苦瓜McPDS基因克隆及CRISPR/Cas9基因编辑载体构建

以苦瓜八氢番茄红素脱氢酶(phytoene dehydrogenase,PDS)基因为靶标,构建其特异gRNA的CRISPR/Cas9基因编辑载体,以期为建立苦瓜CRISPR/Cas9基因编辑技术体系奠定基础。以苦瓜自交系B07叶片cDNA为模板,同源克隆苦瓜McPDS基因CDS序列。结果表明,McPDS基因CDS序列全长1731 bp,编码576个氨基酸,蛋白质相对分子质量为64.44 kD,理论等电点(PI)为7.09。跨膜结构分析结果表明,该蛋白为亲水性非跨膜蛋白。系统进化树分析结果表明,McPDS与黄瓜、甜瓜等葫芦科植物中的PDS蛋白同源性较高。此外,以McPDS为靶标基因,在5’端筛选2个高特异性靶点,经设计引物,成功构建1个双靶点CRISPR/Cas9基因编辑载体,为苦瓜基因编辑体系的建立奠定了技术基础。

鸭瘟病毒载体疫苗研究进展

疫苗接种是控制疫病的有效方法一,其中病毒载体疫苗以其转染效率高、外源基因表达水平高等优点成为当前疫苗的重要研究方向。鸭瘟病毒基因非常适合作为插入和表达其他病原体的外源抗原基因,并且随着CRISPR/Cas9技术、细菌人工染色体技术、同源重组技术等基因编辑技术的发展,鸭瘟病毒作为最有前途的载体被广泛应用于传染病疫苗研发。经试验验证,基于重组鸭瘟病毒载体的禽细菌病疫苗以及禽流感、鸭病毒性肝炎等多种病毒病疫苗均具有较好的免疫效果和安全性。本文综述了鸭瘟病毒作为疫苗载体的特点、鸭瘟病毒的基因编辑技术和鸭瘟病毒载体疫苗应用研究进展情况,以期为进一步研发鸭瘟病毒载体疫苗提供理论基础,同时也为新发传染病预防提供新策略。

艾美耳球虫的遗传操作:平台建立、应用与展望

艾美耳属球虫是畜牧生产中最常见的寄生虫,引起鸡、兔、羊、牛等养殖动物严重消化系统疾病,影响动物健康和养殖效益。随着分子生物学技术的飞速发展,研究者们先后建立了艾美耳球虫的瞬时转染、稳定筛选和基因编辑等遗传操作平台,实现了艾美耳球虫的基因过表达、基因敲除和基因编辑等操作,极大推进了艾美耳球虫基础生物学和作为新型真核载体疫苗的研究进展,但仍面临一些挑战。本文围绕艾美耳球虫遗传操作平台建立的关键技术、创新性设计、存在的技术瓶颈以及应用前景进行系统梳理和总结,为其他畜禽寄生虫遗传操作平台的构建提供参考,也为球虫病新型防控制剂的研制提供新的思路。

基于哈希和编辑距离算法的SCD双层向量化与变更校验技术

针对智能变电站配置描述(substation configuration description,SCD)文件变更、智能变电站二次设备配置不清晰导致运维工作量剧增的问题,提出基于哈希和编辑距离算法的SCD双层向量化与变更校验技术。首先,考虑文件变更的启动与校验,应用节点元素、校验码与元素属性构建面向SCD文件解析的双层向量模型;其次,利用哈希算法将构建的文本向量模型转化为哈希字符串向量模型;然后,引入编辑距离算法分别计算原始文件与变更文件的双层向量模型相似度,基于第一层相似度比较构成第二层校验启动判据,基于第二层相似度结合回溯路径方法实现变更校验;最后,通过算例分析验证了所提算法的有效性。

p53^(V149F)突变打靶载体及细胞模型的构建

[目的]构建p53基因突变模型,为研究p53基因突变引发肿瘤的发生和进展提供细胞模型资源。[方法]利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,根据p53^(V149F)突变位点的序列,在线设计合成单链向导sgRNA,构建CRISPR打靶载体;将重组载体转染细胞,流式分选阳性细胞群,提取细胞基因组,Sanger测序分析Cas9核酸酶对靶位点的切割情况,构建同源修复模板,通过T7EN1试验进一步检测编辑效率;将重组载体和同源模板通过电转染方法共同转染至成纤维细胞中,通过单克隆挑取、PCR和Sanger测序鉴定挑取含目标突变的细胞株。[结果]成功构建靶向p53基因目标区域的CRISPR/Cas9打靶载体;获得5个含目标突变的克隆点,点突变率为10%,测序结果出现套峰,表明出现基因型多样化;1个细胞克隆的测序结果无杂峰,TA克隆鉴定结果表明:一个等位基因存在p53^(V149F)位点突变,另一个等位基因存在240 bp缺失。[结论]成功构建了含p53^(V149F)的细胞系,并对基因的功能进行了初步验证,为进一步构建两基因同时修饰模型奠定了基础,并为药物筛选提供可用的细胞模型资源,为创制模拟疾病发生的遗传模式和临床表现的小型猪实验动物模型奠定了基础。

