非洲猪瘟病毒F334L基因编码蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

本研究通过将非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的一种非结构蛋白编码基因F334L克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ,完成重组表达质粒pCold-Ⅰ-ASFV-F334L的构建。将pCold-Ⅰ-ASFV-F334L转化受体菌感受态细胞,经1 mmol/L的IPTG诱导原核表达。SDS-PAGE和Western blot试验检测结果表明,F334L基因得到了良好的表达,将所得的F334L基因编码蛋白纯化后免疫小鼠,获得含多克隆抗体的血清。利用该抗体检测实验室构建并拯救的表达ASFV F334L基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒rPRRSV-F334L,试验结果显示该多克隆抗体具有良好的反应原性和特异性,证明了ASFV F334L基因可在PRRSV活载体中稳定表达,为ASFV活载体疫苗的研发提供了材料。

动物疫病活载体疫苗研究进展

活载体疫苗是以细菌或病毒作为载体表达外源抗原和治疗因子的载体系统,具有安全性高、毒力返祖风险低、成本低,可诱导免疫机体产生高水平的体液免疫、细胞免疫或黏膜免疫等优点,是目前最具发展潜力的基因工程疫苗之一,在动物疫病防控领域应用较多。病毒载体包括DNA病毒(如腺病毒、腺相关病毒和痘病毒等)和RNA病毒(如新城疫病毒、流感病毒等);细菌载体包括减毒致病菌与非致病菌两类,主要包括乳酸菌、沙门氏菌、大肠杆菌等。活载体疫苗常用的抗原呈递策略有载体-宿主平衡致死系统、微生物表面展示系统。多种疫苗载体的开发及抗原呈递策略的选择,使得活载体疫苗的使用价值最大化。不同载体疫苗在预防疫病方面均有不同优缺点,应根据实际情况选择最优最适合的活载体疫苗。本文综述了动物疫病防控领域的病毒和细菌活载体疫苗研究进展及其抗原呈递方式,以期为活载体疫苗的进一步研究提供参考。

水貂病毒性肠炎杆状病毒载体灭活疫苗与水貂犬瘟热活疫苗混合免疫效果评价

为评价水貂病毒性肠炎杆状病毒载体灭活疫苗(简称MEV亚单位疫苗)与水貂犬瘟热活疫苗(简称CDV活疫苗)混合免疫的效果,本研究将两种疫苗混合后在室温静置不同时间测定犬瘟热病毒(CDV)含量,并选用30只健康水貂随机分为6组进行比对试验,其中G1和G2组免疫MEV亚单位疫苗稀释CDV活疫苗的混合疫苗,G3组为CDV活疫苗单独免疫组,G4组为MEV亚单位疫苗单独免疫组,G5和G6组分别为CDV攻毒组和MEV攻毒组。免疫后21 d采血检测CDV中和抗体,同时对G1、G3、G5组进行CDV攻毒;免疫后14 d采血检测MEV血凝抑制(HI)抗体,同时对G2、G4、G6组进行MEV攻毒。结果:两种疫苗混合后在室温静置2 h, CDV含量无明显下降。免疫后21 d, G1和G3组CDV中和抗体效价达到1∶64.6~1∶128.8,CDV攻毒后混合疫苗和CDV活疫苗免疫组的保护率均为100%。免疫后14 d, G2和G4组的MEV HI抗体效价达到1∶128~1∶1 024,MEV攻毒后混合疫苗和MEV亚单位疫苗免疫组的保护率均为100%。研究表明,MEV亚单位疫苗稀释CDV活疫苗,混合免疫后各疫苗的免疫效力均不受影响。

鸡传染性喉气管炎疫苗研究进展

鸡传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis,ILT)是由喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis Virus,ILTV)引起的鸡的一种病毒性呼吸道传染病。ILT是一种较为严重的禽病毒病;根据ILT的临床表现分为急性型和温和型,急性型发病率和死亡率均较高,温和型死亡率低但在养殖密集地区感染逐渐增多。ILT可引起家禽死亡和蛋鸡产蛋率下降,给养禽业带来严重的经济损失。目前,通过使用疫苗接种和生物安全相结合的综合防控措施,在集约化养禽地区ILT已得到较好的控制。该文对多个国家已商品化的ILT减毒活疫苗和重组病毒载体活疫苗,以及正在研发中的ILT重组病毒载体活疫苗、基因缺失活疫苗、病毒样颗粒疫苗等新型ILT疫苗进行综述,以期为更好地防控ILT提供理论参考。

