眼镜蛇细胞毒素致昆明小鼠局部皮肤坏死模型的构建

目的通过皮内注射中华眼镜蛇细胞毒素(CTX)建立中华眼镜蛇咬伤皮肤坏死小鼠模型。方法通过凝胶层析+离子层析从中华眼镜蛇粗毒中分离出眼镜蛇细胞毒素(CTX-X)。取30只小鼠随机分为10组:生理盐水组、10μg粗毒组、20μg粗毒组、25μg粗毒组、10μg CTX-X组、20μg CTX-X组、30μg CTX-X组、40μg CTX-X组、50μg CTX-X组、60μg CTX-X组,每组3只。注毒72 h后观察小鼠注射部位皮肤坏死直径及病理变化。结果(1)中华眼镜蛇粗毒通过Sephadex G-50凝胶层析分离获得2个蛋白峰(F1、F2),将CTX-X所在的F2峰经过CM Sepharose TM CL-6B阳离子交换柱色谱分离获得F1、F2、F3、F44个峰,通过小鼠体内实验及SDS-PAGE确定F4峰分离的CTX-X具有活性且达到电泳纯。(2)CTX-X组小鼠的皮内坏死直径随着CTX-X剂量增加而增大,51.21μg CTX-X组的小鼠皮内坏死直径均值达到5 mm。粗毒组小鼠随着皮内注射粗毒剂量的增加,小鼠72 h内的死亡率增高,当皮内注射粗毒剂量<25μg时,注毒72 h后处死并解剖小鼠,注射部位未观察到皮肤坏死情况;当皮内注射粗毒剂量≥25μg时,所有小鼠在注毒后3 h内死亡,且皮内注射部位未见明显坏死。结论应用Sephadex G-50凝胶过滤+CM Sepharose TM CL-6B阳离子交换分离所得的CTX-X,于小鼠背部皮内注射可成功构建中华眼镜蛇CTX-X致局部皮肤坏死的动物模型,该模型稳定性高且具备良好的可复制性。

Therapeutic potential of snake venom in cancer therapy:current perspectives

Many active secretions produced by animals have been employed in the development of new drugs to treat diseases such as hypertension and cancer.Snake venom toxins coutributed significantly to the treatment of many medical conditions.There are many published studies describing and elucidating the anti-cancer potential of snake venom.Cancer therapy is one of the main areas for the use of protein peptides and enzymes originating from animals of different species.Some of these proteins or peptides and enzymes from snake venom when isolated and evaluated may bind specifically to cancer cell membranes,affecting the migration and proliferation of these cells.Some of substances found in the snake venom present a great potential as anti-tumor agent.In this review,we presented the main results of recent years of research involving the active compounds of snake venom that have anticancer activity.

舟山眼镜蛇毒细胞毒素的分离纯化及其体外抗肿瘤活性

目的从眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素 F(CTX F)并鉴定其活性。方法应用凝胶过滤、离子交换柱色谱及疏水柱色谱等方法从舟山眼镜蛇毒中分离纯化CTX F ,以SRB法观察CTX F对体外培养癌细胞的杀伤作用。结果眼镜蛇毒粗毒经凝胶过滤获得 4个蛋白峰 ,将CTX所在第Ⅳ峰用阳离子交换柱色谱获A、B、C、D、E、F和G等7个组分 ,其中E、F和G具CTX活性 ,将F组分再经凝胶过滤和疏水色谱进一步纯化得不含磷酯酶A2 (PLA2 )的CTX纯品 ,暂定名为CTX F ,它对多种癌细胞株有杀伤作用。结论应用凝胶过滤、离子交换和疏水色谱等方法可从眼镜蛇毒中获得不含PLA2 的CTX 。

蛇毒抗肿瘤组分的研究进展

介绍了近几年来蛇毒在抗肿瘤作用方面的最新研究进展。蛇毒抗肿瘤的机制主要有三种 :细胞毒作用、阻断整合素及诱导细胞凋亡。本文概述了近年来从不同种蛇毒中分离获得的具有抗肿瘤活性的组分。

