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Molecular targets for vesicular stomatitis virus inactivated by phenothiazine dyes
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《中国输血杂志》 CAS CSCD 2001年第S1期350-,共1页
关键词 Molecular targets for vesicular stomatitis virus inactivated by phenothiazine dyes
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水泡性口炎病毒对体外血管内皮屏障功能的损伤作用及其机制
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作者 曹宇璇 陈为 +6 位作者 孙成彪 赵娜 王燕 董明鑫 许娜 刘文森 李咏梅 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1275-1285,共11页
目的:探讨水泡性口炎病毒(VSV)对血管内皮(VE)屏障的损伤作用,并阐明其作用机制。方法:采用犬肾细胞对VSV进行扩增,采用小鼠脑血管内皮瘤bEnd. 3细胞检测VSV的半数组织培养感染剂量(TCID_(50)),采用300倍TCID_(50)进行后续实验。将bEnd... 目的:探讨水泡性口炎病毒(VSV)对血管内皮(VE)屏障的损伤作用,并阐明其作用机制。方法:采用犬肾细胞对VSV进行扩增,采用小鼠脑血管内皮瘤bEnd. 3细胞检测VSV的半数组织培养感染剂量(TCID_(50)),采用300倍TCID_(50)进行后续实验。将bEnd. 3细胞分为感染0 h组、感染4 h组、感染8 h组和感染12 h组,进行VSV感染损伤VE屏障实验;将bEnd. 3细胞分为对照组、感染组和纠正组,进行抑制VSV复制与VE屏障恢复实验。将bEnd. 3细胞接种于Transwell小室,构建体外VE屏障模型,采用细胞电压电阻仪检测感染VSV不同时间后各组bEnd. 3细胞中跨上皮电阻(TER),采用异硫氰酸荧光素-葡聚糖渗漏实验检测各组渗透系数,采用免疫荧光染色法观察VSV感染后各组bEnd. 3细胞骨架及黏附连接(AJs)中VE-钙黏蛋白、β-连环蛋白(β-catenin)和磷酸化β-连环蛋白(p-β-catenin)定位变化,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中Wnt和β-catenin mRNA表达水平,采用Western blotting法检测各组细胞中Wnt、β-catenin和p-β-catenin表达水平。结果:VSV的TCID_(50)为10^(-4.5)·100μL^(-1)。Transwell小室实验检测,与感染0 h比较,其他各组细胞中TER明显降低(P<0.05),渗透系数明显升高(P<0.05)。免疫荧光染色,与对照组比较,感染组bEnd. 3细胞骨架紊乱,细胞间隙增大,AJs线性指数明显降低(P<0.05),β-catenin和p-β-catenin从细胞膜转移至细胞核周围。RT-qPCR法检测,与感染0 h比较,其他各组细胞中Wnt mRNA表达水平明显降低(P<0.05),β-catenin mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting法检测,与感染0 h比较,其他各组细胞中Wnt蛋白表达水平明显降低(P<0.05),β-catenin表达水平差异无统计学意义(P>0.05),p-β-catenin表达水平明显升高(P<0.05)。在抑制VSV复制并纠正低密度脂蛋白受体(LDLR)异常后,Transwell小室实验检测,与感染组比较,纠正组bEnd. 3细胞中TER明显升高(P<0.05),渗透系数明显降低(P<0.05)。免疫荧光染色,与感染组比较,纠正组细胞间隙减小,细胞中β-catenin和p-β-catenin核周聚集现象有所改善。RT-qPCR法检测,与感染组比较,纠正组细胞中Wnt mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与感染组比较,纠正组细胞中Wnt蛋白表达水平明显升高(P<0.05),β-catenin表达水平差异无统计学意义(P>0.05),p-β-catenin表达水平明显降低(P<0.05)。结论:VSV感染后可引起LDLR失活,降低Wnt蛋白表达水平,造成β-catenin磷酸化水平升高并发生内化,破坏AJs稳定性,最终导致VE屏障损伤。 展开更多
关键词 水泡性口炎病毒 血管内皮屏障 黏附连接 低密度脂蛋白受体 Wnt/β-连环蛋白信号通路
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二重RT-PCR同时检测VSV与BVDV核酸 被引量:5
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作者 杨桂梅 徐自忠 +3 位作者 高洪 花群义 周晓黎 杨昌焰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期291-293,共3页
水泡性口炎病毒 (VSV)与牛病毒性腹泻病毒 (BVDV)具有相近的传播途径与类似的检测方法 ,本文参照文献报道的基因序列 ,设计合成了两对能分别扩增VSV( 2 0 2bp)、BVDV( 3 41bp)基因片段的引物 ,并对PCR扩增条件进行优化 ,建立了二重RT_PC... 水泡性口炎病毒 (VSV)与牛病毒性腹泻病毒 (BVDV)具有相近的传播途径与类似的检测方法 ,本文参照文献报道的基因序列 ,设计合成了两对能分别扩增VSV( 2 0 2bp)、BVDV( 3 41bp)基因片段的引物 ,并对PCR扩增条件进行优化 ,建立了二重RT_PCR方法 ,可同时检测VSV与BVDV病毒核酸。VSV产物经测序显示与报道的核酸序列同源性为88 6%。二重RT_PCR同时检测VSV与BVDV经济、快速、敏感、特异 ,可用于实验研究和流行病学调查。 展开更多