表达绿色荧光蛋白重组新城疫病毒LaSota疫苗株的构建

新城疫病毒是理想的新型活病毒疫苗载体，具有巨大的优势和应用前景。采用生产实践中广泛应用、免疫效果良好的NDV LaSota弱毒疫苗株，建立了反向遗传操作系统。在此基础上，进一步构建了表达绿色荧光蛋白（GFP）的重组NDV基因组cDNA克隆，成功救获了重组病毒rLaSota-EGFP，病毒F1代尿囊病毒液按1×10^4 EID50接种9—10日龄SPF鸡胚尿囊腔，接种后分别于24h、48h、72h及96h收获尿囊液，检测平均HA滴度分别为2^8、2^10.3、2^11.3和2^11，每mL尿囊液病毒量EID50分别为10^8.64、10^9.22、10^9.21和10^9.64，重组病毒与亲本株生长滴度在相近时间达到峰值，生长动力学特性与亲本株无明显差异。各代次重组病毒按1×10^6 EID50病毒量接种9—10日龄SPF鸡胚，96h内完全不致死鸡胚。救获重组病毒保持了LaSota弱毒疫苗亲本毒株对鸡胚良好的高滴度生长适应和低致病特性，并且鸡胚连续传9代次仍保持GFP的稳定表达及生物学特性不变。重组病毒rLaSota-EGFP的成功救获为开展新城疫病毒活载体疫苗研制提供了可行的技术平台。

应用于兽用疫苗研发的病毒载体研究进展

对应用于兽用疫苗研发的病毒载体,包括痘病毒载体、疱疹病毒载体、腺病毒载体、杆状病毒载体、副粘病毒载体、弹状病毒载体、甲病毒载体、冠状病毒载体、反转录病毒载体、黄病毒载体等DNA和RNA病毒载体的研究进展进行了综述,以期为我国基因工程活载体疫苗研发工作提供参考。

新型冠状病毒疫苗及治疗药物研究进展

2019年以来新型冠状病毒在全球范围内造成大量感染和死亡病例。在疫情防控中,新型冠状病毒疫苗和治疗药物起到了极大的作用。目前新型冠状病毒感染的高峰已经过去,社会也恢复了正常有序的生活节奏,但是病毒并没有消失,还有各种变异毒株在国内外流行,疫苗和治疗药物的研发仍然不可或缺。本文总结了新型冠状病毒灭活疫苗、减毒疫苗、重组蛋白疫苗、病毒载体疫苗、核酸疫苗、病毒样颗粒疫苗的特点及临床试验结果,并且综述了国内外新型冠状病毒治疗药物的研究进展。

活载体疫苗的研究进展

随着现代科学的发展与生物技术的进步,基因工程疫苗的应用日趋广泛。活载体疫苗是基因工程疫苗中最具发展意义的疫苗之一,一般具有免疫效果好、效率高、易控制、成本低、相对稳定、诱导位点专一、免疫方式简单等诸多优点。

人禽流感病毒H5N1多价重组痘苗病毒（天坛株）疫苗在小鼠中的免疫原性研究

目的 研发高效广谱的人高致病性禽流感病毒H5N1实验疫苗.方法 首先构建了含H5N1（安徽株）结构基因[血凝素（HA）、神经氨酸酶（NA）、基质蛋白M1与M2]的两个双顺反子（HAop/M2,NAop/M1）重组痘苗病毒（rTTV天坛株）疫苗,采用不同剂量（104 PFU或107PFU）或组合（疫苗单独或联合）方式于0、4周二次免疫BALB/c小鼠,初步比较分析抗原特异的体液（HA血凝抑制抗体、NA特异性抗体、中和抗体）与细胞免疫应答（IFN-γ ELISPOT）特点.结果 重组痘苗病毒疫苗可有效表达H5N1靶抗原;高剂量组的重组痘苗病毒疫苗可快速激发较强的针对各个抗原的抗体与针对血凝素与神经氨酸酶蛋白的细胞免疫应答,含血凝素蛋白的重组痘苗病毒疫苗亦可诱导明显的中和抗体;但各组重组痘苗病毒疫苗所激发的针对基质蛋白（M1,M2）的细胞免疫应答均较弱;两个双顺反子（HAop/M2,NAop/M1）重组痘苗病毒疫苗联合应用所激发的针对基质蛋白2（M2）的体液免疫应答明显强于单双顺反子（HAop/M2）疫苗单独应用.结论 本研究中制备的各组重组痘苗病毒疫苗可诱导多个抗原特异的体液与细胞免疫应答,该研究为新型H5N1疫苗的研发及免疫方案的优化奠定了基础.