粪便DNA的Vimentin基因甲基化检测在结直肠癌患者早期诊断中的意义

目的通过检测结直肠癌组织及粪便中Vimentin基因甲基化探讨其在结直肠癌早期诊断中的应用。方法分别收集结直肠正常新鲜组织、癌新鲜组织及粪便标本,提取组织及粪便基因组DNA,DNA经亚硫酸盐处理后进行甲基化特异性PCR检测,检测结果经3%琼脂糖电泳鉴定。结果正常结直肠组织中未检测到Vimentin基因甲基化,结直肠癌组织中Vimentin基因甲基化的检出率为80%,结直肠癌患者粪便中Vimentin基因甲基化检出率为36%,其中早期直肠癌粪便的Vimentin基因甲基化检出率为66.7%。结论Vimentin基因在直肠癌早期诊断中具有重要意义。

上皮性卵巢癌组织中配对盒基因8、波形蛋白表达与临床病理特征及化疗后复发的关系

目的 探讨上皮性卵巢癌(EOC)组织中配对盒基因8(PAX8)、波形蛋白与临床病理特征及化疗后复发的关系。方法 采用免疫组化法检测86例患者上皮性卵巢癌组织内的PAX8、波形蛋白表达情况,分析PAX8、波形蛋白不同表达与患者临床病理特征及化疗后复发的关系。结果 PAX8、波形蛋白在上皮性卵巢癌中呈高表达,阳性率分别为81.4%、55.8%;PAX8、波形蛋白阳性表达患者肿瘤临床分期及发生淋巴结转移、腹水占比均高于阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。化疗后复发的上皮性卵巢癌患者中,PAX8、波形蛋白阳性表达患者数量高于阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。PAX8、波形蛋白共同表达阳性与上皮性卵巢癌患者化疗后复发具有显著相关性(P<0.001)。结论 PAX8、波形蛋白在上皮性卵巢癌中呈高表达,对上皮性卵巢癌病变严重程度及预后评估具有一定价值。

shRNA介导的波形蛋白基因沉默对肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响

目的:探讨shRNA介导的波形蛋白(Vimentin)基因沉默对肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法:将体外培养的肝癌Huh7细胞分为对照组(未感染)、阴性对照组(感染慢病毒载体LV-NC-GFP-shRNA)和实验组(感染慢病毒LV-Vimentin-GFP-shRNA),采用RT-PCR检测3组细胞中Vimentin mRNA的表达,Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot法检测细胞中Vimentin、MMP-9和受体酪氨酸激酶(AXL)蛋白的表达。结果:成功构建了慢病毒LV-Vimentin-GFP-shRNA,建立了Vimentin基因稳定沉默的Huh7细胞。Vimentin基因稳定沉默的实验组细胞中Vimentin mRNA和蛋白的表达均降低,迁移和侵袭细胞数减少,MMP-9和AXL蛋白的表达减弱,与对照组和阴性对照组相比,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论:Vimentin基因沉默能够抑制肝癌Huh7细胞的迁移和侵袭。

配对相关同源框1基因与胃癌淋巴结转移的相关性

目的检测配对相关同源框1 (PRRX1)基因与上皮间质转化(EMT)相关蛋白(上皮型钙黏蛋白(E-ca)、波形蛋白(Vim))在胃癌组织及转移淋巴结组织中的表达水平以及PRRX1与E-ca、Vim表达的相关性,分析PRRX1的表达与胃癌淋巴结转移的相关性。方法分别收集转移淋巴结组织及胃癌组织标本,其中转移淋巴结组织标本65例,胃癌组织标本93例。通过实验分别测定胃癌组织及转移淋巴结组织中PRRX1、E-ca、Vim的表达情况,进一步根据实验数据探讨在胃癌组织、转移淋巴结组织中PRRX1和E-ca、Vim的表达差异及三者之间的相关性,结合临床病理学资料分析其临床意义。结果 (1) PRRX1和Vim在胃癌组织中的阳性表达率分别为69.89%、63.44%,在转移淋巴结组织中PRRX1和Vim的阳性表达率分别为43.08%、36.92%,两者之间差异具有统计学意义(P <0.05);E-ca在胃癌组织中的阳性率(44.09%)显著低于转移淋巴结组织(61.54%),两者之间差异具有统计学意义(P <0.05);(2)转移淋巴结组织中PRRX1蛋白的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴管侵犯、血管侵犯、神经侵犯密切相关(P <0.05);(3) PRRX1与Vim、E-ca在淋巴结转移组织中的表达分别呈正相关关系(r=0.429,P <0.05)、负相关关系(r=-0.334,P <0.05);(4)回归分析显示胃癌淋巴结转移的独立危险因素包含3个方面:PRRX1的表达、肿瘤大小、浸润深度。结论 PRRX1可能通过调控EMT促使胃癌发生淋巴结转移过程,影响患者预后。

