猪瘟病毒C株表位突变毒株的构建及拯救

本研究旨在突变猪瘟病毒C株WH303位点,构建感染性克隆,为猪瘟病毒C株标记疫苗的研究提供候选毒株。本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经重叠PCR方法突变WH303位点,再分别连接至C株和C-flag株全长感染性克隆。体外转录RNA,转染PK15细胞,细胞连续传代完成病毒的拯救和增殖。结果显示,经特异性限制内切酶酶切反应验证,感染性克隆构建成功。经RT-PCR、过氧化物酶单层细胞试验检测,表明病毒成功拯救。病毒细胞传代至17代,检测到病毒,表明病毒可以稳定传代。综上,本研究成功构建了C株WH303突变感染性克隆MC和MC-flag,并成功拯救MC株,得到可以稳定传代的病毒株。

PRRSV Nsp4基因突变株对β2M表达的影响

[目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用,以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp4基因不同结构域的研究以及氨基酸位点功能预测,在其DomainⅡ和DomainⅢ分别筛选出3个和5个不同的氨基酸位点,并在病毒感染性克隆质粒上对这些位点进行不同的氨基酸替换突变,再将构建好的感染性克隆质粒转染Marc-145细胞以拯救各个Nsp4突变PRRSV病毒,将拯救的PRRSV病毒以MOI=0.02感染PAM细胞,并通过RT-qPCR和Western blot验证PRRSV Nsp4基因是否能够在PAM细胞β2M表达方面发挥作用。[结果]成功拯救出PRRSV D2-5(Nsp4-A80L)突变毒株,并且在Marc-145细胞上的生长动力学特性与野生毒株SH2020相似;而Nsp4基因其余位点突变则会导致PRRSV生长受到显著抑制从而无法进行试验。Western blot和RT-qPCR试验结果证实PRRSV D2-5毒株能够显著促进β2M在Marc-145和PAM细胞的表达,而野生毒株SH2020则表现出了对β2M表达的抑制作用。[结论]Nsp4基因在PRRSV抑制细胞β2M表达方面发挥重要作用,并且Nsp4-A80L突变能够显著促进β2M的表达。

基于光合突变池的雨生红球藻优异性状藻株挖掘

雨生红球藻(Haematococcus pluvialis Flotow)是天然虾青素的主要来源,其高成本、低效率的规模化生产难以满足市场需求。建立快速获得优质突变株的筛选策略有助于提高雨生红球藻的种质资源开发效率,获得虾青素高富集的优质藻株。以雨生红球藻NIES-144为出发藻株,通过甲基磺酸乙酯(ethyl methylsufone,EMS)诱变和高光处理获得光合突变池。以叶绿素荧光参数为检测指标能够快速筛选出生长速率和虾青素积累能力发生变化的突变藻株。结果显示,从该光合突变池中随机选取11株藻株的增殖能力和虾青素积累能力均与原始对照株存在不同程度的差异,45%的突变株在增殖能力和虾青素积累能力方面显著优于对照株。该结果表明雨生红球藻的光化学活性与增殖和其虾青素积累能力之间存在着紧密的联系,证实基于光合突变池挖掘优异性状雨生红球藻的策略具有可行性,为微藻优良藻株的获取提供新思路。