眼镜蛇毒细胞毒素缓释微球瘤内注射对裸鼠人肝癌皮下移植瘤的影响

目的:评价眼镜蛇毒细胞毒素(cytotoxin,CTX)-聚乳酸-羟基乙酸(polylactic-co-glycolic acid,PLGA)微球经皮瘤内注射治疗裸鼠肝癌的安全性和有效性。方法:采用甲基噻唑基四唑法检测分离纯化得到的眼镜蛇毒CTX体外细胞毒活性,复乳-溶剂挥发法制备眼镜蛇毒CTX-PLGA缓释做球。40只BALB/c裸小鼠皮下接种人肝癌细胞系BEL-7404细胞建立裸鼠皮下移植瘤肝癌模型,分为生理盐水组、空白微球组、游离CTX组和CTX-PLGA微球组。瘤内注射相应药物,治疗后每周用高频超声观察肿瘤内部回声和血流情况;治疗后第26天,剥离肿瘤称取质量并计算抑瘤率;取肿瘤组织和心、肝、肾等重要脏器,观察其病理学改变。结果:眼镜蛇毒CTX对体外培养的人肝癌:BEL-7404细胞具有较强的毒性作用。眼镜蛇毒CTX-PLGA缓释微球粒径约(34.45±9.85)μm,具有较高的包封率和较好的缓释效果。瘤体内一次性注射眼镜蛇毒CTX-PLGA微球后,肿瘤体积增长缓慢,抑瘤率达52.36%;光学显徽镜观察显示肿瘤组织大部分坏死,但心、肝、肾等重要脏器在形态学上无明显改变。结论:眼镜蛇毒CTX-PLGA微球瘤内注射可抑制裸鼠肝癌的生长,且具有较高的安全性。

舟山眼镜蛇毒细胞毒素-F的体内抗肿瘤作用

目的 观察舟山眼镜蛇毒细胞毒素 - F(CTX- F)对小鼠肉瘤 180 (S180 )、宫颈癌 U14、艾氏腹水癌(EAC)和 P388白血病的体内抗肿瘤活性。 方法 CTX- F不同剂量腹腔注射 (ip)对 EAC和 P388白血病荷瘤小鼠存活时间、生命延长率的影响 ;CTX- F不同剂量静脉注射对 U 14和 S180荷瘤小鼠瘤块重量的影响 ,并计算抑瘤率。 结果 CTX- F 0 .6和 0 .8m g/ kg实验第 1、3和 5天给药 (ip) ,使艾氏腹水癌荷瘤小鼠存活时间由 10 .0± 2 .0d分别提高到 2 2 .2± 6 .3和 31.3± 9.2 d,生命延长率分别为 12 5 .5 %和 2 13.2 % ;P388小鼠存活时间从 10 .8± 1.9d分别延长到 15 .9± 1.9和 17.6± 2 .3d,生命延长率分别为 4 7.0 3%和 6 3.2 4 %。CTX- F 0 .8和 1.0 m g/ kg静脉注射 ,连续给药 7d,对宫颈癌 U 14抑瘤率分别为 2 6 .6 4 %和 38.87% ;对肉瘤 S180的抑瘤率分别为 31.8%和39.7%。 结论 舟山眼镜蛇毒 CXT-

福建产舟山眼镜蛇毒细胞毒素的快速分离纯化及鉴定

目的 从舟山眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素 (CTX) ,并鉴定其理化性质。 方法 采用 SP- SephadexC- 2 5阳离子交换色谱及 Sephasil Peptide C1 8反相高效液相色谱法从舟山眼镜蛇毒中分离纯化 CTX,SDS- PAGE(Tris- Tricine系统 )鉴定纯度 ,Edman降解法测定 N端氨基酸序列。 结果 粗毒经阳离子交换色谱 ,得到 1 4个蛋白峰 ,其中第 ～ 峰具 CTX活性 ;再分别经反相色谱纯化 ,得到 4个 CTX,总得率为 32 .4 8% ;SDS- PAGE显示为均一蛋白 ,分子量依次为 :7.2 8,7.33,7.2 4和 7.38k D;测定它们 N端 2 0个氨基酸序列。 结论 采用阳离子交换和反相高效液相色谱可快速、高效地从眼镜蛇毒中获得 4个