关键词 二重聚合酶链反应 水泡性口炎病毒 牛病毒性腹泻病毒
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热休克蛋白27对水泡性口炎病毒体外增殖的调控作用
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作者 李殿玉 莫荣纤 +6 位作者 赵旭 高铭 李洪珊 白辉盛 马瑞仙 李向茸 冯若飞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2540-2549,共10页
本研究旨在探究热休克蛋白27(heat shock protein 27, HSP27)对水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus, VSV)体外增殖及VSV感染介导的维甲酸诱导基因I样受体家族(retinoid acid-inducible gene-I-like receptor, RLR)信号通路的作... 本研究旨在探究热休克蛋白27(heat shock protein 27, HSP27)对水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus, VSV)体外增殖及VSV感染介导的维甲酸诱导基因I样受体家族(retinoid acid-inducible gene-I-like receptor, RLR)信号通路的作用及机制。利用实时荧光定量PCR、免疫印迹、免疫共沉淀、病毒滴度测定及免疫荧光等方法,首先检测VSV感染对HSP27 mRNA和蛋白表达的影响,进而验证过表达和干扰HSP27对VSV增殖的影响,进一步探究HSP27对VSV感染介导的RLR信号通路的影响,最后分析HSP27与RLR信号通路靶分子的相互作用及共定位情况。结果表明,VSV感染可促使HSP27基因转录和蛋白表达上调,稳定过表达和瞬时过表达HSP27均能显著抑制VSV的体外增殖;干扰宿主细胞中HSP27表达可促进VSV增殖。HSP27能够增强VSV及维甲酸诱导基因I蛋白(retinoic acid-inducible gene I protein, RIG-I)介导的IFN-β的产生及RIG-I的蛋白表达,而且HSP27与RIG-I相互作用并共定位于细胞质中。本研究揭示了HSP27靶向RIG-I上调其表达,增强RLR信号通路的转导,进而负调控VSV体外增殖,为深入揭示宿主因子HSP27在病毒感染中的作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 热休克蛋白27 水泡性口炎病毒 RLR信号通路 维甲酸诱导基因I蛋白
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含GFP基因的逆转录病毒与VSV-G蛋白重组形成高滴度假病毒 被引量:3
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作者 陈瑾君 刘伟 +4 位作者 刘德莉 陆峻泓 李卿 崔磊 曹谊林 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第4期315-318,共4页
目的 通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重组,提高含绿色荧光蛋白(GFP)基因逆转录病毒的感染效率,并使其经受超速离心以达到进一步浓缩。方法 应用GFP-RV质粒转染PT67细胞并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清... 目的 通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重组,提高含绿色荧光蛋白(GFP)基因逆转录病毒的感染效率,并使其经受超速离心以达到进一步浓缩。方法 应用GFP-RV质粒转染PT67细胞并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清液再转染GP2-293细胞,在G418筛选的同时,瞬时转染VSV-G基因。收集该GP2-293细胞产生的重组病毒作滴度测定,并通过低温超速离心制成含GFP病毒的浓缩液,再感染NIH3T3细胞,观察GFP在NIH3T3细胞内的表达情况。结果 GFP-RV质粒转染PT67细胞产生的GFP阳性克隆,随着细胞传代过程,GFP的表达逐渐减弱。GP2-293细胞转染VSV-G基因后可产生(7.5±1.4)×105cfu/mL的GFP重组假病毒,将其浓缩液转染NIH3T3细胞,可见GFP在细胞内有较强的表达。结论逆转录病毒与VSV-G共转染GP2-293包装细胞可以形成高滴度的假病毒,由此得到含GFP基因的病毒上清液,其在组织工程中应用范围更广泛。 展开更多
关键词 GFP基因 逆转录病毒 假病毒 疱疹性口腔炎病毒 基因转染 克隆 组织工程
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水疱性口炎病毒对小鼠乳腺癌4T1细胞荷瘤小鼠抗肿瘤免疫、移植瘤生长与肺转移的影响
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作者 李玉迁 徐庆胜 +4 位作者 魏洪 王皞 王硕石 蒋立娜 袁心怡 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期452-461,共10页