HSV-1突变株M6感染人支气管上皮细胞后对巨噬细胞介导的免疫反应的影响

目的探究1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)突变株M6感染人支气管上皮细胞(16HBE细胞)后对巨噬细胞介导的免疫反应的影响。方法用HSV-1感染16HBE细胞分析培养液中细胞因子的变化;将巨噬细胞与被HSV-1毒株感染的16HBE细胞的上清液共培养并通过尾静脉回输至小鼠体内,分别在第1、3、7、28、56、90天对小鼠淋巴结细胞因子表达水平、脾脏T细胞比例变化、小鼠中和抗体表达水平以及特异性T细胞反应进行检测。结果16HBE细胞被HSV-1突变株感染后,上清液中募集和激活巨噬细胞相关的细胞因子均较高水平表达但略低于野毒株组;尾静脉回输实验后,突变株组小鼠淋巴结炎症因子、趋化因子和T细胞的比例随时间发生了不同的变化,并引起了弱于野毒株组的体液免疫和强于野毒株组的特异性T细胞免疫反应,且仅极少数与野毒株组具有显著性差异(P<0.05)。结论16HBE细胞被HSV-1突变株M6感染后能够释放募集和激活巨噬细胞的细胞因子,使巨噬细胞携带HSV-1突变株的特异性活化信息,激活了宿主的免疫系统,诱导了宿主的体液免疫和细胞免疫。

PEDV G2突变株动力学特征比较研究

[目的]本研究旨在通过对猪流行性腹泻病毒(PEDV)经连续传代后的毒株(PEDV-BJ-150)进行全面研究,探究其生物学特性、遗传变异、致病能力和细胞适应性,以评估其作为潜在减毒疫苗株的潜力。[方法]通过对PEDV-BJ-150和原始PEDV-BJ-01毒株进行细胞培养、动物感染试验和基因组测序,评估其在不同细胞系中的增殖能力、病毒滴度、致病性以及基因组的核苷酸序列变异并利用动物模型评估其感染特性和病理变化。[结果]PEDV-BJ-150经连续传代后在Vero-M细胞中表现出更高的增殖能力和滴度,尤其在悬浮适应株Vero-M和贴壁适应株Vero-M中表现出显著的滴度差异。实验结果显示其在体内感染后的致病性降低,尤其在肺部未检测到病毒存在,鼻翼和小肠部位显示更高的病毒滴度。此外,基因组测序结果表明PEDV-BJ-150的S蛋白存在多个位置的氨基酸突变,可能影响其细胞嗜性和致病能力。[结论]本研究发现经连续传代的PEDV-BJ-150在体内表现出的毒力和致病能力明显降低,表明其有作为减毒疫苗株的潜力。特别是S蛋白中的连续性氨基酸缺失可能导致病毒致病性降低,这为疫苗研发提供了新的思路。此外,研究发现不同组织对PEDV的感染特性不同,这对于深入了解病毒传播机制具有重要意义。本研究的创新之处在于发现了PEDV经连续传代后的致病性变化和S蛋白突变对病毒特性的影响,为病毒进化和疫苗设计提供了新的见解。这项研究为了解PEDV的病毒学特性和毒力变化提供了重要线索,对于病毒疫苗研发和应对疫情具有潜在的应用前景。

细菌回复突变试验菌株鉴定方法的比较

目的:对细菌回复突变试验(Ames试验)中的菌株鉴定方法进行比较分析,以期为试验菌株鉴定提供参考。方法:根据Ames试验相关的国家和行业标准、技术规范和指导原则要求,对试验菌株的组氨酸缺陷型鉴定、脂多糖屏障缺陷(rfa突变)鉴定、氨苄青霉素抗性(R因子)鉴定、四环素抗性(pAQ1质粒)鉴定和uvrB修复缺陷型(紫外线敏感性)鉴定方法进行了分析对比。结果:鉴定结果表明,TA97a、TA98、TA100、TA102、TA1535等5株菌株生长均需组氨酸,均具有rfa突变,除TA1535外均具有氨苄青霉素抗性,除TA102外均对紫外线敏感和均无四环素抗性。结论:虽然鉴定方法不同,但是判定标准和鉴定结果相同,各个实验室应规定好试验菌株鉴定的方法和频率,为Ames试验结果的真实、可靠提供根本保障。