水牛波形蛋白基因克隆及其表达分析

【目的】克隆水牛波形蛋白(VIM)基因,并明确VIM基因在水牛成熟卵母细胞(MII期)和早期胚胎(2-细胞阶段)中的表达情况,为研究VIM在卵母细胞成熟及附植前胚胎发育中的作用机理打下基础。【方法】根据GenBank上已公布的水牛VIM基因mRNA序列设计引物,采用RT-PCR克隆水牛VIM基因,利用在线软件程序对克隆获得的水牛VIM基因进行生物信息学分析,同时以细胞免疫荧光试验检测VIM在水牛成熟卵母细胞(MII期)及早期胚胎(2-细胞阶段)中的表达情况。【结果】水牛VIM基因长度为1469 bp,其编码区长度1401 bp,编码466个氨基酸。水牛VIM基因序列与人类、黑猩猩、食蟹猴、家犬、马和牛的VIM基因序列具有高度的同源性,分别为93%、93%、93%、94%、94%和99%;基于VIM基因序列构建的系统发育进化树也显示水牛与牛的亲缘关系最近。水牛VIM的分子量为53.73 k D,理论等电点(p I)5.05,主要在线粒体中表达,稳定性差(不稳定系数53.65),具有较强的亲水性,无跨膜结构,不属于分泌型蛋白,其蛋白结构以α-螺旋为主。VIM在水牛成熟卵母细胞(MII期)及早期胚胎(2-细胞阶段)中均有表达,且在成熟卵母细胞中的表达量明显高于早期胚胎。【结论】水牛VIM基因编码序列具有较高的保守性,且在水牛成熟卵母细胞(MII期)中的表达量明显高于早期胚胎(2-细胞阶段)。

肝细胞癌患者血清中SOX1和VIM启动子的甲基化检测及其临床意义

目的探究肝细胞癌(HCC)患者血清中性别决定区域Y盒1(SOX1)、波形蛋白(VIM)基因启动子甲基化状态及其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测60例未经治疗的HCC患者(HCC组)、50例乙型肝炎后肝硬化患者(LC组)、50例慢性乙型病毒性肝炎患者(CHB组)及50例健康体检者(Control组)的血清SOX1、VIM基因启动子甲基化状态,并分析其与HCC患者临床特征的关系。结果 HCC组患者的血清SOX1、VIM基因启动子甲基化阳性率均高于LC组、CHB组和Control组,差异均有统计学意义(P﹤0.05);LC组和CHB组患者的血清SOX1、VIM基因启动子甲基化阳性率均高于Control组,差异均有统计学意义(P﹤0.05);LC组患者的血清SOX1、VIM基因启动子甲基化阳性率均高于CHB组,但差异均无统计学意义(P﹥0.05)。不同包膜侵犯程度、分化程度、TNM分期、远处转移情况HCC患者的血清SOX1基因启动子甲基化状态比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);不同分化程度、TNM分期、远处转移情况HCC患者的血清VIM基因启动子甲基化状态比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论血清SOX1基因启动子甲基化状态与HCC患者的包膜侵犯程度、分化程度、TNM分期及远处转移情况有关,VIM基因启动子甲基化状态与HCC患者的分化程度、TNM分期、远处转移情况有关,两者均可作为HCC分子诊断和病情进展的生物标志物。