目的:探究野生型水疱性口炎病毒印第安纳株(VSV-IN)对小鼠三阴性乳腺癌4T1细胞移植模型小鼠的免疫调节及肿瘤转移的影响。方法:VSV以MOI=1、MOI=10、MOI=100感染4T1细胞12、24、48 h后,CCK-8法检测4T1细胞死亡率,划痕愈合实验检测细胞... 目的:探究野生型水疱性口炎病毒印第安纳株(VSV-IN)对小鼠三阴性乳腺癌4T1细胞移植模型小鼠的免疫调节及肿瘤转移的影响。方法:VSV以MOI=1、MOI=10、MOI=100感染4T1细胞12、24、48 h后,CCK-8法检测4T1细胞死亡率,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,qPCR检测细胞中E-cadherin、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达。于雌性BALB/c小鼠脂肪垫接种1×10^(6)个/mL的4T1细胞0.1 mL,构建4T1细胞荷瘤小鼠模型,待小鼠肿瘤体积达200 mm3,分别向移植瘤内注射PBS、紫杉醇(TAX)(15 mg/kg)、VSV-IN(1×10^(6)pfu/只),每周1次。给药4次后,处死小鼠、剥离完整移植瘤组织,测量肿瘤体积及质量,肺组织病理切片经H-E染色后观察肿瘤肺部转移结节,流式细胞术检测脾组织中T细胞亚群比例,ELISA法检测小鼠血清IL-6及TNF-α水平,利用GEPIA在线分析乳腺肿中迁移相关蛋白mRNA的表达,免疫组化法检测肿瘤中MMP-2、MMP-9与E-cadherin的表达,利用蛋白-蛋白对接技术预测VSV-IN的G蛋白、M蛋白与ERK2、E-cadherin的亲和力。结果:经MOI=10、100的VSV-IN处理48 h后,4T1细胞死亡率显著高于对照组(均P<0.01);与对照组相比,VSV-IN组(MOI=10)细胞迁移率明显降低(P<0.01),MMP-9 mRNA的相对表达量明显降低(P<0.05);与对照组小鼠相比,VSV-IN组移植瘤生长较对照组减缓且终点体积显著减小(P<0.05),VSV-IN组小鼠肺转移结节数量显著减少[(12.86±1.86)vs(24±3.67)个,P<0.01],脾内CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞比例显著升高(均P<0.05),血清TNF-α、IL-6含量显著升高(均P<0.01);GEPIA分析发现在乳腺癌中E-cadherin、MMP-9表达水平均高于癌旁组织(P<0.05);VSV-IN组小鼠肿瘤细胞内MMP-9表达明显低于对照组(P<0.05);VSV-IN的G、M蛋白与ERK2的结合自由能分别为–11.7 kcal/mol、–6.4 kcal/mol。结论:野生型VSV-IN可抑制4T1细胞荷瘤小鼠的移植瘤生长及转移,这可能与其促进抗肿瘤免疫及调控迁移相关蛋白表达有关。 展开更多
关键词 野生型水疱性口炎病毒 三阴性乳腺癌 4T1细胞 迁移 蛋白-蛋白对接
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细胞外基质蛋白ABI3BP抗水疱性口炎病毒初步作用研究
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作者 孟祥博 陈美桦 +5 位作者 许诺 李天琪 李帅臣 周孙欣 陈欢 张彤 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2024年第1期1-8,I0001,共9页
目的探讨细胞外基质蛋白ABI3BP对水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)基因组复制和先天免疫信号通路的影响。方法在人皮肤成纤维细胞BJ-5ta中转染小干扰RNA(siRNA)敲低ABI3BP基因,建立ABI3BP基因缺失的VSV-GFP病毒感染细胞... 目的探讨细胞外基质蛋白ABI3BP对水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)基因组复制和先天免疫信号通路的影响。方法在人皮肤成纤维细胞BJ-5ta中转染小干扰RNA(siRNA)敲低ABI3BP基因,建立ABI3BP基因缺失的VSV-GFP病毒感染细胞模型。通过鬼笔环肽细胞免疫荧光实验,检测敲低ABI3BP后细胞内肌动蛋白(F-actin)形态结构的变化。在ABI3BP基因缺失的VSV-GFP病毒感染细胞模型上,利用RT-qPCR方法检测细胞中病毒mRNA水平的变化。利用免疫印迹法(Western blotting)检测IRF3和TBK1磷酸化水平的变化。结果成功建立敲减ABI3BP基因的VSV-GFP感染的细胞模型。鬼笔环肽细胞免疫荧光染色表明,敲减ABI3BP基因后,细胞内F-actin的表达发生结构重排。采用不同剂量的病毒感染细胞,与对照组相比,ABI3BP敲低细胞中基因拷贝数分别增加2.5~3.5倍(P<0.01)和2.2~4倍(P<0.01),VSV-GFP病毒蛋白表达水平显著上调;在ABI3BP基因敲低的细胞模型上,VSV-GFP病毒感染导致Ⅰ型干扰素免疫通路关键免疫分子p-IRF3和p-TBK1蛋白磷酸化水平明显下调。结论本研究表明细胞外基质蛋白ABI3BP对维持细胞内F-actin纤维网状结构具有重要作用。ABI3BP缺失促进RNA病毒的复制,ABI3BP是I型干扰素通路激活的重要调控分子。 展开更多
关键词 细胞外基质蛋白 肌动蛋白 水疱性口炎病毒 病毒复制
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VSV的RT-PCR快速检测方法的建立 被引量:6
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作者 杨桂梅 徐自忠 《动物科学与动物医学》 2003年第2期23-25,共3页
选取水泡性口炎病毒 N基因序列 ,设计 1对引物 ,建立检测水泡性口炎病毒的 RT- PCR方法。对VSV各毒株进行检测 ,结果均为阳性 ,而对反刍动物病毒性疾病相关病毒进行检测 ,结果均为阴性。结果表明所建立的 RT-
关键词 vsv RT-PCR 水泡性口炎病毒 核酸检测 动物 病毒性传染病