长枝木霉菌M-1的突变株筛选以及纤维降解特性研究

本研究通过紫外(UV)诱变方法对纤维素降解菌长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)M-1进行诱变,对诱变菌株进行筛选、鉴定,并对其酶活力和玉米秸秆降解特性进行测定。结果表明:有5个菌株的水解圈直径/菌落直径(D/d)值较对照增大。ITS rDNA测序结果表明,5#菌株发生了突变。通过形态学观察和聚类分析,确定5#菌株也为长枝木霉。酶活力测定结果显示,5#菌株各酶活均有所提高,滤纸酶活(Fpase)提高了30.06 U/mL,外切酶活(CBH)提高了24.44 U/mL,内切酶活(EG)提高了19.01 U/mL。玉米秸秆粉降解结果表明,菌株5#的降解率、纤维素降解率及半纤维素降解率分别提高了10.01%(2.48倍)、6.46%(1.8倍)和3.03%(1.58倍)。经过电镜扫描发现,菌株5#对玉米秸秆的降解程度比对照更彻底。本研究为农作物秸秆得以大量利用提供了优良的菌株资源。

胸膜肺炎放线杆菌MnmE基因突变株的构建及其生物学特性的研究

为了探究t RNA修饰酶Mnm E对胸膜肺炎放线杆菌(APP)生长特性及致病性的影响,本研究以血清7型APP S8株DNA为模板经PCR分别扩增其Mnm E基因的保守结构域及全长基因,分别构建重组质粒pmnm E及pls88-Mnm E,并经PCR鉴定正确后将重组质粒pmnm E通过接合转移方式导入受体菌S8中,利用氯霉素抗性筛选Mnm E基因缺失株(S8△Mnm E),并经PCR和测序鉴定;将重组质粒pls88-Mnm E电转化至S8△Mnm E感受态细胞中,经卡那抗性筛选Mnm E全长基因回补株(cS8△Mnm E),并经PCR和测序鉴定。将上述两株菌分别在无抗性培养基中传10代每代均经相应PCR鉴定其遗传稳定性。采用q RT-PCR检测Mnm E基因突变对其上下游基因转录水平的影响。结果显示,突变株S8△Mnm E和回补株cS8△Mnm E均正确构建,且遗传稳定性均较好;q RT-PCR结果显示,S8△Mnm E株Mnm E上下游基因的转录水平均与亲本株无明显差异。通过检测不同时间点的OD_(600nm)值并绘制生长曲线分析上述两种菌与亲本株分别在20种不同氨基酸单独缺失培养基中的生长特性;通过微量结晶紫染色法,测定3株菌在不同培养时间生物被膜(BF)的形成能力;通过测定3株菌在不同浓度H_(2)O_(2)中的增殖能力,分析3株菌的体外抗氧化应激能力。结果显示,S8、S8△Mnm E及c S8△Mnm E株在含全部20种氨基酸的化学合成培养基中的增殖速度基本一致,但在谷氨酰胺(Gln)、色氨酸(Trp)、谷氨酸(Glu)缺失时,S8△Mnm E株的增殖水平明显低于亲本株,而在甲硫氨酸(Met)、赖氨酸(Lys)缺失时S8△Mnm E株的生长速度快于亲本株。培养36 h、48 h时各菌株BF的形成能力基本无差异,但在培养72 h时,S8△Mnm E株BF的形成能力约为亲本株的1.5倍(P<0.001);与S8株相比,S8△Mnm E株经不同浓度H_(2)O_(2)处理后的活菌数均明显降低,且降低水平与H_(2)O_(2)的浓度成正比。而回补株则基本恢复了亲本株的生长特性。通过对大蜡螟的致病性试验测定S8与S8△Mnm E的半数致死量(LD_(50)),结果显示S8的LD_(50)为3.16×10^(8)cfu/mL,S8△Mnm E株的LD_(50)为1.58×10^(9)cfu/mL,前者比后者升高约5倍。本研究结果首次表明Mnm E可参与APP BF的形成,并影响其体外抗氧化应激能力及调控APP生长,降低APP的致病性。为进一步阐明APP的致病机制提供参考依据。

