鼻咽癌HSP70表达与血清EB病毒IgA/VCA的关系及其临床意义

背景与目的:热休克蛋白(HSP)70在许多恶性肿瘤中均有表达,但在鼻咽癌组织中的表达与血清IgA/VCA滴度及预后的关系尚不清楚。本研究旨在检测鼻咽癌组织中HSP70的表达和含量水平,探讨HSP70表达与鼻咽癌患者血清EB病毒IgA/VCA滴度及预后的关系。方法:采用SP免疫组化法检测38例鼻咽癌组织中HSP70表达,ELISA法检测38例鼻咽癌组织中HSP70含量,免疫酶标法检测38例鼻咽癌患者血清IgA/VCA滴度。结果:HSP70在38例鼻咽癌组织中表达率为60.5%。在不同性别、年龄、T分期、N分期和临床分期鼻咽癌组织中HSP70表达率均无显著性差异(P>0.05)。HSP70表达和含量与血清EB病毒抗体IgA/VCA滴度呈正相关(P=0.001)。HSP70阳性组和阴性组患者的5年生存率分别为65.2%和80.0%,5年无瘤生存率分别为40.0%和78.6%(P=0.04)。结论:HSP70在临床Ⅱ、Ⅲ期鼻咽癌患者癌组织中的表达与患者的IgA/VCA滴度正相关,HSP70阳性患者常规治疗后预后较差。

定量检测EB病毒VCA-IgA和EA-IgA抗体对EB病毒相关鼻咽癌的诊断意义

目的:评价EB病毒特异性VCA-IgA和EA-IgA抗体定量检测对EB病毒相关的鼻咽癌的诊断意义。方法:试验组为228例鼻咽癌血清标本,对照组为102例正常健康体检者血清标本。用ELISA法定量检测血清标本中EBV特异性VCA-IgA和EA-IgA抗体水平,以临床病理诊断为金标准,分析各血清检测指标的准确性、灵敏性、特异性及其cut-off值的设定。结果:正常健康人血清中EB病毒特异性VCA-IgA和EA-IgA抗体的平均水平分别为15U/ml和11.5U/ml,鼻咽癌患者血清中VCA-IgA和EA-IgA抗体的平均水平分别为56.5U/ml和63.5U/ml,鼻咽癌组抗体水平显著高于健康体检组。根据VCA-IgA、EA-IgA定量检测结果绘制ROC曲线图,曲线下面积分别为0.903和0.948,VCA-IgA、EA-IgA定量检测可用于鼻咽癌的准确诊断。根据ROC曲线图分析,cut-off值分别设定为30U/ml和23U/ml。按此值设定时,VCA-IgA检测鼻咽癌的敏感性和特异性分别为84.9%和66.8%,EA-IgA检测鼻咽癌的敏感性和特异性分别为87.9%和91.1%。联合检测VCA-IgA和EA-IgA的敏感性为92%,特异性为91%。结论:以ELISA法定量检测VCA-IgA、EA-IgA的血清抗体水平对鼻咽癌具有诊断意义,尤其将两指标联合应用。

免疫酶法与ELISA法检测EB病毒VCA-IgA的比较

为探讨免疫酶法与ELISA在鼻咽癌诊断中的临床价值,检测鼻咽癌组患者与健康对照组血清EB病毒壳抗原抗体,并对两种检测方法的结果进行分析。结果表明:177例鼻咽癌患者中,免疫酶法检测EB-VCA-IgA阳性率高92.1%(163/177),而国产试剂和进口试剂ELISA法检测结果阳性率都较低,分别为65.0%(115/177)和67.2%(119/177),有显著性差异(P<0.005);在90名对照组血清EB-VCA-IgA,免疫酶法的阴性率为100%(90/90),ELISA法中的国产和进口试剂的阴性率分别为:98.9%(89/90)和95.6%(86/90),无显著性差异(P>0.05)。为此免疫酶法检测EB-VCA-IgA的灵敏度较高,更适合用于鼻咽癌的普查、协助诊断等,具有实际临床意义。

