肾透明细胞癌VHL基因突变与CyclinD1过度表达的相关性

背景与目的:VHL基因突变与肾透明细胞癌发生关系密切,而CyclinD1基因通过促进细胞过度增殖,对肾透明细胞癌发生和发展起重要作用。本研究拟初步探讨肾透明细胞癌中VHL基因突变的状况及其与CyclinD1表达上升的相关性。方法:取50例肾透明细胞癌手术标本,抽提病变组织和癌周正常组织中的基因组DNA和总RNA。通过PCR扩增VHL基因各外显子序列并测序以及内切酶鉴定的方法,确定肿瘤组织中VHL基因突变的比率和具体位点。通过RT-PCR和Westernblot方法,检测相应肿瘤组织中CyclinD1的表达水平是否发生改变。结果:VHL基因序列检测结果表明,有42例(84.0%)肾透明细胞癌标本的VHL基因发生各种形式的突变,有12(24.0%)例甚至发生2种以上的基因突变。在57例VHL基因外显子突变中,1号外显子突变有17例(29.8%);2号外显子突变有26例(45.6%);3号外显子突变有14例(24.6%)。CyclinD1的表达水平在42例VHL基因发生突变的组织中均有不同程度的上升,达到正常对照组的2～10倍(3.91±1.54倍)(P<0.01),另8例表现为正常。结论:在肾透明细胞癌中存在各种VHL基因突变,导致CyclinD1过度表达。

血细胞VHL基因拷贝数变化与高原红细胞增多症易感相关性研究

目的探讨血细胞的VHL(Von Hippel-Lindau)基因拷贝数变化与高原红细胞增多症的易感性关系。方法分别取年龄、职业等相匹配的高原红细胞增多症患者(n=20)、健康对照组(n=20)的静脉血2 ml/人,提取DNA,通过定量PCR方法(染料法)检测血细胞的VHL基因的相对拷贝数。结果高原红细胞增多症病例组的VHL基因拷贝数显著低于对照组(P<0.05)。结论高原红细胞增多症患者的VHL基因的拷贝数较低,与高原红细胞增多症的发病相关。

3个VHL综合征家族的基因检测及临床调查

目的明确von Hippel-Lindau综合征(VHL综合征)家族基因突变及临床表现特点,筛查出家族内基因突变携带者行临床筛查,综合家族发病特点行家族健康指导。方法通过流行病学调查,共3例先证者临床诊断VHL综合征。抽取先证者及家族自愿者外周血,应用聚合酶链反应(PCR)体外扩增得到vhl基因片段,通过测序得到基因信息;再对家族内具有vhl基因突变的携带者进行头颅MRI、腹部B超等对全身多系统行临床筛查;综合家族发病特点给出家族健康指导。结果 3例先证者均发现vhl基因发生突变,家族1中5例成员基因阳性,突变方式为外显子1 c.330C>A;家族2先证者外显子3488del C;家族3发现7例基因阳性者,突变方式为外显子1 c.233G>A。其中,家族成员1III3、3III1、3III4、3IV3确定为基因突变携带者,临床检查显示其中3例成员已发病,1III3表现为双肾多发囊肿,胰腺多发囊肿;3III1表现为胰腺多发囊肿;3III4表现为视网膜血管母细胞瘤、胰腺多发囊肿,视网膜血管母细胞瘤接受激光治疗。3IV3由于年龄较小,临床检查未见明显异常。所有基因携带者接受规范化随访。结论基因检测可早期确诊VHL综合征,临床上对vhl基因突变患者需进行严密随访,从而提高患者治疗效果、延长生存期或改善生活质量。

VHL相关性和散发性中枢神经系统血管母细胞瘤

目的 探讨VHL病相关性和散发性中枢神经系统(CNS)血管母细胞瘤(HB)临床、处理及预后特征。方法 回顾性分析连续20年中我科收治的66例CNS-HB病人资料。对近期病例作了VHL基因突变和VEGF表达检测。结果 66例HB病人中,散发性58例,VHL相关性8例,共79处病变,7例为多发病变。全组62例共施行了70次手术治疗,其中5例进行了多次手术。8例VHL相关病人中有3例多次手术。64次全切,6次大部分切除。大部分切除的病人有4例复发。手术死亡3人。70次手术中手术效果良好者46次,病情改善者18次,稳定者3次。57例平均随访6.7年(1～16年),41例恢复工作,5例生活自理,部分自理和完全不能自理各1例,9例死亡。VEGF基因突变率为75％(18/24),HB中均见VEGF过度表达。结论 CNS-HB病人的手术治疗结果良好,VHL相关病人的远期愈后较差。