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VSV-G蛋白修饰的GFP逆转录病毒的构建及表达
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作者 陈瑾君 刘伟 +3 位作者 刘德莉 陆峻泓 崔磊 曹谊林 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期798-801,共4页
目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)共转染,使含绿色荧光蛋白(GFP)基因的逆转录病毒经超速离心得以浓缩,进一步提高GFP逆转录病毒的细胞感染效率。方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞,并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的... 目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)共转染,使含绿色荧光蛋白(GFP)基因的逆转录病毒经超速离心得以浓缩,进一步提高GFP逆转录病毒的细胞感染效率。方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞,并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清液再转染GP2-293细胞,在G418筛选的同时,瞬时转染VSV-G基因。收集该GP2-293细胞产生的重组假病毒液,并通过低温超速离心制备含GFP基因假病毒的浓缩液,测定浓缩前后含GFP基因假病毒液滴度,并分别感染NIH 3T3细胞、软骨细胞、成纤维细胞、骨髓基质干细胞等,荧光显微镜下观察GFP在上述细胞内的表达情况,流式细胞仪检测GFP基因的转染阳性表达率。结果GFP-GP2-293细胞转染VSV-G基因后产生的重组假病毒液滴度为7.36×104CFU/mL,浓缩40倍后其滴度可提高至1.82×106CFU/mL。用浓缩前后含GFP基因假病毒液分别转染NIH 3T3细胞,GFP阳性表达率可由44.21%升高至79.80%;转染兔软骨细胞和成纤维细胞、猪骨髓基质干细胞和脂肪干细胞后,均可见GFP阳性表达明显增强。结论逆转录病毒与VSV-G共转染GP2-293包装细胞可以制备出高滴度的假病毒液。浓缩病毒液的高转染率为其在组织工程种子细胞标记方面的广泛应用奠定了基础。 展开更多
关键词 疱疹性口腔炎病毒糖蛋白 绿色荧光蛋白 转染 假病毒 种子细胞
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eEF1A1调控水疱性口炎病毒和单纯疱疹病毒复制的初步研究
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作者 陈美桦 徐含翠 +4 位作者 王林旭 罗洪 齐琦 王勃 段小涛 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第3期170-176,共7页
目的 探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)对水疱性口炎病毒(VSV)和单纯疱疹病毒(HSV-1)复制的影响,以确定一个广谱抗病毒新靶点。方法 在人皮肤成纤维细胞(BJ-5ta)中转染小干扰RNA(sieEF1A1)抑制eEF1A1表达,同时设置阴性对照组,用实时荧... 目的 探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)对水疱性口炎病毒(VSV)和单纯疱疹病毒(HSV-1)复制的影响,以确定一个广谱抗病毒新靶点。方法 在人皮肤成纤维细胞(BJ-5ta)中转染小干扰RNA(sieEF1A1)抑制eEF1A1表达,同时设置阴性对照组,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)与Western印迹法检测转染效率,制备eEF1A1基因沉默的细胞模型。用VSV感染细胞模型,检测细胞内VSV的基因拷贝数和蛋白水平;用HSV-1感染细胞模型,检测细胞内HSV-1的mRNA水平和蛋白水平。用聚胞苷酸[poly(I:C)]或脱氧核糖核酸钠盐(HT-DNA)分别转染细胞模型,RT-qPCR检测干扰素β(IFN-β)、趋化因子10(CXCL10)和干扰素刺激基因56(ISG56)的mRNA水平,Western印迹法检测干扰素调节因子3(IRF3)和TANK结合激酶1(TBK1)蛋白磷酸化水平。结果 与阴性对照组相比,eEF1A1基因沉默组eEF1A1的mRNA水平和蛋白水平显著降低(P<0.01),eEF1A1基因沉默的细胞模型构建成功。与阴性对照组相比,eEF1A1基因沉默组的VSV基因拷贝数下降70%~80%,VSV蛋白水平显著降低(P<0.01);HSV-1的mRNA水平下降50%~60%,HSV蛋白水平显著降低(P<0.01)。poly(I:C)或HT-DNA刺激后,与阴性对照组相比,eEF1A1基因沉默组的IFN-β、ISG56和CXCL10的mRNA水平以及IRF3与TBK1的蛋白磷酸化水平无显著差异。结论 eEF1A1调控VSV和HSV-1病毒复制,提示eEF1A1对RNA病毒和DNA病毒具有潜在的广谱调控作用,且可能不通过胞内核酸识别激活的免疫通路。 展开更多
关键词 真核翻译延伸因子1A1 水疱性口炎病毒 单纯疱疹病毒 病毒复制
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人β防御素3对绿色荧光蛋白标记水疱性口炎病毒复制的作用
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作者 张乙进 安利娟 +2 位作者 罗红 舒莉萍 江滟 《贵州医科大学学报》 CAS 2024年第9期1299-1304,共6页