年龄相关性皮质性白内障波形蛋白基因外显子突变的研究

目的探讨波形蛋白(vimentin)基因外显子序列突变与年龄相关性皮质性白内障的关系。方法选择年龄相关性皮质性白内障患者110例(病例组)及同一地区正常对照100例(对照组)进行以医院病例资料为基础的对照研究。以外周血基因组DNA为模板,通过PCR扩增vimentin基因全部外显子,并将PCR产物纯化后测序。测序结果与GenBank公布的vimentin基因正常序列比对。结果病例组的血尿酸含量为(344.00±79.91)μmol·L-1较对照组(309.00±72.75)μmol·L-1显著增高(P=0.001),病例组的血肌酐含量为(59.20±13.57)μmol·L-1较对照组(55.24±13.61)μmol·L-1增高(P=0.04);2组测序结果显示vimentin基因全部外显子序列中,并未发现突变。结论年龄相关性皮质性白内障的发病机制与vimentin基因外显子序列突变无关,其致病基因有待进一步试验确定。

波形蛋白对H9N2亚型AIV复制的影响研究

为研究波形蛋白(vimentin)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,构建了真核表达载体FLAG-vimentin,并采用Western blot技术验证FLAG-vimentin重组载体和病毒NP蛋白的表达情况,用荧光定量PCR技术检测病毒HA基因水平。同时,设计合成siRNA,敲低内源性vimentin,检测其对病毒HA基因表达水平的影响。构建原核表达载pCold I-vimentin,蛋白纯化后孵育细胞,采用Western blot、荧光定量PCR技术检测病毒的蛋白表达和基因水平的变化。结果证实,H9N2亚型AIV感染FLAG-vimentin重组载体转染的Hela细胞12 h时,病毒NP蛋白表达减少;而在感染24和36 h时,病毒NP蛋白表达上升。荧光定量PCR结果亦显示,在AIV感染后12 h时,HA基因表达水平明显降低。siRNA敲低Hela细胞内源性vimentin后,H9N2亚型AIV的HA基因表达水平在病毒感染12 h时明显升高,24 h时差异较小,36 h时有所升高。纯化后的vimentin重组蛋白孵育细胞,在病毒感染36 h时,H9N2亚型AIV的NP蛋白表达显著被抑制。荧光定量PCR结果亦证实病毒HA基因在AIV感染后36 h时表达水平明显降低。上述结果表明,H9N2亚型AIV在人源Hela细胞上的早期复制中,vimentin能起到一定程度上的抑制作用,且其重组表达蛋白孵育细胞能够阻断H9N2亚型AIV对细胞的感染,为深入研究vimentin抗病毒复制的机制提供了重要的试验依据,同时为开展抗H9N2亚型AIV的药物研发提供了参考。

食管鳞状细胞癌的PTTG1表达及与上皮间质转化的关系及临床意义

目的分析食管鳞状细胞癌(ESCC)的垂体瘤转化基因1(PTTG1 )表达及与上皮间质转化(EMT)的关系及临床意义。方法选取2015 年1 月—2017 年12 月山东枣庄矿业集团中心医院接受手术治疗的73 例经病理确诊的ESCC 患者的手术标本,取癌旁组织作为对照。采用免疫组织化学法检测组织中E-钙黏附素、波形蛋白、N-钙黏附素及PTTG1 表达,采用RNA 干扰技术下调ESCC Eca109 细胞系中PTTG1 表达,采用Western blotting 检测下调ESCC 细胞系中E-钙黏附素、波形蛋白、N-钙黏附素及PTTG1 表达,采用RT-PCR检测下调ESCC Eca109 细胞系中E-钙黏附素、波形蛋白、N-钙黏附素及PTTG1 信使RNA(mRNA)表达。结果与癌旁组织比较,癌组织的波形蛋白、N-钙黏附素及PTTG1 阳性表达高(P <0.05),E-钙黏附素阳性表达低(P <0.05)。E-钙黏附素、波形蛋白、N-钙黏附素及PTTG1 表达与ESCC 患者的浸润深度、淋巴结转移、肝转移及分期相关(P <0.05)。PTTG1 表达还与ESCC 患者的分化程度相关(P <0.05)。PTTG1 表达下调ESCC Eca109 细胞系中E-钙黏附素蛋白及E-钙黏附素mRNA 增高(P <0.05),波形蛋白、N-钙黏附素、PTTG1 蛋白及波形蛋白、N-钙黏附素、PTTG1 mRNA 均降低(P <0.05)。结论 ESCC 肿瘤组织中存在PTTG1 高表达,其表达与肿瘤的EMT 相关。