VHL慢病毒表达和干扰载体的构建及对肾癌细胞增殖和凋亡的影响

目的构建人VHL重组慢病毒表达载体及干扰载体,建立稳定转染细胞株,观察VHL对肾癌细胞株增殖和凋亡的影响。方法构建p Zs Green1-VHL及p LL3.7-sh VHL重组慢病毒载体,与3质粒包装系统用脂质体法共同转染293T细胞,包装成病毒颗粒,分别感染A498、Caki-1细胞,并进行RT-PCR和Western blot检验细胞中VHL的表达。用MTS法和流式细胞仪检测VHL对肾癌细胞增殖和凋亡效应的影响。结果重组慢病毒载体及稳定转染细胞株构建成功,转染后VHL在细胞中表达明显变化;VHL过表达细胞的增殖速度明显低于各对照组,而凋亡率明显高于各对照组;VHL干扰细胞的增殖速度明显高于各对照组,而凋亡率明显低于各对照组(P<0.05)。结论 VHL对肾癌细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。

内淋巴囊瘤的临床和VHL基因突变分析研究

目的观察内淋巴囊瘤的临床特点、影像学和听力学特征,探讨内淋巴囊瘤的VHL基因突变情况。方法经术后病理确诊、经过我院手术治疗的内淋巴囊瘤病人共4例(2男2女),中位年龄为40.5岁(15～62岁),整理该病例系列临床基本资料,以及影像学和听力学检查结果,进行VHL基因突变检测,术后随访6～35个月。结果三例患者中首发症状1例为患侧面瘫,3例为患侧单侧耳鸣,听力测试提示感音神经性听力下降。颞骨CT表现为内淋巴囊区类圆形膨胀性骨质破坏,局部呈虫蚀样。内耳MR表现为内淋巴囊区混杂T1长T2信号影,边缘呈分叶状,部分其内见液-液平面,病灶不均匀明显强化。病例3还发现肾脏下极占位(病理:肾透明细胞癌),结合内淋巴囊瘤,以及发现VHL第3外显子发生杂合缺失c.620_633del,导致p.Ala207GlyfsX44,最终确诊为von Hipple-Lindau(VHL)病,并给予遗传咨询。结论对临床上单侧耳鸣、听力下降的患者需考虑到内淋巴囊瘤的可能,它独立发生,或合并其他中枢神经系统或内脏病变,是VHL病的一个表现,需要进一步进行VHL基因突变检测和遗传咨询。

VHL综合征遗传学研究

VHL综合征(von Hippel-Lindau syndrome,VHL;MIM 193300)是一种常染色体显性遗传的多系统肿瘤综合征,最常见临床表现是视网膜或中枢神经系统(central nervous system,CNS)血管母细胞瘤.CNS血管母细胞瘤和肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)的并发症是VHL患者最主要的死因.VHL综合征主要因VHL基因(the vonHipple-Lindau gene,VHL)突变所致,细胞周期素D1基因(the cyclin D1 gene,CCND1)突变和蛋白异常也可能参与其发生.目前已建立了多个VHL基因缺陷动物模型.在此就VHL综合征的遗传学研究进展作一概述.

VHL基因研究与中枢神经系统血管网状细胞瘤

希佩尔-林道病(Von Hippel-Lindau,VHL)是一种常染色体显性遗传病,以发生中枢神经系统和其他内脏器官多系统肿瘤为特征。VHL基因是重要的肿瘤抑制基因,VHL基因突变导致VHL蛋白及pVHL-ElonginC-Elongin B-Cul2复合物形成障碍,引起形成富血管肿瘤重要步骤的缺氧诱导因子功能障碍,导致肿瘤发生。发生中枢神经系统血管网状细胞瘤是VHL病中的常见事件。