目的探讨人β防御素-3(HBD3)对绿色荧光蛋白(GFP)-水疱性口炎病毒(VSV)病毒株复制的作用。方法取对数生长期非洲绿猴肾细胞(Vero)分为Control组、1.00感染复数(MOI)组、0.10 MOI及0.01MOI组,Control组为无病毒对照组,后3组Vero细胞用1.0... 目的探讨人β防御素-3(HBD3)对绿色荧光蛋白(GFP)-水疱性口炎病毒(VSV)病毒株复制的作用。方法取对数生长期非洲绿猴肾细胞(Vero)分为Control组、1.00感染复数(MOI)组、0.10 MOI及0.01MOI组,Control组为无病毒对照组,后3组Vero细胞用1.00 MOI、0.10 MOI、0.01MOI VSV-GFP感染,采用噬斑形成实验观察感染第3天时各组Vero细胞存活情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测感染24 h时1.00、0.10及0.01 MOI组Vero细胞内病毒基质蛋白(M)和GFP信使RNA(mRNA)表达;取对数生长期人非小细胞肺癌细胞(A549)分为未处理组、VSV-GFP组及VSV-GFP+HBD3组,采用Imag J软件对各组镜下A549荧光进行相对定量分析,使用RT-PCR检测各组A549细胞内M和GFP mRNA表达。结果随着病毒滴度的增加,Vero细胞内空斑形成数目增多;Vero细胞内M和GFP mRNA表达表现为0.01 MOI组<0.10 MOI组<1.00 MOI组(P<0.05);VSV-GFP+HBD3组A549细胞单位面积内的荧光强度较VSV-GFP组减弱(P<0.05),M和GFP mRNA表达较VSV-GFP组降低(P<0.05)。结论HBD3可抑制VSV-GFP进入细胞后的病毒复制。 展开更多
关键词 水疱性口炎 病毒 感染 病毒复制 抗菌肽 人β防御素-3 抗病毒
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VSV糖蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用的检测
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作者 韩岩岩 宋德光 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期109-114,共6页
构建水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)酵母双杂交诱饵载体,检测其在酵母细胞中的表达和自激活作用,为进一步研究酵母双杂交系统筛选与VSV-G相互作用蛋白奠定基础。通过RT-PCR方法从水泡性口炎病毒(VSV)克隆糖蛋白(G)基因,BamH I和Sal I双酶... 构建水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)酵母双杂交诱饵载体,检测其在酵母细胞中的表达和自激活作用,为进一步研究酵母双杂交系统筛选与VSV-G相互作用蛋白奠定基础。通过RT-PCR方法从水泡性口炎病毒(VSV)克隆糖蛋白(G)基因,BamH I和Sal I双酶切后连接诱饵载体pSos,获得诱饵质粒pSos-VSV-G,经测序鉴定后pSos-VSV-G转化到酵母菌株cdcH25(α),在营养缺陷培养基中观察pSos-VSV-G的自激活作用和毒性作用,同时利用蛋白印迹法分析诱饵蛋白的表达。成功扩增VSV-G基因,并准确克隆入pSos中,诱饵载体pSos-VSV-G成功转化到酵母菌株cdcH25(α)中,经表型筛选检测无自激活作用和毒性作用,蛋白印迹法检测证实pSos-VSV-G在酵母细胞中表达诱饵蛋白。可以利用酵母双杂交系统筛选与VSV-G相互作的蛋白质。 展开更多
关键词 水泡性口炎病毒 糖蛋白 酵母双杂交 诱饵载体
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利用VSV标记具有特定投射的特异类型神经元的精细结构 被引量:1
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作者 文鹏杰 苏鹏 +7 位作者 王浩 胡亮 林坤章 朱续涛 邱宇翔 郑宁 张志建 徐富强 《波谱学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期353-362,共10页
神经元是构成神经系统的基本单位之一,对其精细形态结构的研究是了解神经网络构筑和信息处理方式的基础,然而目前缺乏能够标记具有特定投射特征的特异类型神经元精细结构的有效方法.在糖蛋白基因缺失的水泡性口炎病毒(VSV)毒株基础上突... 神经元是构成神经系统的基本单位之一,对其精细形态结构的研究是了解神经网络构筑和信息处理方式的基础,然而目前缺乏能够标记具有特定投射特征的特异类型神经元精细结构的有效方法.在糖蛋白基因缺失的水泡性口炎病毒(VSV)毒株基础上突变其核蛋白,我们获得了重组病毒VSV-(35)G-NR7A-EGFP,并发现该病毒在一定窗口期内可实现神经元形态的快速高亮度标记;我们进一步在此基础上构建了VSV-(35)G-EnvA-NR7A-EGFP病毒,并基于特定的转基因动物及辅助病毒rAAV-EF1α-Dio-Bfp-Tva,通过控制注射位点,分别实现了有NAc-LH投射特异性的D2R神经元和VTA-NAc投射特异性的多巴胺神经元的标记,展示了一种可用于稀疏、高亮地标记具有特定投射特征的特异类型神经元精细结构的新方法. 展开更多
关键词 稀疏标记 神经元 投射特异性标记 水泡性口炎病毒(vsv)
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HeLa细胞中HCV NS5A的表达对干扰素敏感病毒VSV复制的影响
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作者 廖继佩 薛小平 +4 位作者 尹文 雷迎峰 吕欣 杨敬 徐志凯 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第23期2122-2124,共3页