EBV-DNA与VCA-IgM、VCA-IgG亲和力检测在儿童EB病毒早期感染中的差异研究

目的分析EB病毒(EBV)-DNA与衣壳抗原IgM抗体(VCA-IgM)、衣壳抗原IgG抗体(VCAIgG)亲和力检测在儿童EBV早期感染中的差异,评价EBV-DNA在EBV早期感染中的诊断价值。方法收集疑似EBV急性感染的患儿血液标本154例,使用酶联免疫吸附试验检测VCA-IgM、VCA-IgG、VCA-IgG亲和力、早期抗原抗体IgG(EBVEA-IgG)、核抗原抗体IgG(EBVNA-IgG);比较EBV-DNA与VCA-IgM、低亲和力VCA-IgG之间阳性率的差异,分析其检测一致性,并初步探讨可能的原因。结果 EBV-DNA、VCA-IgM及低亲和力VCA-IgG阳性率分别为29.87%、10.39%、37.66%。EBV-DNA与VCA-IgM之间具有较弱的一致性(Kappa=0.237),与VCA-IgG亲和力之间没有一致性(Kappa=-0.009)。3种检测结果组合模式中单独EBV-DNA、低亲和力VCA-IgG阳性占所有EBV-DNA、低亲和力VCA-IgG阳性标本的比例分别达60.9%(28/46)、63.8%(37/58),明显高于VCA-IgM(6.25%);EBV-DNA与低亲和力VCA-IgG同时阳性的标本仅7例。EBV-DNA仅在近期感染组中与VCA-IgM及低亲和力VCA-IgG阳性率比较,差异无统计学意义(P=0.873),一致性也较好,并可在既往感染组标本中检出。结论 EBV-DNA检测阳性率较高,但与EBV抗体检测一致性较差,且受既往感染的干扰,对儿童EBV急性感染的诊断价值尚需深入研究。

两个不同厂家试剂盒检测EB病毒EA-IgA、VCA-IgA的比较

目的比较分析两个不同厂家试剂检测EB病毒早期抗原IgA抗体(EA-IgA)、衣壳抗原IgA抗体(VCA-IgA),并做方法学评价。方法分别用两个不同厂家的ELISA试剂盒检测184例鼻咽癌(NPC)患者及184例正常人的血清EA-IgA和VCA-IgA。结果与欧蒙公司的试剂盒相比,IBL公司的试剂EA-IgA的阳性符合率为66.07%,阴性符合率为89.45%,总符合率为82.34%,Kappa值为0.57;VCA-IgA的阳性符合率为67.57%,阴性符合率为99.32%,总符合率为80.16%,Kappa值为0.62。结论两个厂家的试剂盒在分别验证EA-IgA,VCA-IgA时,具有高度一致性。国内IBL公司生产的试剂可替代进口试剂。

鼻咽癌患者血清EB病毒Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体与其临床表现的关系

目的探究鼻咽癌患者血清EB病毒(EBV)Rta蛋白免疫球蛋白G抗体(Rta-IgG)、壳抗原免疫球蛋白A抗体(VCA-IgA)、早期抗原免疫球蛋白A抗体(EA-IgA)与其临床表现的关系。方法选取2016年3月-2018年10月我院经病理活检证实的鼻咽癌患者164例为鼻咽癌组,同期就诊的鼻炎疾病(非鼻咽癌)患者61例为鼻咽疾病组、健康体检者72例为健康对照组。比较3组血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体阳性率差异,并分析血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体与鼻咽癌患者临床表现的关系。结果鼻咽癌组血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体阳性率显著高于鼻咽疾病组及健康对照组(P<0.05),鼻咽疾病组与健康对照组血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同性别、年龄及T分期鼻咽癌患者血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同N分期、不同M分期鼻咽癌患者血清Rta-IgG抗体水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。临床分期Ⅰ期鼻咽癌患者血清Rta-IgG抗体水平明显低于临床分期Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期者(P<0.05),但临床分期Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期鼻咽癌患者血清Rta-IgG抗体水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。鼻咽癌患者血清VCA-IgA、EA-IgA抗体水平均随N分期、M分期及临床分期的升高而升高(P<0.05)。结论血清Rta-IgG、VCA-IgA、EA-IgA抗体水平与鼻咽癌临床表现有一定相关性,可应用于鼻咽癌的诊疗。