散发内淋巴囊瘤VHL基因位点微卫星标志杂合性丢失的研究

目的 探讨散发内淋巴囊瘤发病与VHL基因异常之间的关系。方法 采用组织微切割技术和多聚酶链式反应等方法对3例散发内淋巴囊瘤肿瘤细胞VHL基因位点染色体微卫星标志的杂合性丢失进行分析。结果 3例散发内淋巴囊瘤中有2例发生VHL基因位点微卫星标志的杂合性丢失,进一步的研究证实,该两例肿瘤细胞中分别存在着VHL基因第二外显子的异常。结论 VHL基因的异常导致其功能改变不但是VHL的致病原因,而且是散发性内淋巴囊瘤发病的重要的基因遗传学基础。

血管网织细胞瘤中VHL基因突变与异常甲基化检测

目的 :了解血管网织细胞瘤中VHL基因的突变与异常甲基化。方法 :采用PCR SSCP法检测血管网织细胞瘤中VHL基因的突变率及甲基化 ,敏感限制性内切酶消化法检测血管网织细胞瘤中VHL基因的异常甲基化率。结果 :34例血管网织细胞瘤标本中 ,VHL基因突变率为 6 4 7% ,VHL基因异常甲基化率为 2 3.5 % ,2例同时存在突变与异常甲基化。结论 :VHL基因突变及异常甲基化导致其失活是血管网织细胞瘤发生中的一个经常性事件。

结直肠癌组织中p53、PTEN和VHL对缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的研究结直肠癌组织中p53、PTEN和VHL对缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α)表达的影响及意义。方法采用组织芯片技术制作60例结直肠癌组织芯片,同时采用SP免疫组织化学法和原位分子杂交(cDNA-mRNA)方法检测结直肠癌组织芯片中p53、PTEN、VHL、HIF-1α和HIF-1αmRNA的表达。结果 60例结直肠癌组织中,p53、PTEN、VHL、HIF-1α和HIF-1αmRNA的阳性率分别为55%、48.3%、41.7%、58.3%和71.7%。淋巴结转移组p53、HIF-1α和HIF-1αmRNA阳性率显著高于无淋巴结转移组(P<0.01)。p53高表达、PTEN和VHL低表达与HIF-1α和HIF-1αmRNA高表达明显相关。结论 p53、PTEN、VHL、HIF-1α和HIF-1αmRNA的表达水平可以作为评估结直肠癌预后的参考指标。

肾细胞癌肿瘤抑制基因VHL的变异多药耐药基因Mdr的表达

目的 探讨人肾细胞癌中的VHL肿瘤抑制基因的变异和Mdr基因的表达水平 ,同肾癌发生发展的关系。方法 采用多聚酶链式反应 (PCR) ,DNA单链多态性分析和DNA测序的方法分析了 4 0例肾细胞癌标本 (其中包括 30例富糖原型 ,6例是嗜染型、3例多形性、1例颗粒型 )。用免疫组织化学法检测了正常肾组织和 35例肾细胞癌组织切片。结果 19 30 ( 63% )的富糖原型肾细胞癌的VHL肿瘤抑制基因发生了变异 ,其中包括 13例缺失、3例插入、2例错译和 1例无义。而在对照组未发现基因变异。而Mdr表达与组织学类型相关 ,且表达量与肿瘤分级有关。结论 富糖原型肾细胞癌可能在分子遗传学水平上与其它类型的肾细胞癌有所区别。

VHL基因新突变致VHL综合征伴脑膜瘤一家系分析

目的:对1例von Hippel-Lindau(VHL)综合征2C型合并右额叶脑膜瘤患者及其家系的临床特征、基因突变进行分析,通过蛋白功能预测和文献复习探讨脑膜瘤与VHL综合征的关系。方法:对患者的临床表型进行分析,应用Sanger测序技术对患者外周血及病理组织切片进行VHL基因全部编码区测序,收集患者家属的临床资料,对突变位点进行验证。结果:患者表现为双侧肾上腺和腹膜后嗜铬细胞瘤、左眼视网膜毛细血管瘤和右额叶脑膜瘤,基因检测发现VHL基因第一外显子存在c.284C>G(p.Pro 95 Arg)错义突变,家系验证显示其临床表型正常的父母和一女均未携带该变异,另一临床表型正常的女儿携带该变异,说明该变异为患者的新生变异。通过错义突变蛋白功能预测软件Polyphen-2和氨基酸多序列对比工具(Clustal W)及蛋白质3D图对该突变进行功能预测显示该突变是功能突变,对VHL的活性具有潜在显著影响,与临床表型关系显著。结论:VHL基因的c.284C>G变异可能是该患者罹患VHL综合征的遗传学病因,导致嗜铬细胞瘤和视网膜毛细血管瘤的发生。

