效率的比较
被引量:
6
2
作者
谢庆军
王晓彤
陆应麟
《生物技术通讯》
CAS
2002年第2期115-117,共3页
将绿色荧光蛋白(GFP)报告基因分别插入pIRES1.neo与pcDNA3二真核表达载体,构建pGFP-IRES1.neo和pcDNA3-GFP,转染小鼠B16细胞和人HepG2细胞,经G418筛选出抗性克隆,在倒置荧光显微镜下观察,鉴定共表达克隆数;结果在两个细胞系中,pcDNA3-GF...
将绿色荧光蛋白(GFP)报告基因分别插入pIRES1.neo与pcDNA3二真核表达载体,构建pGFP-IRES1.neo和pcDNA3-GFP,转染小鼠B16细胞和人HepG2细胞,经G418筛选出抗性克隆,在倒置荧光显微镜下观察,鉴定共表达克隆数;结果在两个细胞系中,pcDNA3-GFP共表达率分别为0%和4%,而pIRES1.neo-GFP共表达率为75%和100%,差异非常显著;因此在筛选稳定表达目的基因细胞克隆的实验中,pIRES1.neo是一个较理想的载体。
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关键词
内部核糖体进入位点序列
绿色荧光蛋白
真核表达载体
克隆筛选效率
PCDNA3
pIRES1.neo
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职称材料
题名
一种新的双元表达质粒pCMV-Myc-IRES-EGFP的构建及其表达
被引量:
10
1
作者
严飞
赵新宇
邓洪新
魏于全
机构
四川大学生命科学院
四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室
四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第3期423-428,共6页
基金
国家973基因治疗的应用基础研究项目(No.2004CB51880)。~~
文摘
为了研究基因的特征、理化特性及其功能机制,通常需要构建多个真核表达载体,涉及到多次的引物设计、酶切、连接和鉴定等繁琐的亚克隆过程。构建携带易于多种实验研究的多用或通用载体是基因工程载体的发展方向。为此,利用pIRES载体为骨架质粒,在A和B多克隆位点上分别插入c-Myc标签蛋白序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列,从而构建了一个包含c-Myc标签蛋白序列并携带有核糖体结合位点(IRES)介导的增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pCMV-Myc-IRES-EGFP。通过荧光检测和免疫印迹实验证实该载体能在哺乳细胞中表达。该载体可用于监测细胞的转染效率、分选稳定表达的阳性细胞群体、体外转录和翻译、检测或纯化目的蛋白以及捕获相关作用蛋白等多种实验研究,为基因功能研究提供了便利。
关键词
载体构建
绿色荧光蛋白
核糖体结合位点
Keywords
vector construction
,
enhanced green fluorescent protein
,
internal ribosome entry site
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
pcDNA3与pIRES1.neo筛选克隆效率的比较
被引量:
6
2
作者
谢庆军
王晓彤
陆应麟
机构
军事医学科学院基础医学研究所
出处
《生物技术通讯》
CAS
2002年第2期115-117,共3页
基金
全军十五规划重点项目(01Z024)资助
文摘
将绿色荧光蛋白(GFP)报告基因分别插入pIRES1.neo与pcDNA3二真核表达载体,构建pGFP-IRES1.neo和pcDNA3-GFP,转染小鼠B16细胞和人HepG2细胞,经G418筛选出抗性克隆,在倒置荧光显微镜下观察,鉴定共表达克隆数;结果在两个细胞系中,pcDNA3-GFP共表达率分别为0%和4%,而pIRES1.neo-GFP共表达率为75%和100%,差异非常显著;因此在筛选稳定表达目的基因细胞克隆的实验中,pIRES1.neo是一个较理想的载体。
关键词
内部核糖体进入位点序列
绿色荧光蛋白
真核表达载体
克隆筛选效率
PCDNA3
pIRES1.neo
Keywords
internal
ribosome
entry
site
sequence
green
fluorescence
protein
eukaryotic expressing
vector
clone screening efficiency
分类号
Q781 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一种新的双元表达质粒pCMV-Myc-IRES-EGFP的构建及其表达
严飞
赵新宇
邓洪新
魏于全
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
10
下载PDF
职称材料
2
pcDNA3与pIRES1.neo筛选克隆效率的比较
谢庆军
王晓彤
陆应麟
《生物技术通讯》
CAS
2002
6
下载PDF
职称材料
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