VCA-IgA联合eIF4E检测对鼻咽癌早期诊断的意义

目的探讨EB病毒衣壳抗原IgA(EBV VCA-IgA)联合真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)早期诊断中的应用价值。方法选择NPC患者60例(NPC组),同期收治的鼻腔乳头状瘤、纤维瘤、血管瘤及鼻息肉等良性肿瘤患者45例(对照组)。收集患者年龄、性别、病理分期、淋巴结转移等临床资料,抽取患者清晨空腹外周静脉血,离心分离血清。采用ELISA法检测血清VCA-IgV水平,qPCR法(一步法)检测患者组织中eIF4E mRNA表达水平。结果生化结果显示,NPC组患者血清VCA-IgV阳性率为78.3%(47/60)明显高于对照组为46.7%(21/45);血清VCA-IgA水平与患者临床分期、病理类型和淋巴结转移间无明显关联(P>0.05)。qPCR结果显示,各病理类型患者癌组织中eIF4E mRNA的表达水平间均有差异,晚期鼻咽癌患者以及发生癌细胞分化和淋巴结转移患者组织中eIF4E mRNA表达均明显升高(P<0.01),但淋巴结近端与远端转移患者间无明显差异(P>0.05)。相关性分析结果发现,良性对照组患者2种检测指标间无明显相关性(P>0.05),而鼻咽癌组以上指标间表现出明显的正相关(P<0.01)。结论 VCA-IgV作为NPC的特异性标志物在良性患者中存在一定的假阳性,但结合组织eIF4E表达差异,可进一步提高NPC的诊出率。

黄芪抑制EB病毒壳抗原在体外细胞中表达的作用

目的 :探讨黄芪抑制 EB病毒 (EBV)壳抗原在体外细胞中表达的作用。方法 :采用间接免疫酶法研究黄芪提取液对B95- 8细胞壳抗原表达的抑制作用。结果 :无毒性浓度的黄芪提取液对巴豆油、正丁酸联合激发的 EB病毒壳抗原表达有明显抑制作用 ,抑制率随药物浓度增加而提高。结论 :黄芪抑制 EBV壳抗原表达效果好 。

鼻咽癌复发患者EB病毒DNA及抗体的表达情况及其临床意义

目的探讨鼻咽癌复发患者治疗前后EB病毒(EBV)-DNA、病毒衣壳蛋白抗原-IgA(VCA-IgA)和早期抗原-IgA(EA-IgA)的表达情况及其临床意义。方法选择鼻咽癌复发患者124例为复发组,其中手术组77例,采用鼻内镜手术或鼻内镜手术联合放、化疗;放化疗组47例,采用放疗和(或)化疗。另选取30例鼻咽癌治疗后放射性颅底骨坏死患者(无复发)为对照组。在治疗前及治疗结束时,检测所有患者血清VCA-IgA、EA-IgA、EBV-DNA阳性表达情况。结果治疗前,复发组、对照组EBV-DNA阳性率分别为51.61%、0,两组VCA-IgA和EA-IgA阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗前,局部、颈部、局部及颈部复发的鼻咽癌患者间EBV-DNA、VCA-IgA和EA-IgA阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期复发鼻咽癌患者中,EBV-DNA阳性率随临床分期增高而增高(P<0.05),但VCA-IgA及EA-IgA阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前,手术组与放化疗组EBV-DNA、VCA-IgA、EA-IgA阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,手术组EBV-DNA转阴率高于放化疗组(P<0.05),且手术组EBV-DNA阳性率低于放化疗组(P<0.05),但两组VCA-IgA及EA-IgA阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论检测EBV-DNA可能有助于判断鼻咽癌复发和分期,手术治疗有助于清除机体的EBV。但在鼻咽癌治疗后放射性颅底骨坏死患者中仍可检出VCA-IgA、EA-IgA,建议对患者的抗体水平进行动态观察。