一例双侧肾透明细胞癌患者与家系成员VHL基因的胚系突变分析

目的对一例家族性双侧肾透明细胞癌患者家系VHL基因的胚系突变进行分析,结合其临床特点探讨可能的分子遗传学发病机制。方法收集病人家族史、影像学、入院诊疗和随访资料,提取患者及家系直系成员外周血DNA和RNA,采用PCR-DNA测序、荧光定量PCR,RT-PCR片段长度和序列分析等方法进行VHL基因病理性胚系突变位点的筛查和验证。结果PCR-DNA测序分析结果显示在这家系成员中均没有发现VHL基因编码区的点突变;VHL基因外显子拷贝数的定量分析数据显示VHL基因外显子2拷贝数减少;RT-PCR产物电泳和测序结果表明先证者与其兄二人存在VHL基因第2外显子杂合性缺失所致的病理性胚系突变。结论家族性肾细胞癌家系中VHL基因的胚系突变筛查可作为一种有效的手段预测患者的预后,并可指导临床。

多鳞鱚vhl基因克隆及其低氧胁迫下的表达变化

【目的】克隆多鳞鱚林岛综合征基因(vhl)并分析其在低氧胁迫下的表达变化,为揭示多鳞鱚应对低氧的适应机制提供研究资料,也为今后开展多鳞鱚新品种选育提供候选基因。【方法】采用PCR克隆多鳞鱚vhl基因c DNA全长序列,利用EditSeq、SMART、Signal IP 4.1及ClustalX等在线软件进行生物信息学分析;并以半定量PCR检测多鳞鱚vhl基因在不同组织中的表达情况,采用实时荧光定量PCR分析低氧胁迫对多鳞鱚vhl基因在鳃组织和心脏中表达的影响。【结果】多鳞鱚vhl基因cDNA序列全长727 bp,包括120 bp的5’端非编码区(5’-TUR)、106 bp的3’端非编码区(3’-TUR)和504 bp的开放阅读框(ORF),共编码167个氨基酸残基,编码蛋白存在4个结构域,即Pfam:VHL(第12~93位氨基酸)、Pfam:VHL_C(第5~22、31~39和98~153位氨基酸)、ParB结构域(第100~162位氨基酸)和SOCS_box结构域(第104~140位氨基酸)。多鳞鱚vhl氨基酸序列与盲曹鱼vhl氨基酸序列的同源性最高(81%),但系统发育进化分析结果显示多鳞鱚与攀鲈的亲缘关系最近。多鳞鱚vhl基因在不同组织中均有表达,其中以鳃组织、卵巢和精巢的表达量较高,其次是心脏和肝脏,在肌肉和脑组织的表达量较低。经低氧胁迫后,多鳞鱚vhl基因在鳃组织中的相对表达量显著上调(P<0.05,下同);在心脏中表现为随低氧胁迫时间的延长显著上调,恢复氧气4 h后vhl基因的相对表达量虽然呈显著下调趋势,但仍显著高于正常水平。【结论】多鳞鱚vhl基因编码蛋白存在Pfam:VHL、Pfam:VHL_C、ParB和SOCS_box等4个结构域,且低氧胁迫前后其表达量存在显著差异,即多鳞鱚vhl基因在低氧应答信号通路中扮演着重要角色。

VHL基因的研究进展及其在肾癌基因治疗中的应用

VHL基因是抑癌基因,定位于染色体3p25-26,其产物pVHL与Wnt-β-catenin信号通路、缺氧诱导因子、氧化磷酸化的调控有关。VHL基因的失活会导致VHL蛋白不能正常合成,这与散发性肾透明细胞癌的发生、发展有着密切的关系。VHL基因的失活机制主要包括基因突变,杂合性缺失和甲基化。通过对VHL基因失活机制的研究有助于筛选用于肾透明细胞癌早期诊断与预后的新分子标志物。目前利用VHL基因开展了肾癌基因治疗的试验探索。