眼镜蛇毒细胞毒素对人肝癌细胞增殖抑制活性及作用机制的研究

目的研究眼镜蛇毒细胞毒素(CTX)在体外诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡作用及其可能机制。方法不同浓度CTX作用于人肝癌BEL-7404细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测肿瘤细胞增殖情况;TUNEL法和透射电镜观察检测肿瘤细胞凋亡;并对caspase-3、-9活性、细胞色素C分布变化进行检测。结果眼镜蛇毒细胞毒素对人肝癌BEL-7404细胞具有明显的抑制增殖作用,12、24和48 h的IC50分别为2.56、1.94和1.35 mg·L-1,TUNEL法和透射电镜均观察到肿瘤细胞的凋亡;caspase-3,-9酶活性增高,Western blot检测到caspase-3,-9酶的表达增强,线粒体内Cytochrome C表达减少,而细胞质内Cytochrome C表达增强。结论 CTX首先通过线粒体细胞色素C释放到细胞质内,进一步诱导效应性caspase-3,-9酶激活,可能是其诱导人肝癌细胞凋亡而产生抗肿瘤作用的机制之一。

眼镜蛇毒细胞毒素的分离、纯化及其抗癌活性

目的：研究眼镜蛇毒细胞毒素的抗癌活性。方法：应用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ１００和 ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ柱层析，从眼镜蛇毒中分离、纯化细胞毒素组分，用ＭＴＴ法测定该组分对体外培养的人癌细胞的细胞毒性作用。结果：眼镜蛇毒细胞毒素对人癌细胞ＳＧＣ－７９０１、Ｂｅｌ－７４０２、Ｋ５６２和Ｕ９３７的抑制作用呈良好的量效关系，半数抑制浓度分别为 ４．１０、 ２． ０８、 ０． ２９和 ０．１７ μｇ／ｍｌ。结论：眼镜蛇毒细胞毒素对体外培养的人癌细胞有很强的杀伤作用。

舟山眼镜蛇毒细胞毒素-Ⅻ的抗肿瘤作用

目的 了解舟山眼镜蛇毒细胞毒素 - (CTX- )的抗肿瘤作用。 方法 应用磺胺邻二甲氧嘧啶(SRB)法观察不同浓度 CTX- 对人肝癌 Bel74 0 4细胞和人早幼粒白血病 HL - 6 0细胞的生长抑制作用。观察CTX- 0 .4 ,0 .2 ,0 .1mg/ kg腹腔注射对 U 14荷瘤小鼠瘤块质量的影响并计算抑瘤率 ;CTX- 0 .4和 0 .2 m g/kg静脉注射对艾氏腹水癌 (EAC)小鼠腹水形成的影响并计算腹水减少率。 结果 CTX- 可明显抑制人肝癌Bel74 0 4细胞和人早幼粒白血病 HL - 6 0细胞的生长 ,其 IC50 分别为 (1.12± 0 .13)和 (1.6 1± 0 .18)μg/ m L。 CTX- 0 .4 ,0 .2和 0 .1m g/ kg腹腔注射× 10 d,对宫颈癌 U14抑瘤率分别为 30 .5 0 % (P<0 .0 1) ,19.0 2 % (P<0 .0 5 )和12 .0 8% (P>0 .0 5 ) ;CTX- 0 .4和 0 .2 mg/ kg静脉注射× 3d对 EAC小鼠腹水形成减少率分别为 2 5 .5 % (P<0 .0 5 )和 14 .5 % (P>0 .0 5 )。 结论 舟山眼镜蛇毒细胞毒素 - 具有明显的抗肿瘤作用。