8-O-乙酰哈巴苷防治EB病毒感染的体内外药效学研究

目的通过体内外试验对8-O-乙酰哈巴苷防治Epstein-Barr病毒(EBV)感染的药效作用进行评价。方法采用实时荧光定量PCR(Real-time RT-PCR)技术观察8-O-乙酰哈巴苷对B95-8细胞内EBV衣壳抗原(VCA)的抑制作用;采用腹腔注射醋酸(HAc)所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高模型检测8-O-乙酰哈巴苷对炎症早期的毛细血管通透性亢进和渗出的抑制作用。结果 8-O-乙酰哈巴苷大、中、小剂量组对B95-8细胞内EBV衣壳抗原均具有明显的抑制作用(P<0.01);8-O-乙酰哈巴苷大、中两个剂量组显著抑制醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增高(P<0.01)。结论 8-O-乙酰哈巴苷对EBV感染具有明显的抑制作用。其不仅对EBV衣壳抗原具有明显的抑制作用,并且可以减轻炎症早期的毛细血管通透性亢进和渗出现象。

原核表达和制备EB病毒GST/BFRF3融合蛋白用于鼻咽癌的诊断筛查

目的:构建表达EB病毒衣壳抗原BFRF3基因的原核细胞表达载体并探讨其在鼻咽癌血清学诊断中的应用。方法:以EB病毒DNA为模版,采用PCR法扩增目的基因BFRF3,与原核表达载体PGEX-5X-1连接,构建PGEX-5X-BFRF3重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达GST/BFRF3融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE和免疫印迹法鉴定后,纯化目的蛋白作为包被抗原,制备ELISA试剂检测鼻咽癌患者和正常人群BFRF3-IgA抗体。结果:在大肠杆菌中成功地表达了GST/BFRF3融合蛋白,相对分子质量为44 kD,免疫印迹证实目的蛋白带有免疫原性,目的蛋白经纯化后作为包被抗原检测鼻咽癌患者的灵敏度和特异度分别为65%和87%。结论:采用原核表达系统成功构建并表达了GST/BFRF3融合蛋白,其在鼻咽癌血清筛选中具有诊断价值。

EB病毒抗体筛查对体检人群早期鼻咽癌的诊断价值

目的探讨3种EB病毒抗体[R反式激活因子(Rta)-IgG、早期抗原(EA)-IgA和病毒衣壳抗原(VCA)-IgA]筛查对体检人群早期鼻咽癌的诊断价值。方法联用Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA对22651例体检人群进行筛查,有一项及以上指标阳性者判定为EB病毒血清学阳性。随访观察EB病毒血清学阳性者的临床表现,对有可疑病灶者进行病理活检及影像学检查以确诊早期鼻咽癌。分析不同性别、不同年龄体检者的Rta-IgG、VCA-IgA和EA-IgA阳性检出率,以及EB病毒血清学阳性者Rta-IgG、VCA-IgA和EA-IgA三联检的阳性分布情况。根据EB病毒抗体情况对体检人群EB病毒血清学阳性者进行分层评估:Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA 3项检测指标均阳性为高危组,其中2项指标阳性为中危组,仅1项指标阳性为低危组。结果22651例体检者中共筛查出EB病毒阳性1631例,总阳性率为7.20%,其中女性阳性率(8.04%)高于男性(6.62%)(P<0.05)。不同年龄组体检者Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA的阳性检出率差异有统计学意义(P<0.05),60岁以后以上3种血清学指标的阳性检出率均明显升高。在单项指标阳性中,VCA-IgA的阳性检出率较高(56.65%),且30~40岁、51~60岁和61~70岁年龄组女性的VCA-IgA阳性检出率高于男性(P<0.05);在不同组合指标阳性中,Rta-IgG+VCA-IgA的阳性检出率较高(7.91%)。鼻咽癌低、中、高危组分别有1399例、220例、12例,分别追踪到0例、15例、11例鼻咽癌,其中Rta-IgG+VCA-IgA双阳性筛检出12例,3种抗体均阳性筛检出11例。结论联合检测Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA可从体检者中有效筛查出EB病毒阳性人群,其中具有双阳性或三阳性人群的患癌风险较高,重点随访该类人群,有助于提高鼻咽癌早诊早治效果。