pVHL/HIF通路与PI3K/PKB/FOXO通路在肾透明细胞癌发生、发展中的作用

肿瘤抑制基因vonHipple-Lindau(简称VHL基因)的突变失活导致肿瘤细胞中缺氧诱导因子的累积,进而调节其下游靶基因的转录和表达,促进肿瘤内新生血管形成及细胞增殖,从而促进肾透明细胞癌的发生、发展。磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B通路异常活化,在肾细胞肿瘤的发生、发展、转移中发挥重要作用。上述两通路存在着错综复杂的联系。本文通过分析两通路在肾肿瘤发生,发展中的作用,为探寻肾癌治疗的新靶点提供理论依据。

基于VHL基因表达构建CT组学特征预测ccRCC Fuhrman分级的诊断模型

目的探讨Von Hippel-Lindau(VHL)基因表达与肾透明细胞癌(Clear Cell Renal Cell Carcinoma,ccRCC)Fuhrman分级之间的关系,并根据VHL表达匹配相关CT组学特征,构建CT组学特征预测ccRCC Fuhrman分级的诊断模型。方法本研究所有病例均来自TCGA数据库,共163例经病理证实的ccRCC病例。在入组病例的CT图像上构建瘤体体积(Tumor Mass Volume,TMV),每例ccRCC癌灶中计算588个影像组学特征。将病例分成训练组(n=120)与测试组(n=43),在训练组中,通过秩相关分析选择与ccRCC Fuhrman分级具有显著统计学差异的CT组学特征(P<0.01),并用筛选出的有统计学差异的组学特征对ccRCC Fuhrman分级进行受试者工作特征(Receiver Operator Characteristic,ROC)曲线诊断效能检验,初步构建以组学特征和学习分类器为主要组成的诊断模型。在测试组中,采用训练组筛选出的有统计学差异的组学特征对ccRCC Fuhrman分级进行ROC诊断效能测试,验证诊断模型的预测效能,构建有效CT组学特征预测ccRCC Fuhrman分级的诊断模型。结果VHL表达量在ccRCC Fuhrman高低级别组中分布存在统计学差异(P=0.037)。在训练组中通过相关性分析,筛选出25个有统计学差异的CT组学特征,对ccRCC Fuhrman高低分级具有较高的诊断效能,曲线下面积(Area Under the Curve,AUC)(95%CI)为0.742(0.654~0.817),敏感度79.0%,特异度61.4%,构建预测诊断模型。在测试组中,对模型的诊断效能进行验证,25个CT组学特征对ccRCC Fuhrman高低分级诊断效能AUC值为0.816,95%CI:0.668~0.918,敏感度90.9%,特异度61.9%。结论VHL基因突变相关的CT组学特征模型对ccRCC Fuhrman高低分级预测具有较高的诊断效能。

VHL基因突变与红细胞增多症的研究进展

VHL(Von Hippel-Lindau)基因突变可改变VHL蛋白结构功能,调控细胞的氧感通路及影响缺氧诱导因子HIF泛素化,激活血管生成因子和促红细胞生成素的转录,进一步引起红细胞增多症的发生。近年来,VHL基因突变导致红细胞增多症的发生引起人们的关注。本文就VHL基因的突变与红细胞增多症的发生机制进行综述。

子宫颈癌中VHL基因和HIF-1α表达及意义

目的探讨VHL基因和HIF-1α在子宫颈癌组织中的表达及其与子宫颈癌临床病理因素的关系。方法用免疫组织化学SP法检测130例子宫颈癌和20例子宫颈正常组织中VHL、HIF-1α表达情况,并统计分析子宫颈癌分化程度、临床分期、转移及预后的相关性。结果 VHL基因在130例子宫颈癌组织中的阳性表达率为43.1%,在20例子宫颈正常黏膜中的阳性表达率为95%(P<0.001);HIF-1α蛋白在130例子宫颈癌组织中的阳性表达率为71.5%,在20例子宫颈正常黏膜中的阳性表达率为25%(P<0.001);VHL基因的阴性表达与HIF-1α蛋白的阳性表达与子宫颈癌分化程度、分期、淋巴结转移及预后有关(P<0.05)。结论 VHL基因表达下调和HIF-1α蛋白表达上调在子宫颈癌的侵袭、转移中发挥重要作用。