mitoTALENs植物线粒体基因编辑载体的构建方法

【目的】mitoTALENs植物线粒体基因编辑技术能够高效地实现线粒体基因的敲除,进而有效实现线粒体基因功能的研究,但mitoTALENs载体构建过程非常的繁琐复杂且目前仍没有较为系统完整的载体构建方法作为参考。为解决这个问题,结合前人已发表的及本实验室摸索出的方法对mitoTALENs载体构建的完整过程进行了详尽描述,为之后利用mitoTALENs技术进行植物线粒体基因功能研究的研究者们提供重要参考。【方法】以水稻线粒体WA352基因作为目的基因,利用其序列特异性区域设计了靶点TAL,首先采用Platinum gate TALEN assembly的两步组装技术分别构建了mitoTALENs的TALEN-left和TALEN-right载体,然后利用multisite LR反应将TALEN-left、TALEN-right及含有其他功能元件的进入载体和目的载体进行反应,生成最终的表达载体。【结果】第一步组装构建10个载体,第二步组装构建2个载体,最后通过multisite LR反应构建1个终表达载体。【结论】详细介绍了mitoTALENs载体的构建过程,为该技术使用者提供重要参考,以促进植物线粒体基因编辑研究领域的发展。

一种高效、实时的矢量数据在线读取、展示和编辑方法

随着互联网及在线地图技术的不断发展,为了提升矢量数据的在线交互性,满足用户实时更新地图数据和可视化表达的需求,提出一种高效、实时的矢量数据在线读取、展示和编辑方法。通过文件分片组装和多线程技术,实现了在线、高效的大文件和多文件读取;基于Geotools和MyBatis-Plus框架实现矢量数据的热更新;通过建立空间索引和生成唯一ID,实现矢量数据的增量更新。实验证明,本方法可在浏览器中高效、实时地完成矢量数据的读取、展示和编辑,并且面对大文件和多文件时也能保持良好的性能。

允许错误的（汉字）字符串快速检索技术

在计算机应用的诸多领域中都会遇到字符串相似检索问题．本文提出了一种技术，它通过应用搜索状态向量及字符一模式匹配向量，将字符串匹配比较转化为简单的整数字位运算，有效地解决了字符／汉字串的相似匹配问题．文中也给出了实现算法并分析了算法的复杂性．

矢量与栅格结合的三维地质模型编辑方法

三维地质模型主要通过剖面构造·自动建模方法要求这些剖面基本平行,并且相邻剖面地质体的差别不能过大·本文针对剖面数据较少且不平行的情形,设计了人机交互的三维地质模型构造方法,利用普通多面体栅格化算法和由MarchingCubes算法得到的光栅矢量化,实现了光栅和矢量模型的相互转换·在保证模型间拓扑正确的基础上,提高了地质模型的编辑效率,并在实践中得到了检验·

基于域名信息的钓鱼URL探测

提出一种基于域名信息的钓鱼URL探测方法。使用编辑距离寻找与已知正常域名相似的域名,根据域名信息提取域名单词最大匹配特征、域名分割特征和URL分割特征,利用上述特征训练分类器,由此判断其他URL是否为钓鱼URL。在真实数据集上的实验结果表明,该方法钓鱼URL正确检测率达94%。

快速构建CRISPR/Cas9基因组靶向编辑系统

CRISPR/Cas9核酸酶作为一种新的基因组靶向编辑技术,已成功应用于多种动植物基因组修饰研究.CRISPR/Cas9作用后的阳性细胞筛选和富集是该技术的关键之一.本研究以鸡EAVHP(endogenous avian retrovirus-HP)基因和MSTN(myostatin)基因为例,从靶位点的选择、表达载体构建、双基因报告载体构建和核酸酶活性验证4个方面,系统研究了CRISPR/Cas9核酸酶技术平台.结果表明,利用寡聚核苷酸直接退火方法,构建表达载体和报告载体的阳性率分别高达100%和89.5%.报告载体的PuroR(puromycin resistant gene)和e GFP(enhanced green fluorescent protein)基因的成功表达表明,构建的CRISPR/Cas9系统能有效切割靶序列,并用于后续阳性克隆的筛选和富集.本方法摒弃了传统分子克隆的PCR扩增和酶切处理目标基因的方法,而是利用寡聚核苷酸直接退火获得含有黏性末端的目标DNA,简化了载体构建过程,低成本且快速获得CRISPR/Cas9基因组靶向编辑系统.