卵巢癌组织ERCC1、Vimentin表达与临床病理特征及预后的关系分析

目的:探讨卵巢癌组织切除修复交叉互补基因(ERCC1)、波形蛋白(Vimentin)表达与临床病理特征及预后的关系。方法:选取2015年3月~2016年2月期间首都医科大学附属北京世纪坛医院收治的卵巢癌患者83例为研究对象,收集每位患者的卵巢癌组织样本、癌旁正常组织样本,采用免疫组化SP法对各组织标本中的ERCC1、Vimentin的阳性表达率、表达水平进行检测,并分析ERCC1、Vimentin表达与卵巢癌临床病理特征间的关系,并对患者进行统一的手术治疗,分析ERCC1、Vimentin阳性表达组与阴性表达组患者的预后。结果:卵巢癌组织的ERCC1、Vimentin的阳性表达率分别为54.22%(45/83)、69.88%(58/83),高于癌旁正常组织的9.64%(8/83)、20.48%(17/83),差异有统计学意义(P<0.05)。卵巢癌组织的ERCC1、Vimentin的表达水平均高于癌旁正常组织(P<0.05)。ERCC1、Vimentin的阳性表达率与卵巢癌患者的年龄、病灶直径、病理分型无关,而与卵巢癌肿瘤的临床分期、分化程度、淋巴结转移有关。ERCC1、Vimentin阳性表达组患者的无进展生存期(PFS)、总体生存期(OS)均短于ERCC1、Vimentin阴性表达组(P<0.05)。结论:ERCC1、Vimentin的表达水平与卵巢癌的分期、分化程度、淋巴结转移有关,在卵巢癌的发生发展过程中起重要作用,ERCC1、Vimentin可能作为卵巢癌患者预后评估的参考指标。

波形蛋白在三阴性乳腺癌中的表达及与乳腺癌特异性基因1的相关性

目的研究在三阴性乳腺癌(TNBC)中上皮—间质转化标志物——波形蛋白(Vimentin)的表达及其与乳腺癌特异性基因1(BCSG1)的关系。方法选取2018年1月至2020年1月于长沙市第三医院接受治疗的女性TNBC患者60例作为研究对象,另选取同期接受治疗的乳腺良性病变患者20例作为对照组。运用qRT-PCR、免疫组化法检测Vimentin、BCSG1在TNBC组织与乳腺良性病变组织中的表达水平。结果Vimentin和BCSG1表达水平在乳腺良性病变组织(1.02±0.05,0)、non-TNB组织(2.13±0.21,2.16±0.23)和TNBC组织(2.41±0.22,2.45±0.24)中依次增高(F=382.600,P<0.01;F=1003.000,P<0.01)。TNBC中的Vimentin与BCSG1表达具有正相关关系(r=0.370,P<0.05),Vimentin、BCSG1高表达是影响TNBC患者预后的独立危险因素(OR=13.662,P=0.035;OR=15.443,P=0.001)。Vimentin联合BCSG1对TNBC诊断的灵敏度为92.35%,特异度为95.64%,ROC曲线下面积为0.891。结论BCSG1与Vimentin具有正相关关系,其在TNBC组织中的表达水平均明显高于乳腺良性病变组织,二者联合对TNBC有较高诊断效能。

RNA干扰研究波形蛋白在肝癌细胞增殖中的作用及不同中医治法的调节

目的:观察不同中医治法对大鼠肝癌波形蛋白(vimentin,VIM)表达的调控差异,以及VIM在人肝癌细胞增殖中的作用。方法:将84只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组以及实验组,除正常组外均采用二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌,实验组分别经中药健脾益气、清热解毒、活血化瘀等治疗,检测各组大鼠肝癌组织(正常组取肝组织)VIM表达的差异;根据人VIM基因编码区设计2个siRNA靶点,并将构建好的重组质粒转染SMMC-7721人肝癌细胞株,Realtime-PCR检测转染前后该基因的表达差异,MTT法检测转染前后细胞生长增殖情况。结果:芯片结果显示,VIM基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加(模型组芯片读数为正常组10倍以上),健脾和活血治法明显下调其表达;采用MTT法筛选到一个VIM基因RNA干扰有效靶序列,脂质体转染144 h后细胞的生长增殖得到了明显的抑制;实时荧光定量PCR检测表明,转染72 h后该基因的表达量明显降低(转染效率为50%)。结论:肝癌细胞恶性增殖有赖于VIM基因的高表达,健脾和活血方药能显著下调该基因表达。