眼镜蛇毒细胞毒素对S180荷瘤小鼠抗肿瘤作用的研究

目的:探讨眼镜蛇毒细胞毒素(Cytotoxin,CTX)对S180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用。方法:采用昆明小鼠S180实体瘤模型,通过腹腔注射CTX,观察CTX对S180小鼠的肿瘤重量、亚显微结构、凋亡率和pro-caspase-3表达量的变化。结果:CTX对S180肿瘤细胞的生长表现出明显抑制作用。0.2、0.4、0.8mg/kgCTX剂量组的抑瘤率分别为23.8%、54.1%、63.2%;透射电子显微镜和流式细胞仪检测显示S180肿瘤细胞发生凋亡;免疫印迹结果显示pro-caspase-3蛋白表达降低,提示caspase-3被激活。结论:CTX通过诱导细胞凋亡来抑制S180肿瘤细胞的生长。

眼镜蛇毒细胞毒素在体外对人癌细胞的毒性作用(MTT法)

目的测定眼镜蛇毒细胞毒素（ＣＶ－ＣＴＸ）对人癌细胞株的细胞抑制作用，以期能简便准确地反映其抗癌活性。方法应用溴化二苯四偶氮盐（ＭＴＴ）法测定在ＣＶ－ＣＴＸ作用下体外培养的人胃癌细胞株（ＳＧＣ－７９０１）和人肝癌细胞株（ＳＭＣ）的存活情况和其量效关系。结果（１）ＳＭＣ、ＳＧＣ－７９０１的活细胞数与其分解ＭＴＴ的量成正线性关系。（２）ＣＶ－ＣＴＸ对ＳＭＣ、ＳＧＣ－７９０１癌细胞株的细胞抑制作用呈良好的量效关系，ＩＣ５０分别为２．４５和１．２４μｇ／ｍｌ。结论（１）用ＭＴＴ法测定癌细胞的增殖和衰减是可靠的。（２）应用ＭＴＴ法证实ＣＶ－ＣＴＸ对体外培养的人癌细胞的杀伤程度可作为其抗癌活性指标。

中国皖南尖吻蝮蛇毒中细胞毒素的分离纯化和抗癌活性研究(英文)

目的 寻找皖南尖吻蝮蛇毒中的抗癌组分并初步研究其性质。方法 以DEAE SepharoseFF ,SOURCE 30S柱层析纯化粗毒 ;以MTT法检测细胞毒活性 ;以SDS PAGE(银染 )测定纯度 ;以还原性及非还原SDS PAGE测定分子量 ;又测定了它们的热稳定性和pH稳定性。结果 得到两个电泳纯的蛇毒类抗癌组分 ,分别命名为ACTX 6和ACTX 8,分子量为 98kDa和 2 7kDa ,都不是糖蛋白 ,其中ACTX 6由两个分子量相近的亚单位以二硫键连接而成 ;它们对肺癌细胞A5 4 9最敏感 ;ACTX 6对热稳定而ACTX 8对热不稳定 ;ACTX 6的稳定pH范围为 7- 9,而ACTX 8在 6 -