目的:研究丙型肝炎病毒(HCV)NS5A的表达对水泡性口炎病毒(VSV)复制的影响.方法:将稳定转染的HeLa-NS5A和HeLa-NS5A-ΔISDR细胞在6孔培养板中培养24h后,加入人基因工程α2a型干扰素(rHuIFN-αt2a)至所需浓度.培养24h后加入VSV,继续培养... 目的:研究丙型肝炎病毒(HCV)NS5A的表达对水泡性口炎病毒(VSV)复制的影响.方法:将稳定转染的HeLa-NS5A和HeLa-NS5A-ΔISDR细胞在6孔培养板中培养24h后,加入人基因工程α2a型干扰素(rHuIFN-αt2a)至所需浓度.培养24h后加入VSV,继续培养相应时间.取培养上清液,按10-1稀释,50μL稀释液加入含Vero细胞的24孔培养板中.每孔加入含100 mL/L小牛血清的DMEM-7.5g/L羧甲基纤维素钠(CMC)1 mL.继续培养48 h后移走培养液,结晶紫染色,自来水轻柔洗净,记录噬斑形成单位(PFU).结果:干扰素(IFN)浓度为1×105 U/L,VSV对HeLa-NS5A细胞的致病变作用要比对HeLa-NS5A-ΔISDR细胞的致病作用更明显.在整个IFN浓度处理中,HeLa-NS5A细胞培养液中的病毒滴度是HeLa-NS5A-ΔISDR细胞培养液中的病毒滴度的2~5倍(P<0.05).结论:NS5A能增强IFN敏感病毒的复制,HCVNS5A内的ISDR可能是造成IFN对HCV患者治疗效果的因素. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白5A 干扰素敏感决定区 水泡性口炎病毒 空斑形成
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RT-PCR法观察光化学法损伤VSV核酸的动态变化 被引量:1
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作者 牛华 孙萍 +1 位作者 周锡鹏 许金波 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期5-7,共3页
目的 :了解光化学灭活病毒时 ,VSV核酸的动态变化。方法 :利用来源于VSV核衣壳蛋白基因的一对引物以RT PCR法检测VSV的核酸。结果 :RT PCR最大检测灵敏度为 1 8LgTCID50 ;在VSV光化学灭活过程中 ,RT PCR产物量在 5个灭活时间段上是不同... 目的 :了解光化学灭活病毒时 ,VSV核酸的动态变化。方法 :利用来源于VSV核衣壳蛋白基因的一对引物以RT PCR法检测VSV的核酸。结果 :RT PCR最大检测灵敏度为 1 8LgTCID50 ;在VSV光化学灭活过程中 ,RT PCR产物量在 5个灭活时间段上是不同的 ,随灭活时间的延长而减少。结论 :光化学法对VSV核酸损伤程度随病毒灭活时间的延长而增大。 展开更多
关键词 水疱性 口膜炎病毒 光/亚甲基兰 病毒灭活
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Mx1基因表达对VSV溶瘤敏感性的影响
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作者 刘林 丁立伟 +1 位作者 严专 郭秉楠 《徐州医学院学报》 CAS 2016年第12期779-783,共5页
目的研究3种小鼠肿瘤细胞系鼠黏病毒蛋白1(Mx1)基因表达对水泡性口膜炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)溶瘤效应的敏感性。方法将本实验室定量后的VSV保种并用来攻击3种不同种类的肿瘤细胞系:RAW264.7(小鼠巨噬细胞白血... 目的研究3种小鼠肿瘤细胞系鼠黏病毒蛋白1(Mx1)基因表达对水泡性口膜炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)溶瘤效应的敏感性。方法将本实验室定量后的VSV保种并用来攻击3种不同种类的肿瘤细胞系:RAW264.7(小鼠巨噬细胞白血病)、B16(黑色素瘤)、HEPA1—6(小鼠肝癌)细胞系,48h后通过TCID,。法和MTI"法检测3种肿瘤细胞系对VSV的敏感性。RT—PCR检测VSV感染3种肿瘤细胞系24h后Mx1基因的诱导表达水平,证实肿瘤细胞系的溶瘤敏感性与Mx1基因表达的关系;应用RNAi技术抑制Mx1基因的表达水平,MTT法检测RAW264.7细胞系(最不敏感细胞系)与B16细胞系(最敏感细胞系)溶瘤效果的改变。结果用VSV攻击3种肿瘤细胞系呈现出的敏感性依次为B16〉HEPA1—6〉RAW264.7。通过RT—PCR检测VSV感染3种鼠源肿瘤细胞系Mx1基因的表达水平表明:Mx1基因的表达水平越高,VSV对肿瘤细胞的溶瘤敏感性越低。应用RNAi技术抑制RAW264.7细胞系(最不敏感细胞系)Mx1基因的表达,VSV对该细胞系溶瘤敏感性提高了35%,抑制B16细胞系(最敏感细胞系)Mx1基因的表达,VSV对该细胞系溶瘤的敏感性提高了30%。结论通过RNAi抑制鼠源肿瘤细胞系抗病毒蛋白Mx1基因的表达水平,可促进VSV溶瘤的敏感性。 展开更多
关键词 鼠黏病毒蛋白1 水泡性口膜炎病毒 溶瘤 RNA干扰
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γ-氨基丁酸促进水疱性口炎病毒感染小鼠巨噬细胞
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作者 赵璐 刘洋 《基础医学与临床》 2023年第6期936-940,共5页