巨桉miR156 CRISPR/Cas9载体构建

通过CRISPR/Cas9系统构建miR156家族中3个基因编辑载体(miR156A、miR156B和miR156C),为研究巨桉miR156家族基因的功能提供借鉴与参考。经聚合酶链式反应(PCR)扩增含靶基因的miR156A-gRNA、miR156B-gRNA和miR156C-gRNA,用BsaI酶切得到线性化的pHDE/Cas9载体后,经重组酶连接得到重组质粒。将重组质粒转化到DH5α感受态细胞,再对重组质粒进行PCR鉴定与测序比对分析。结果表明,利用同源重组的方法构建了带有筛选标记基因mcherry的巨桉miR156家族CRISPR/Cas9载体系统,插入序列无突变,与预期序列高度一致,重组子阳性率为100%。

网络环境与机房环境下电子作业反抄袭策略

校园网络的普及,WiFi热点的覆盖,促使E-learning广泛开展,但随之而来的电子作业抄袭现象引起了教育工作者关注。通过对大量抄袭样本的研究,针对机房环境下的拷贝抄袭,采用信息隐藏技术对原创信息进行加密,利用高嵌入率的水印算法将秘密信息隐藏到电子作业的字符格式之中,达到侦测抄袭嫌疑的目的。而对网络环境下的电子作业抄袭则综合应用向量空间法和编辑距离模型进行相似度检测。该研究在我院计算机基础网络教学平台的电子作业收集、批改系统中发挥了重要作用,得到了有效性验证。

工程图纸的计算机处理与光栅矢量混合编辑

本文介绍了计算机进行工程图纸处理和管理的环境要求及相关的概念，讨论了进行图纸处理的途径及分析了它们之间的优劣，提出对光栅格式的图纸进行光栅矢量混合编辑是目前较好的途径，可以满足大部分情况下图纸再利用和ＣＡＤ设计的要求。

嵌入式林业GIS矢量图形编辑功能的实现

基于长期在多个省区进行林业应用开发的经验积累,结合甘肃省掌上森林资源GIS系统的项目开发实践,探讨了基于PDA(Personal Digital Assistant)的森林资源嵌入式GIS系统矢量图形编辑功能的实现。通过构建适合嵌入式环境的数据模型和优化算法,实现了多点、多线、多面、孤岛、环、带多洞等复杂图形的拓扑处理和图形编辑;提供了图形编辑的UnDo撤销、Redo恢复及自动备份功能。有效解决了嵌入式GIS图形显示编辑的精度、效率以及操作便捷、系统稳定等问题。

光栅图元的交互拾取与矢量图形的光栅化

作为工程图样矢量转换过程中一个十分重要的手段 ,光栅图像与矢量图形的混合编辑技术越来越受到人们的重视 .光栅图元的交互提取和矢量图形的光栅化过程是这一技术的核心 .本文在介绍工程图样矢量转换过程的基础上 。

心血管疾病的基因治疗

基因治疗在先天遗传性以及后天获得性心血管疾病治疗中均具有广阔的发展前景.对心血管疾病致病机理的深入认识和疾病基因组学研究的发展,进一步促进了临床前基因治疗的研究进展.但基因治疗过程中存在的机体细胞免疫反应、外源基因表达水平不足、在体基因转导效率低下等因素都成为基因治疗临床应用转化的瓶颈.近年来,基因导入载体和基因组编辑技术的发展为上述问题的改善和解决提供了新的思路.目前成族规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/Cas9基因组编辑技术已经成功应用于动物模型的在体基因编辑,达到了显著改善血脂指标的疗效.进一步研究体内组织特异和高效的基因导入方式,提高基因编辑的靶向效率和特异性,并建立全面有效的安全评估实验体系,将推动基因治疗向临床应用的转化.针对心血管疾病基因治疗中基因导入载体的研究以及CRISPR/Cas9基因组编辑技术的应用展开讨论.

课件制作的首选——FLASH

Flash制作的多媒体教学课件具有体积小的特点,可边下载边播放,避免了用户长时间的等待。FLASH还可以生成动画,并在课件中加入声音。ActionScripe交互性脚本语言为Flash提供了自定义函数及强大的数学函数、颜色、声音、XML对象的支持,使Flash中的ActionScripe脚本,能够制作高质量的动画效果和互动性强的动态网页。

基于SVG的开放式LBS系统设计与实现

基于SVG适合互联网传输的矢量数据格式 ,讨论了在基于位置的服务 (LBS)系统和移动终端上应用SVG作为GIS数据传输的可行性 ,结合J2ME和J2EE的技术特点 ,设计了一个开放的、可支持多种终端的LBS系统 ,并以掌上电脑作为移动终端 ,实现了该LBS系统。

工程图纸矢量化软件的设计与实现

工程图纸矢量化是把扫描所得到的光栅图像加以处理、分析、识别,并最终转换成矢量图形格式的过程。矢量化研究是图纸复用、自动理解等应用的基础,是目前CAD领域的一个研究热点。文中介绍了所开发的工程图纸矢量化软件的设计思想和实现技术,包括图像处理和图形自动识别算法,以及为了进一步提高矢量化的准确率而采用的光栅图像编辑和矢量图形编辑等人机交互方法。实验结果证明了以上诸多方法的有效性,软件基本上达到了实用水平。