眼镜蛇毒细胞毒素CTX-d诱导NB4细胞凋亡及其机制研究

目的探讨眼镜蛇毒细胞毒素CTX-d诱导NB细胞凋亡的机制。方法MTT法测定CTX-d体外细胞毒作用,电镜、流式细胞仪观察CTX-d对NB4细胞的诱导凋亡作用,流式细胞仪检测NB4细胞线粒体膜电位的变化,Western-blotting测定胞浆细胞色素C及caspase-9、caspase-3的变化。结果CTX-d作用NB4细胞6、12h的IC50分别为1.8、1.35μg/mL;CTX-d引起NB4细胞线粒体肿胀、核固缩等形态学改变;诱导NB4细胞出现亚G1期的凋亡峰,且有时效及量效关系;CTX-d(1.0μg/mL)作用0.5h,NB4细胞线粒体膜电位已开始下降,同时在胞浆中检测到细胞色素C,显示细胞色素C已由线粒体释放入胞浆;caspase-9酶原的量在CTX-d(1.0μg/mL)作用1h时开始下降,而活化的caspase-3片断在0.5h即检测到,表明除了通过caspase-9,CTX-d还可能通过其他途径激活caspase-3。结论CTX-d可通过降低线粒体膜电位、细胞色素C释放,激活caspase-9和caspase-3,从而诱导NB4细胞凋亡,还可能通过其他途径激活caspase-3,参与凋亡作用。

舟山眼镜蛇毒细胞毒素-F对人鼻咽癌细胞和乳鼠心肌细胞的抑制作用

目的 观察舟山眼镜蛇毒细胞毒素 - F(CTX- F)对人鼻咽癌细胞 (CNE)和乳鼠心肌细胞的抑制作用 ,了解 CTX- F对人癌细胞株的选择性抑制作用 ,并初步探讨其作用机制。 方法 以磺胺邻二甲氧嘧啶法观察CTX- F0 .6 2 5 ,1 .2 5 ,2 .5 ,5和 1 0 μg/ m L 对体外培养 CNE和乳鼠心肌细胞的杀伤作用及作用的量效关系 ,同时观察 CTX- F作用 0 .5 ,1 ,2 ,4和 8h的时效关系 ,并比较 CTX- F对上述两种细胞作用的差异 ;采用透射电镜观察CTX- F对 CNE细胞形态的影响。 结果 CTX- F在 0 .6 2 5 μg/ m L 作用 0 .5 h时即可抑制 CNE细胞的生长 ,生长抑制率约为 7% ,1 0 μg/ m L 作用 0 .5 h,生长抑制率即可达 70 .3% ,作用存在明显的剂量依赖性 ,其 IC50 (μg/ m L)为1 .5 2。CTX- F作用 0 .5 h对 CNE细胞的 IC50 为 3.83,8h为 1 .5 3,有明显的时效关系。CTX- F乳鼠心肌细胞也有破坏作用 ,但敏感性较低 ,IC50 为 5 .92 ,约为 CNE细胞的 4倍。CNE细胞经 CTX- F(0 .6 2 5 μg/ m L)作用 0 .5 h后 ,电镜下可见到细胞核内染色质边集或固缩成团聚集在细胞的一侧 ,时间延长 ,可见细胞死亡。 结论 舟山眼镜蛇毒CTX- F对 CNE细胞有剂量和时间依赖性杀伤作用 ,其敏感性高于乳鼠心肌细胞。

白眉蝮蛇蛇毒细胞毒素对胃癌细胞的杀伤作用及对细胞超微结构的影响

目的:从白眉蝮蛇蛇毒中提取细胞毒素H1,探讨其对体外培养胃癌细胞的杀伤作用及超微结构的影响。方法:采用DEAE-Sephadex A-50、TSKgel Pheny柱层析从白眉蝮蛇蛇毒中分离纯化出电泳纯细胞毒素H1;采用MTT法检测细胞毒素H1对胃癌细胞用细胞BGC-823的杀伤作用,并用透射电镜观察细胞毒素对癌细胞超微结构的影响。结果:提纯后细胞毒素H1可达到电泳纯,对体外胃癌细胞杀伤力较强,透射电镜观察发现细胞毒素处理癌细胞后其细胞表面微绒毛减少,细胞膜破损,线粒体肿胀并形成空泡,核被膜消失,核浓缩集靠置之脑后呈块状或新月状凋亡小体。结论:从白眉蝮蛇蛇毒中提取的细胞毒素H1可有效地杀伤胃癌细胞。

