浙江省猪病毒性腹泻的病原流行病学调查与综合防治方案

目的为了更好地防控浙江省猪病毒性腹泻。方法从查明猪病毒性腹泻的病原流行情况入手,对2014—2016年度从浙江省部分猪场采集的小肠组织和粪便样本进行检测,根据PEDV(porcine epidemic diarrhea virus)高度保守的N基因核苷酸序列,设计合成了1对特异性荧光定量PCR(polymerase chain reaction)引物,并建立了一种可快速、灵敏、特异性检测PEDV的荧光定量PCR方法。PEDV检测用课题组建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,TGEV、RV检测用课题组建立的荧光定量RT-PCR检测方法。结果猪小肠病变组织中的PEDV的流行率66%,TGEV的流行率28%,RV的流行率7.3%;PEDV+TGEV混合感染的流行率23.3%;PEDV+TGEV+RV混合感染的流行率5.3%;在粪便样本中,PEDV的流行率26.7%,TGEV的流行率15%,RV的流行率4%,PEDV+TGEV混合感染的流行率10%,PEDV+TGEV+RV混合感染的流行率2%。结论目前引起猪场发生腹泻的主要病原为PEDV,不管是小肠组织还是粪便样本中都是PEDV流行比例最高,PEDV和TGEV混合感染比例较高,尽管PEDV+TGEV+RV共感染的比例较低,但是还是存在混合感染。因此,必须采取加强饲养管理、完善生物安全措施,实施疫苗免疫、中药喂服,对于疫情较严重猪场试行母猪病料返饲、控制继发感染及对症治疗等综合防治方案,才能达到较好的防治效果。

多价荧光抗体监测外源病毒污染的研究

用猪瘟病毒（ＨＣＶ）、猪细小病毒（ＰＰＶ）、牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（ＢＶＤ／ＭＤＶ）、伪狂犬病病毒（ＰｒＶ）、兰舌病病毒（ＢｔＶ）、羊口疮病毒（ＯＶ）等六种病毒，多次同时或先后强化免疫猪，制取六价高免血清；用狂犬病病毒（ＲＶ）免疫兔，制取ＲＶ单价高免血清。分别用异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）标记制成荧光抗体（ＦＡ）。并按二者最佳染色价配制成七价（多价）ＦＡ。由于各病毒在其宿主细胞中复制部位和与宿主细胞相互关系各不相同，在荧光显微镜下，多价ＦＡ对其相应病毒的细胞培养物，能显示出各不相同的荧光特点，而得以检测、鉴定。用相应的多、单价高免血清作抑制染色试验，结果各病毒荧光可被一一抑制，表明了多价ＦＡ具有高度的特异性。对各病毒进行ＦＡ细胞培养物半数感染量（ＦＡ－ＴＣＩＤ５０）与常规ＴＣＩＤ５０或ＬＤ５０测定比较试验，结果前者均高于后者，表明了这种荧光抗体制剂同时具有高度的敏感性。应用多价ＦＡ，对非禽源细胞苗生产中外源病毒的污染进行了中间监测，选用了与强毒荧光无区别的７种感染的细胞作阳性参照，保证了生产单位在使用中的安全，对Ａ、Ｂ二厂生产猪瘟苗有干扰的细胞，进行抽样监测８０批，结果１３批污染ＢＶＤＶ（１６．２５％），１?

从天平平衡原理谈新的猪病

我国近年来常发和新发的一些病毒性猪病,其病毒已经在众多养猪场常在,成为了猪场内的条件性致病病原。通过三个猪体抵抗力与病原之间此消彼长的天平平衡原理事例,结合我国养猪场条件性致病病原现状,讨论了养殖过程中猪自身抗病力维护与新的猪病之间的关系。建议养猪场从业者重视猪只营养,加强精细化饲养管理,开展中草药提高免疫等方面的工作,以提高猪群的体质和抵抗力,从而减少乃至杜绝不断出现的、条件性致病的新发猪病。

牛病毒性腹泻-黏膜病的研究进展

牛病毒性腹泻-黏膜病是由牛病毒性腹泻病毒引起的一种传染性疾病。该病以发热、黏膜糜烂或溃疡、白细胞减少、腹泻、怀孕母牛流产或产畸型胎儿为主要特征。本文就牛病毒性腹泻-黏膜病的病原学、致病机理、流行现状以及防治概况等进行了综述。