表达Epstein-Barr病毒壳抗原gp125重组痘苗病毒的免疫原性

目的研究基因重组ＥｐｓｔｅｉｎＢａｒ病毒ｇｐ１２５蛋白的免疫原性。方法用表达ｇｐ１２５的重组痘苗病毒免疫中国本兔，用免疫荧光法检测免疫血清的抗体效价并研究其特异性。结果重组痘苗病毒在感染细胞内特异性地表达ｇｐ１２５，活病毒能够刺激兔产生高滴度的特异性抗体，经２次免疫，免疫荧光效价达１∶３２０。结论基因重组ｇｐ１２５和天然的该蛋白一样，有较强的免疫原性。

儿童传染性单核细胞增多症多个临床检测指标的诊断价值

目的探讨儿童传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis,IM)的检测指标的诊断价值。方法观察101例IM患儿发热天数与多种检测指标,如EB病毒DNA(DNA copies of Epstein-Barr virus,EBV-DNA)、EB衣壳蛋白(viralcapsidantigen,VCA)抗体、异型淋巴细胞、血液中WBC和ALT等指标之间的关系。结果 IM患儿的发热天数与多种检测指标的关系用散点图趋势分析提示,不同的检测指标随着发热天数变化趋势不同。IM患儿在发热早期和中期(发热8 d内),EBVDNA和IgG-VCA的检出阳性率较高(分别是77.2%和76.9%);发热后期EBV-DNA和IgG-VCA(发热12 d后)迅速下降。结论在IM患儿发热的初期和中期检测EBV-DNA和VCA的IgG抗体,有助于患儿的特异性诊断。

中草药抑制EB病毒壳抗原在体外细胞中表达的实验研究

目的 :探讨中草药对EB病毒壳抗原在体外细胞中表达的抑制作用。方法 :采用间接免疫酶法检测广西常见的300余种中草药对B95 8细胞壳抗原表达的抑制作用。结果 :发现其中20种中草药有抑制EB病毒抗原表达的作用。结论 :抑制EB病毒壳抗原在体外细胞中表达的中草药有望在鼻咽癌预防方面起一定作用。

在昆虫细胞中表达EB病毒壳抗原及其在诊断中的应用

本研究的目的是以昆虫杆状病毒为载体表达ＥＢ病毒壳蛋白的主要多肽ｇｐ１２５。用间接免疫荧光和免疫印迹技术证明表达产物的特异性。表达产物位于感染细胞的胞浆内，分子量约１００ｋＤ。用免疫Ｄｏｔ法检查感染细胞裂解物中存在的特异性表达产物的量。重组病毒裂解产物免疫小鼠后，能产生与ＶＣＡ反应的抗体。重组病毒感染的细胞为靶细胞，与Ｂ（９５－８）细胞片平行检查人血清中的ＶＣＡ／ＩｇＧ和ＶＣＡ／ＩｇＡ抗体，确定表达产物的特异性及其在检查血清抗体中的意义。