广西眼镜蛇毒细胞毒素-1对人肝星状细胞LX2的选择性抑制作用

肝纤维化是肝硬化、肝癌和肝功能衰竭的共同病理基础和必经阶段,特征是肝内细胞外基质(extracellular matrix,ECM)过度沉积。肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是合成ECM的关键细胞,因此抑制其增殖并诱导其凋亡是抗肝纤维化的关键[1]。细胞毒素(cytotoxin,CTX)是眼镜蛇毒的主要活性成分,生物活性多样,对多种细胞均具有细胞毒性[2],在抗肿瘤研究中具有广阔的应用前景[3]。

眼镜蛇毒细胞毒素类免疫毒素研究进展

眼镜蛇毒细胞毒素类免疫毒素是将从眼镜蛇毒中分离纯化的细胞毒素与抗体或细胞因子偶联而得到的一类新型导向药物,它以抗体或细胞因子特异识别并结合靶细胞,通过细胞毒素破坏细胞膜而引起细胞死亡。由于细胞毒素类免疫毒素能高效、特异地杀伤靶细胞,因此选择眼镜蛇毒细胞毒素用于肿瘤导向治疗将是一条很有希望的途径。

中华眼镜蛇（Naja naja atra）毒细胞毒素对动物急性及长期毒性研究

目的探讨中华眼镜蛇毒中分离纯化的细胞毒素（ＣｈｉｎｅｓｅＣｏｂｒｏＶｅｎｏｍ－Ｃｙｔｏｔｏｘｉｎ，ＣＶ－ＣＴＸ）对动物急性及长期毒性的作用。方法急性毒性：小鼠５０只，尾静脉一次注入不同剂量的ＣＶ－ＣＴＸ注射液，观察７ｄ内死亡率。犬５只，戊巴比妥钠静脉麻醉后，分别静脉恒速注入不同剂量的ＣＶ－ＣＴＸ，观察５ｈ内血压、心电图及呼吸的变化。长期毒性：大鼠１６０只分别腹腔注射生理盐水２０ｍｌ、ＣＶ－ＣＴＸ２５０，５００，１０００μｇ／ｋｇ·ｄ－１，连续４０ｄ。结果（１）小鼠急性ＬＤ５０及其９５％可信限为１１５８．７（１０７０～１２５４．６）μｇ／ｋｇ，中毒症状呈匍伏、毛松、懒动直到心跳停止，解剖未见重要脏器（心、肺、肝、脾、肾）明显变化。（２）犬静脉恒速注入１００μｇ／ｋｇ间隔１ｈ，共５次，呼吸、血压、心电图未见明显变化，一次超过５００μｇ／ｋｇ，可使心律不齐而停搏，呼吸停止。（３）大鼠长期毒性实验，３个剂量组，连续用药４０ｄ，无一死亡，肝、肾功能及血液生化均无明显影响。病理检查高剂量组部分动物肝脏中度浊肿及水样变性和散在点状坏死，肺有散在性出血；中剂量组肝脏轻度浊肿，偶伴有水样变性，个别动物有小点状坏死，肺有点状出?

白眉蝮蛇蛇毒细胞毒素H1对实验性大鼠胃癌抑制作用的实验研究

目的:从白眉蝮蛇蛇毒中提取细胞毒素H1,观察细胞毒素H1对实验性大鼠胃癌的抑制作用.方法:采用DEAE-Sephadex A-50,TSKgel Pheny柱层析从白眉蝮蛇蛇毒中分离纯化细胞毒素H1.在饮水中添加致癌剂1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG),增溶剂吐温20及维生素D3饲喂Wistar大鼠,并应用高张盐水间歇辅以刺激,制造大鼠胃癌模型,将存活的大鼠胃癌模型随机分为阴性对照组、5-FU阳性对照组、细胞毒素H1给药组,连续注射3wk.结果:细胞毒素H1给药组原位肿瘤体积、瘤质量较5-FU组明显降低,具有统计学意义(P<0.05).结论:细胞毒素H1确有抑制实验性大鼠胃癌生长和转移的作用.