目的探究代谢物γ-氨基丁酸(GABA)对病毒感染RAW264.7细胞系和小鼠原代腹腔巨噬细胞的影响。方法用0、10、30、50和70 mmol/L GABA或PBS处理RAW264.7细胞系10 h,CCK-8法检测细胞活性,用此剂量GABA预处理RAW264.7细胞系,2 h后用表达绿色... 目的探究代谢物γ-氨基丁酸(GABA)对病毒感染RAW264.7细胞系和小鼠原代腹腔巨噬细胞的影响。方法用0、10、30、50和70 mmol/L GABA或PBS处理RAW264.7细胞系10 h,CCK-8法检测细胞活性,用此剂量GABA预处理RAW264.7细胞系,2 h后用表达绿色荧光蛋白的重组水疱性口炎病毒(GFP-VSV)或VSV感染8 h,荧光显微镜观察细胞内GFP-VSV的含量;流式细胞术检测细胞内GFP-VSV的水平;RT-qPCR检测VSV RNA及细胞因子Ifnb1和Il-6的mRNA水平。用0、10、30、50和70 mmol/L GABA预处理小鼠原代腹腔巨噬细胞,2 h后用VSV感染8 h,RT-qPCR检测VSV RNA水平。结果10、30、50和70 mmol/L的GABA对RAW264.7细胞系的活性没有影响,且此剂量的GABA能提高RAW264.7细胞系内GFP-VSV的蛋白水平、VSV RNA水平和细胞因子Ifnb1和Il-6的mRNA水平(P<0.05),也能提高小鼠原代腹腔巨噬细胞内VSV RNA水平(P<0.05),且均呈剂量依赖性。结论代谢物GABA能以剂量依赖的方式促进VSV感染RAW264.7细胞系和小鼠原代腹腔巨噬细胞,同时细胞因子Ifnb1和Il-6的mRNA水平也升高。 展开更多
关键词 病毒感染 巨噬细胞 Γ-氨基丁酸 水疱性口炎病毒
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A Vesicular Stomatitis Virus-Based Vaccine Carrying Zika Virus Capsid Protein Protects Mice from Viral Infection 被引量:3
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作者 Xiaodan Shi Jingping Hu +3 位作者 Jing Guo Chuanjian Wu Sidong Xiong Chunsheng Dong 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2019年第1期106-110,共5页
Dear Editor,Zika virus (ZIKV) is a mosquito-borne virus that belongs to the Flavivirus family along with dengue virus (DENV),yellow fever virus, West Nile virus, and Japanese encephalitis virus (Ming et al. 2016). ZIK... Dear Editor,Zika virus (ZIKV) is a mosquito-borne virus that belongs to the Flavivirus family along with dengue virus (DENV),yellow fever virus, West Nile virus, and Japanese encephalitis virus (Ming et al. 2016). ZIKV is a singlestranded positive-sense RNA virus encoding three structural proteins, including nucleocapsid protein C, prM/M,envelope glycoprotein E, and seven non-structural proteins.Since 2015. 展开更多
关键词 vsv A vesicular stomatitis virus-Based VACCINE Carrying Zika virus CAPSID Protein Protects Mice from Viral Infection
原文传递
地高辛和欧夹竹桃苷抑制RNA病毒复制的功能研究
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作者 廖夏琳 梁巍 +1 位作者 陈嘉雯 刘坤鹏 《新医学》 CAS 2023年第5期326-332,共7页
目的研究强心苷类药物地高辛和欧夹竹桃苷的抗病毒能力。方法采用人肺泡腺癌基底上皮细胞(A549细胞)和非洲绿猴肾细胞(vero细胞),利用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8法)确定强心苷类药物地高辛和欧夹竹桃苷的细胞毒性,利用逆转录-实时... 目的研究强心苷类药物地高辛和欧夹竹桃苷的抗病毒能力。方法采用人肺泡腺癌基底上皮细胞(A549细胞)和非洲绿猴肾细胞(vero细胞),利用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8法)确定强心苷类药物地高辛和欧夹竹桃苷的细胞毒性,利用逆转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹法检测地高辛、欧夹竹桃苷对水疱性口炎病毒(VSV)和脑心肌炎病毒(EMCV)以及仙台病毒(SeV)和甲型流感病毒(H1N1)复制的影响。利用天然的IFN信号通路缺陷的vero细胞结合荧光显微技术、RT-qPCR、蛋白免疫印迹法分析地高辛、欧夹竹桃苷抗病毒的作用机制是否依赖IFN信号通路。在敲低钠钾腺苷三磷酸(ATP)酶α1亚基(ATP1A1-shRNA)的vero细胞中,通过RT-qPCR、蛋白免疫印迹法等检测细胞内病毒复制及细胞的抗病毒IFN反应。结果地高辛和欧夹竹桃苷可抑制VSV、H1N1、SeV和EMCV基因表达;结合使用IFN缺陷的vero细胞证明地高辛和欧夹竹桃苷发挥抗病毒作用不依赖于IFN信号通路;在敲低ATP1A1的vero细胞中,地高辛和欧夹竹桃苷不再有明显的抗病毒作用。结论地高辛、欧夹竹桃苷等强心苷类药物具有较广谱的抗病毒能力,主要通过抑制细胞膜内外钠/钾离子转运蛋白发挥抗病毒作用。 展开更多
