苏云金杆菌vip3 A基因的克隆、表达及杀虫活性分析

用全长PCR方法从野生型苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)菌株S184中克隆了 2 3kb大小的vip3A基因并进行了序列分析。将vip3A S184基因插入表达载体pQE30构建了表达质粒pOTP ,转化大肠杆菌M15 ,转化子经 1mmol LIPTG诱导后可表达 89kD大小的Vip3A S184蛋白 ,并得到Westernblot证实。蛋白可溶性试验表明 ,目的蛋白中约有 19%是可溶的 ,用透射电镜观察到大多数蛋白是以包涵体形式存在的。因此 ,可以在自然条件下进行目的蛋白的纯化和对家兔进行免疫制备多克隆抗体 ,用于苏云金杆菌Vip3A蛋白表达的检测。利用IPTG进行诱导培养的菌液对甜菜夜蛾 (Spodopteraexigua)、斜纹夜蛾 (S .litura)和棉铃虫 (Helicoverpaarmigera)等 3种害虫的初孵幼虫进行生物测定 ,结果表明 ,Vip3A