EB病毒壳抗原在大肠杆菌中的表达及纯化

本文报告对EB病毒壳抗原(VCA)带有抗原决定簇的蛋白质在大肠杆菌中的表达及其纯化。以纯化后的蛋白为抗原检测人血清中VCA/IgA抗体,鼻咽癌病人及某些急性EB病毒感染人群呈抗体阳性.而对照组呈阴性。这一结果提示VCA蛋白在鼻咽癌的普查中有应用价值。

重组EBV壳抗原BALF4蛋白的制备及其在鼻咽癌患者检测中的应用

目的:制备重组EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)壳抗原(viral capsid antigen,VCA)BALF4蛋白,并探讨其在鼻咽癌检测中的应用价值。方法:采用PCR法从EBV DNA序列中扩增BALF4基因,酵母表达载体pPICZaA连接,重组pPICZαA-BALF4载体转染GS115酵母菌,甲醇诱导重组BALF4蛋白表达并纯化。重组BALF4蛋白经SDS-PAGE、Western blotting鉴定后作为包被抗原,制备ELISA试剂,检测鼻咽癌患者EBV-IgA抗体。结果:成功构建pPICZαA-BALF4表达载体,并在GS115酵母菌中高效地表达重组BALF4蛋白。重组BALF4蛋白相对分子质量为52000,经Western blotting证实重组BALF4蛋白具有免疫原性。重组BALF4蛋白作为包被抗原,检测鼻咽癌患者和正常对照血清(各300份)中EBV-IgA抗体的灵敏度和特异性分别为81%和94%。结论:成功制备重组EB病毒壳抗原BALF4蛋白,该蛋白在鼻咽癌血清筛选具有较高的敏感度及特异性。

几种药物抑制EB病毒壳抗原在体外细胞中表达的作用

ＥＢＶ和ＮＰＣ有密切的关系，用三氮唑核苷、聚肌胞、柴胡、鱼金、板兰根、抗毒清咽合剂按不同浓度加入到能自发产生ＥＢＶ的Ｂ９５－８细胞悬液中，这几种药物均有一定的抑制细胞中ＥＢＶ－ＶＣＡ表达的能力，其中三氮唑核苷（１０μｇ／ｍｌ）、板兰根（１０ｍｇ／ｍｌ）和抗毒清咽合剂（１：１０００）则有较强的抗ＥＢＶ作用，抑制率分别达到了５５．５６％、５７．８９％和５４．１７％，而聚肌胞、柴胡、鱼金的抑制作用较弱。实验结果表明，用药物抑制ＥＢＶ的复制和表达，有可能作为控制ＮＰＣ的方法之一。

顺德地区EB病毒感染现状及影响因素分析

目的了解顺德地区人群中EB病毒的流行状况及EB病毒感染的影响因素。方法于2015年4~6月对顺德地区大良、陈村、杏坛三个镇17 727名居民进行问卷调查,采用酶联免疫吸附法检测EB病毒核心抗体IgA(NA1-IgA)、EB病毒衣壳抗体IgA(VCA-IgA)水平。采用非条件Logistic回归探讨EB病毒感染的影响因素。结果共计纳入17 581人。EB病毒NA1-IgA、VCA-IgA阳性率分别为3.23%和6.76%。EB病毒感染率为9.49%。男性的EB病毒感染风险高于女性,OR值为1.15(95%CI=1.04~1.28);与<40岁年龄组比较,40~49岁年龄组感染风险降低(OR=0.86;95%CI=0.73~1.01),而50岁以后随年龄增长,感染风险增加;与小学及以下文化程度者相比,文化程度高者感染风险降低;吸烟者与非吸烟者相比,其感染风险增高(OR=1.19;95%CI=1.01~1.39)。结论顺德地区男性EB病毒感染风险高于女性,年龄与EB病毒感染风险呈"V"型关系,高文化程度是EB病毒感染的保护因素,吸烟可能是EB病毒感染的危险因素。