Omicron变异株病毒学特征:关键突变、致病性、免疫逃逸

新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2) Omicron变异株首次在博茨瓦纳被检出,随后造成了全世界范围内的感染人数激增。截至目前,Omicron是需要关注的SARS-CoV-2变异株中突变数量最多的毒株,已在整个基因组中发生至少50次突变。Omicron基因组发生的突变赋予病毒一定的适应性优势,如受体结合域与人类血管紧张素转换酶2受体亲和力增强导致病毒传播能力增强;与先前变异株相比,病毒复制能力减弱导致在COVID-19患者中引起的症状相对较轻。此外,该变异株具有较高的环境稳定性,部分逃脱了来自疫苗接种或先前感染诱导的宿主免疫反应,且对大多数治疗性抗体具有较高的耐药性。本文对Omicron变异株的关键突变、病毒学特征、致病性和免疫逃逸能力进行总结,以期为完善疫情防控策略和公共卫生举措提供科学参考。

衡谷12号高矮异株突变体稳定性鉴定

衡谷12号是河北省农林科学院旱作农业研究所培育的矮秆、极早熟、分蘖性强的谷子新品种。2019年从衡谷12号繁种田获得高矮异株突变体,对该材料进行两年一点、一年两点和错期播种,为鉴定该突变体的稳定性以及深入研究株高、分蘖、抽穗期提供可靠试验材料。结果表明,衡谷12号高矮异株突变体具有稳定遗传特性,农艺性状表型不受时间、地点、播种期的影响,可作为稳定遗传材料使用。

一株犬瘟热病毒H基因T193I突变株的分离鉴定及序列分析

为对吉林省地区犬瘟热病毒(CDV)流行发病情况调查,本研究从吉林省长春市、吉林市、四平市的养犬场、毛皮动物养殖场、宠物医院共收集12份经胶体金试纸条检测为CDV阳性的肺部样品,利用Vero/DogSLAM细胞进行病毒分离培养,并对分离的病毒经PCR鉴定、间接免疫荧光试验确定该病的致病病原,并对该病毒分型鉴定和H基因的遗传进化分析,并且选取1株犬源CDV病毒感染6只2~3月龄的幼犬进行动物回归试验,每天观察试验犬的临床症状、测量体温、采集眼鼻、肛拭子,拭子经PCR检测CDV的粪便排毒情况。结果显示,有1株犬源样品在Vero/DogSLAM细胞上盲传第4代出现明显的CPE,毒价达104.56 TCID50/mL,经PCR鉴定结果表明分离出1株犬源CDV,命名MHK-04;病毒的分型鉴定结果表明,分离的MHK-04为Asia-I型;对MHK-04毒株的H基因的同源性分析结果表明,MHK-04株为Asia-I型,与广东分离株GD1818株的同源性最高,与疫苗株(Onderstepoort和CDV3)差异较大,核苷酸同源率均为90.1%,氨基酸同源率分别为90.0%和90.1%;经SWISS-MODEL预测H蛋白三维立体模型结果表明,MHK-04株H蛋白氨基酸序列T193I突变位点,位于H蛋白的外部结构中β6S4位,是其起始位点,推测T193I点突变与H蛋白的构像改变及SLAM受体亲和力有关,有待进一步验证;动物回归试验结果显示,MHK-04毒株在感染幼犬后,幼犬出现犬瘟热发病症状,体温在第4 d升高到41.4℃,并出现排毒现象。本研究为了解吉林地区CDV的流行规律及疾病的诊断、防治提供参考。