TRIM59、Twist和波形蛋白在肝癌组织中的表达及临床意义

目的探讨三结构域蛋白59(TRIM59)、Twist基因和波形蛋白在肝癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化检测TRIM59、Twist及波形蛋白在80例肝癌组织及50例癌旁组织中的表达情况,分析其与临床病理特征和生存率的关系。结果肝癌组织中TRIM59阳性表达率为76.3%(61/80),高于癌旁组织的8.0%(4/50)(P<0.05)。肝癌组织中Twist阳性表达率为66.3%(53/80),高于癌旁肝组织的6.0%(3/50)(P<0.05)。肝癌组织中波形蛋白阳性表达率为63.8%(51/80),高于癌旁组织的12.0%(6/50)(P<0.05)。TRIM59、Twist和波形蛋白的表达与病理分级、分化程度、血管侵犯及TNM分期密切相关(P<0.05)。TRIM59的表达与Twist和波形蛋白呈正相关(r_s=0.418和0.395,P<0.05),Twist的表达与波形蛋白呈正相关(r_s=0.512,P<0.05)。TRIM59阳性表达和TRIM59阴性表达患者3年生存率分别为42%和78%,5年生存率分别为38%和61%;TRIM59阳性表达患者的累计生存率低于TRIM59阴性表达患者(P<0.05)。结论肝癌组织中TRIM59、Twist及波形蛋白呈现高表达,与肿瘤的侵袭、转移及患者预后密切相关。

MDM2与非小细胞肺癌上皮间质转化相关分子标记物的相关性

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中上皮间质转化(EMT)相关分子标记物和鼠双微体基因2(MDM2)蛋白的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测80例NSCLC及20例癌旁正常肺组织中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白和MDM2蛋白的表达,分析MDM2表达与EMT相关分子标记物表达的相关性。结果 NSCLC组织中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白和MDM2蛋白阳性表达率分别为57.5%、81.3%、38.8%和71.3%,均低于癌旁组织中的76.3%、68.8%、21.3%和53.8%(P<0.05)。在NSCLC组织中,N-钙黏蛋白和波形蛋白表达与MDM2蛋白表达均呈正相关(r=0.405,r=0.331,P<0.05),而E-钙黏蛋白表达与MDM2蛋白表达呈负相关(r=-0.339,P<0.05)。结论在NSCLC中,MDM2过表达可能促进了肿瘤的EMT。联合检测MDM2和EMT相关分子标记物,可以作为判断NSCLC的恶性程度、转移潜能以及预后的重要参考指标。

苦参碱对感染PRRSV Marc-145细胞受体表达的影响

为探讨苦参碱在猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）感染Marc-145细胞过程中的抗病毒机制。本研究建立感染PRRSV的Marc-145细胞模型,将试验分为4组：细胞对照组、病毒对照组、苦参碱对照组和苦参碱试验组,每组重复3次。PRRSV感染细胞3,6,12,24h后,收集细胞,采用qRT-PCR和Western blot分别检测苦参碱对PRRSV N基因及其细胞受体CD163、Vimentin和CD151的影响。结果表明,在PRRSV感染24h内苦参碱显著降低PRRSV N基因的表达（P〈0.05）。与病毒对照组相比,在PRRSV感染6h时,苦参碱可显著降低CD163的表达量（P〈0.05）;在PRRSV感染3,6h,苦参碱试验组Vimentin的表达量显著降低（P〈0.05）;在PRRSV感染3,24h时,CD151的表达量显著低于病毒对照组（P〈0.05）。以上结果表明苦参碱在PRRSV感染Marc-145细胞的不同时间点可通过抑制细胞不同受体的表达来抑制PRRSV吸附和侵入宿主细胞,从而干扰PRRSV在细胞中的复制。