2021—2022年成都市病毒性腹泻病原学监测分析

目的分析2021—2022年成都市病毒性腹泻病原学监测结果,总结肠道病毒流行规律,为肠道传染病的防控提供参考依据。方法在成华区、金牛区、金堂县和彭州市各选择2所医院作为监测哨点,各哨点自2021年4月起采集24 h排便3次及以上并伴有大便性状改变(呈稀便、水样便等),或24 h呕吐2次及以上的患者标本并开展病原学监测,监测病毒包括诺如病毒(NV)GⅠ、GⅡ型、轮状病毒(RV)A、B和C组、人星状病毒(AstV)、肠道腺病毒(AdV)、札如病毒(SaV)。实验室检测方法包括荧光PCR、多病原检测和普通PCR检测。整理分析2021—2022年肠道病毒病原学监测数据。运用SPSS 19.0软件进行统计分析,计数资料描述采用频数和率,组间比较采用Pearsonχ^(2)检验,检验水准为α=0.05,双侧检验。结果2021—2022年成都市腹泻/呕吐病人标本检测病毒总阳性率为29.84%,其中RVA、NVGⅡ和AdV的阳性率最高,分别为11.90%、9.26%和8.73%。检出1种病毒型别的占比77.41%,同时检出2种病毒型别的占比16.90%,同时检出3种病毒型别的占比4.52%,同时检出4种病毒型别的占比1.18%。不同月份的腹泻病毒的检出率不同,总体阳性检出率最高在2月,为54.32%,之后呈逐月下降趋势。男性病毒检出阳性率为27.75%,女性病毒检出阳性率为32.27%,差异有统计学意义(χ^(2)=4.15,P=0.042)。5岁及以下病毒检出阳性率为37.12%,其他年龄组病毒检出阳性率为23.52%,差异有统计学意义(χ^(2)=37.48,P<0.001)。不同职业病毒检出阳性率排前3位的是幼托儿童(41.46%)、散居儿童(36.32%)和学生(34.20%)。结论近两年来,轮状病毒、诺如病毒和肠道腺病毒是成都市病毒性腹泻的优势病原体,建议今后尤其应加强对这三类病毒的监测,开展有针对性的预防控制措施。

猪四种病毒性腹泻病原多重PCR检测方法的建立及应用

分别以猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因、猪轮状病毒(Po RV)VP6基因、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因、猪源牛病毒性腹泻病毒(BVDV)Npro基因为靶基因,参照Gen Bank上登录的基因序列,利用DNAStar和Oligo7软件设计了4对引物。采用PCR分别扩增各病毒基因,并克隆至p MD18-T载体,获得4个阳性重组质粒。以重组质粒为模板,进行多重PCR方法的优化。特异性试验检测可分别扩增出相应的病毒基因片段;敏感性试验结果显示,检测PEDV、TGEV、Po RV及BVDV质粒的最低拷贝数分别为730copies/L、547 copies/L、6.47×103copies/L、705 copies/L。应用该方法对猪场44份猪腹泻样品进行检测,结果检出15份PEDV样品,3份TGEV样品,2份BVDV样品,其中PEDV与TGEV混合感染样品2份,TGEV与BVDV混合感染样品1份。随机抽取其中2份PEDV阳性样品进行病毒分离,病毒经细胞传3代以上PCR检测均为阳性,对PCR产物测序证实为PEDV。结果表明,本研究建立的多重PCR方法具有快速、简便、特异性强、敏感度高的特点,能够对PEDV、Po RV、TGEV和BVDV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。

CRISPR/Cas9技术在猪常见病毒性疾病防控中的应用

CRISPR/Cas系统是一种存在于古生菌和细菌中重要的适应性免疫系统,CRISPR/Cas9技术可以实现对特定基因序列进行编辑,目前已经成为应用最广泛的基因编辑工具,利用其可以实现对病毒进行基因改造或解析宿主与病毒相互作用,优化疫苗生产和抗病毒动物分子育种等。猪作为我国最重要的食品动物,在国民经济和社会稳定中发挥着重要角色。非洲猪瘟疫情的暴发,使猪病毒性疾病成我国养猪业面临的主要问题,现总结了CRISPR/Cas9技术在猪常见病毒性疾病防控中应用,为猪病毒性疾病防控提供参考。