关键词 地高辛 欧夹竹桃苷 抗病毒 先天免疫 钠钾腺苷三磷酸酶 水疱性口炎病毒 甲型流感病毒 呼吸道病毒 脑心肌炎病毒
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Establishment and application of a surrogate model for human Ebola virus disease in BSL-2 laboratory
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作者 Wanying Yang Wujian Li +9 位作者 Wujie Zhou Shen Wang Weiqi Wang Zhenshan Wang Na Feng Tiecheng Wang Ying Xie Yongkun Zhao Feihu Yan Xianzhu Xia 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2024年第3期434-446,共13页
The Ebola virus(EBOV)is a member of the Orthoebolavirus genus,Filoviridae family,which causes severe hemorrhagic diseases in humans and non-human primates(NHPs),with a case fatality rate of up to 90%.The development o... The Ebola virus(EBOV)is a member of the Orthoebolavirus genus,Filoviridae family,which causes severe hemorrhagic diseases in humans and non-human primates(NHPs),with a case fatality rate of up to 90%.The development of countermeasures against EBOV has been hindered by the lack of ideal animal models,as EBOV requires handling in biosafety level(BSL)-4 facilities.Therefore,accessible and convenient animal models are urgently needed to promote prophylactic and therapeutic approaches against EBOV.In this study,a recombinant vesicular stomatitis virus expressing Ebola virus glycoprotein(VSV-EBOV/GP)was constructed and applied as a surrogate virus,establishing a lethal infection in hamsters.Following infection with VSV-EBOV/GP,3-week-old female Syrian hamsters exhibited disease signs such as weight loss,multi-organ failure,severe uveitis,high viral loads,and developed severe systemic diseases similar to those observed in human EBOV patients.All animals succumbed at 2–3 days post-infection(dpi).Histopathological changes indicated that VSV-EBOV/GP targeted liver cells,suggesting that the tissue tropism of VSV-EBOV/GP was comparable to wild-type EBOV(WT EBOV).Notably,the pathogenicity of the VSV-EBOV/GP was found to be species-specific,age-related,gender-associated,and challenge route-dependent.Subsequently,equine anti-EBOV immunoglobulins and a subunit vaccine were validated using this model.Overall,this surrogate model represents a safe,effective,and economical tool for rapid preclinical evaluation of medical countermeasures against EBOV under BSL-2 conditions,which would accelerate technological advances and breakthroughs in confronting Ebola virus disease. 展开更多
关键词 Ebola virus(EBOV) Recombinant vesicular stomatitis virus PATHOGENICITY Syrian hamster Surrogate models Vaccine evaluation and drug screening
原文传递
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