高产DHA裂壶藻突变株发酵条件的优化

为了进一步提高裂壶藻突变株的DHA产量,以经过^(60)Co-γ射线辐照诱变后所得高产DHA裂壶藻突变株1.6-7-1为研究对象,通过Plackett-Burman实验、最陡爬坡实验和响应面实验对其发酵培养基进行优化,同时通过发酵罐发酵培养研究不同溶氧水平对突变株代谢的影响。结果表明:葡萄糖、C_(5)H_(8)NNaO_(4)和NaCl添加量对该突变株产DHA具有显著影响,其最佳添加量分别为葡萄糖125.46 g/L、C_(5)H_(8)NNaO_(4)12.44 g/L、NaCl_(4) g/L,在此条件下该突变株DHA产量达6.01 g/L,相较于原始菌株提升了49.88%;在高溶氧水平下,突变株生物量高但油脂产量和DHA产量较低,可能是因为细胞优先用营养物质进行自身的生长繁殖,而过低的溶氧水平会抑制能量代谢,减慢细胞繁殖速度。综上,优化发酵条件可以提高突变株DHA产量。

猪细小病毒1型突变株分离鉴定及全基因组进化分析

旨在对猪细小病毒1型(PPV1)突变株生物学特性进行分析。对采自山东不同地区养猪场的67份流产胎儿组织样品进行PPV的分离和培养,经电镜观察和IFA试验进行鉴定,通过Overlap PCR对分离株进行全基因序列扩增,SnapGene V4进行序列拼接和比对,利用DNAMAN V6对基因组末端5′UTR和3′UTR二级结构进行展示和比较,应用MEGA V7进行遗传进化分析,最后利用多步生长曲线绘制对分离株在易感细胞内的增殖能力进行比较。共分离得到3株病毒,均鉴定为PPV1型毒株,分别命名为SDPV1、SDPV2和SDPV3,GenBank登录号分别为ON924737、ON924738和ON924739;3个分离株全基因序列长度基本一致,其中5′-UTR序列高度保守,呈Y型结构;而3′-UTR呈U型结构,个别碱基有所差异;VP2氨基酸序列中有5个非同义突变位点,分别为T20A、R82K、Q226E、D366N和K407N,为国内毒株首次发现。生长曲线显示,突变株生长趋势相对较快,与PPV-QN株相比,最高滴度相差10倍。报道了包含新型变异位点的PPV毒株的基因组特征。

成人恶性血液病患者感染omicron突变株的防治策略

恶性血液病(HM)患者在omicron时期的感染率和死亡率高于其它人群。血液病疾病进展状态、高龄、基础病、造血干细胞移植(HSCT)和嵌合抗原受体T细胞治疗等均与HM新冠病毒感染患者的预后密切相关,而系统性抗肿瘤治疗(SACT)对患者的预后影响较小,建议在权衡患者血液病状态及新冠病毒感染严重程度的情况下决定是否延迟治疗或更换治疗方案。在预防新冠病毒感染方面,接种疫苗及加强针、加强个人防护是降低感染率和死亡率的重要方式,必要时可以注射Evusheld以增强抗感染能力。在治疗方面常采用抗病毒结合免疫调节的方式,但抗S单抗、激酶抑制剂、抗IL-6单抗、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、抗凝药等药物在HM患者中的有效性和安全性还需进一步评估。

新型冠状病毒Omicron I1566V突变位点MS2噬菌体病毒样颗粒的构建

目的构建新型冠状病毒Omicron I1566V突变位点MS2噬菌体病毒样颗粒。方法选取并合成带有6×His标签的MS2噬菌体的衣壳蛋白(CP)、成熟蛋白(A蛋白)及Omicron I1566V突变基因序列,插入pACYCDuet-1质粒构建重组载体,通过原核系统诱导表达目的蛋白,纯化重组蛋白后利用透射电镜对蛋白质进行物理表征,最后通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测病毒样颗粒的热稳定性及耐核酸酶水解能力。结果成功构建包含有6×His标签的CP、A蛋白和Omicron I1566V突变基因序列的重组载体,经限制性内切酶BamHⅠ和KpnⅠ酶切鉴定和测序验证,结果均与预期相符。经诱导并纯化后,通过电镜观察到了大小均匀、直径为23~28 nm的病毒样颗粒,该病毒样颗粒经核酸酶消化后可在37℃条件下稳定储存20 d以上。结论该研究成功利用MS2噬菌体的CP和A蛋白构建了Omicron I1566V突变位点病毒样颗粒,为该突变位点的RT-PCR检测体系提供了可靠的质量保障。

水稻D1基因新等位突变体的鉴定与功能分析

[目的]株高是作物重要的农艺性状,挖掘株高控制基因并解析其分子功能,可为作物高产育种提供更多有用的基因资源。[方法]利用EMS诱变水稻日本晴获得的矮化突变体d1-11为材料,进行表型和细胞学观察,通过图位克隆的方法鉴定d1-11基因并对基因表达、激素含量和抗旱性进行了分析。[结果]d1-11突变体表现出植株矮化、叶片变短变宽和籽粒形态变圆表型;d1-11突变体叶片中脉萎缩,大脉和小脉数量和面积减少,导致叶片形态变异。d1-11基因被定位到水稻5号染色体R5M15.2和R5M15.8两个分子标记之间;图位克隆结果表明d1-11突变体中D1基因第11外显子和内含子交界处单碱基替换导致基因功能缺失。D1基因在苗期各组织中表达量较高,从分蘖期开始表达量降低;外源脱落酸(ABA)处理24 h后诱导D1基因表达,外源赤霉素(GA)处理抑制D1基因表达,盐胁迫处理24h诱导D1基因剧烈上调表达。d1-11突变体植株GA、油菜素内酯(BR)和生长素(IAA)等激素含量均上升,叶片相对含水量上升、叶片失水速率降低,植株对干旱胁迫抗性显著增强。[结论]鉴定到水稻D1基因新等位突变d1-11,发现d1-11突变体多种内源激素水平上升、叶片含水量增加、植株对干旱胁迫抗性增强。本研究进一步丰富了水稻矮化基因资源并揭示D1基因新的生物学功能。

提高乙酸耐受性酿酒酵母JJJ1突变株构建及转录组学分析

目的构建JJJ1突变株以提高酿酒酵母在发酵过程中的乙酸耐受性,提高发酵效率。方法本研究采用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建酿酒酵母JJJ1突变株,检测突变对酿酒酵母菌株的乙酸耐受性影响,基于转录组学分析突变株耐受乙酸的分子机制。结果在含有5 g/L乙酸的液体培养基中,酿酒酵母JJJ1存活率是野生型菌株的4.44倍,发酵120 h后酿酒酵母突变株JJJ1的细胞生物量是野生型菌株的1.15倍,酿酒酵母JJJ1的生长延滞期比野生型菌株缩短了30 h;转录组学研究表明,敲除JJJ1基因增强酿酒酵母的代谢、生物调节、膜流动性以及转运活性和电子转移活性,减少酿酒酵母细胞生理过程、细胞连接和拟核功能以及细胞结合功能。结论敲除JJJ1基因的酿酒酵母突变株通过提高能量代谢和氨基酸合成,降低核糖体生物发生减少细胞生理活动,增强酿酒酵母菌株乙酸耐受性。

新型冠状病毒奥密克戎突变株感染后核酸检测复阳患者的临床特征及危险因素分析

目的研究新型冠状病毒(简称新冠病毒)感染奥密克戎突变株复阳患者的临床特征,并分析其危险因素。方法回顾性分析2022年4月11日—2022年6月3日上海市嘉定区安亭医院852例新冠病毒奥密克戎突变株感染住院患者的病例资料。在新冠病毒奥密克戎变异株感染者最后1次核酸检测结果为阴性后第7天复测核酸,根据复测结果将患者分为复阳组与非复阳组。比较两组患者的一般资料、实验室指标和影像学资料,并分析核酸复阳患者的危险因素。结果852例患者中,最终纳入654例患者。其中复阳组96例(14.7%),非复阳组558例(85.3%)。复阳组接种3剂疫苗的患者比例显著低于非复阳组(P<0.05),核酸转阴天数显著多于非复阳组(P<0.05),无发热(体温<37.3℃)的患者比例显著高于非复阳组(P<0.05)。复阳组降钙素原、D-二聚体水平均显著高于非复阳组患者(P<0.05),复阳组患者中新冠病毒核酸检测N基因、ORF基因的Ct值均显著低于非复阳组(P值均<0.05),复阳组CRP>10 mg/L、降钙素原>0.1 ng/mL、D-二聚体>1.0 mg/L的患者比例均显著高于非复阳组(P值均<0.05)。以核酸转阴天数为自变量,是否复阳为因变量,进行ROC曲线分析。结果显示,其AUC为0.60(P=0.003),灵敏度为0.35,特异度为0.79,最佳诊断界值为18 d。二元logistics回归分析显示,核酸转阴天数>18 d(OR=1.03,95%CI为1.12~1.67,P=0.043),降钙素原>0.1 ng/mL(OR=2.23,95%CI为1.34~3.70,P=0.002),D-二聚体>1.0 mg/L(OR=1.92,95%CI为1.16~3.20,P=0.012)和无发热(OR=2.04,95%CI为1.31~3.64,P=0.027)是核酸检测复阳的独立危险因素。结论核酸转阴天数>18 d、降钙素原>0.1 ng/mL、D-二聚体>1.0 mg/L和无发热(体温<37.3℃)是新冠病毒奥密克戎突变株感染患者核酸复阳的危险因素。

厄洛替尼联合贝伐株单抗治疗老年晚期非小细胞肺癌患者的临床观察

目的观察厄洛替尼联合贝伐株单抗对老年晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清肿瘤标志物、免疫功能等影响,为治疗该病提供方法。方法选取2019年5月—2022年5月上海嘉会国际医院经基因检测确定无T790M突变的老年NSCLC患者104例,根据治疗方案不同分成2组:观察组(n=52)和对照组(n=52)。对照组患者口服厄洛替尼,观察组患者在对照组治疗的基础上静脉滴注贝伐株单抗。观察并比较2组患者临床疗效、不良反应;检测并比较2组治疗前后血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、细胞角质素片段抗原21-1(CYFRA21-1)、糖类抗原125(CA-125)、白细胞介素-6(IIL-6)、IL-2、IL-5、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、干扰素-γ(INF-γ)和NK细胞、CD8^(+)、CD4^(+)、CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)检测值。结果治疗后,观察组RR、PFS及OS值均高(或长)于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组血清NSE、CEA、CYERA21-1及CA125值较治疗前水平下降,且下降幅度大于对照组(P<0.05);观察组血清IL-6、IL-2、TNF-α、及INF-γ水平较治疗前上升(P<0.05),且上升幅度大于对照组(P<0.05);观察组血清IL-5、IL-4水平较治疗前下降(P<0.05),且下降幅度大于对照组(P<0.05);观察组血清NK、CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)值较治疗前上升(P<0.05),且上升幅度大于对照组(P<0.05);观察组治疗后CD8^(+)值较治疗前下降(P<0.05),且下降幅度大于对照组(P<0.05)。结论厄洛替尼联合贝伐株单抗可明显改善老年晚期NSCLC患者血清肿瘤标志物水平与机体免疫功能,有一定的临床应用价值。

ARTP诱变选育维生素K2高产菌株

维生素K2是一类重要的脂溶性维生素,在凝血、抗骨质疏松等方面具有重要作用。为了提升纳豆芽孢杆菌发酵过程中维生素K2(MK-7)的产量,以纳豆芽孢杆菌ND09为出发菌株,采用常压室温等离子体(ARTP)诱变技术进行选育,获得一株MK-7高产突变株,产MK-7含量达到26.42mg/L,为出发菌株的2.1倍。经10代传代培养性能稳定,对其摇瓶发酵装液量、接种量、发酵温度进行优化,MK-7含量最终达到38.7mg/L,为生物发酵生产MK-7提供了有利的微生物资源。