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马铃薯纺锤块茎类病毒山西分离物侵染性克隆的构建 被引量:6
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作者 白云凤 闫建俊 +3 位作者 张耀 张忠梁 冯瑞云 张维锋 《山西农业科学》 2012年第7期701-704,共4页
马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viriod,PSTVd)侵染马铃薯会严重影响薯块的产量和品质。根据PSTVd的同源序列设计引物,以山西省马铃薯感病块茎中提取的总RNA为模板,经RT-PCR方法扩增出全长cDNA片段,将其克隆到质粒pBS-T载体... 马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viriod,PSTVd)侵染马铃薯会严重影响薯块的产量和品质。根据PSTVd的同源序列设计引物,以山西省马铃薯感病块茎中提取的总RNA为模板,经RT-PCR方法扩增出全长cDNA片段,将其克隆到质粒pBS-T载体上,进行序列分析。结果表明,该类病毒全长359 nt,能通过分子内序列互补形成致密的二级结构。以该序列作为种子序列进行Blast搜索,该序列与PSTVd荷兰分离物(GenBank登陆号:AY372400.1)的序列一致性为100%。将该序列与东北株系、河北株系及已公布的弱株系(GenBank登陆号:M14814.1)、强株系(GenBank登陆号:U23058.1)、中间株系(GenBank登陆号:AY937179.1)比对,有12个核苷酸具有多态性,其中有5个发生在致病区。将线性化的质粒pBS-PSTVd及其PSTVd的体外转录产物接种番茄矮红宝的无毒苗,20 d后接种株轻微显症,RT-PCR检测均呈阳性。将RT-PCR产物测序,其结果与接种的PSTVd原序列完全一致,证实构建的PSTVd山西分离物的克隆具有侵染性。 展开更多
关键词 马铃薯纺锤块茎类病毒 山西分离物 序列分析 体外转录 侵染性克隆
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4种葡萄类病毒检测及序列分析 被引量:5
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作者 范旭东 董雅凤 +1 位作者 张尊平 任芳 《中外葡萄与葡萄酒》 2011年第3期13-17,共5页
采用苹果锈果类病毒属(Apscaviroid)保守区域设计的通用引物和4种葡萄类病毒特异引物,对采自辽宁、山东、新疆、甘肃和宁夏的48个葡萄样品进行RT-PCR检测及序列分析。结果表明,葡萄黄斑类病毒1(Grapevine yellow speckle viroid 1,GYSV... 采用苹果锈果类病毒属(Apscaviroid)保守区域设计的通用引物和4种葡萄类病毒特异引物,对采自辽宁、山东、新疆、甘肃和宁夏的48个葡萄样品进行RT-PCR检测及序列分析。结果表明,葡萄黄斑类病毒1(Grapevine yellow speckle viroid 1,GYSVd1)、葡萄黄斑类病毒2(Grapevine yellow speckle viroid 2,GYSVd2)、澳大利亚葡萄类病毒(Australian grapevine viroid,AGVd)和啤酒花矮化类病毒(Hop stunt viroid,HSVd)检出率分别为41.7%、22.9%、75%和83.3%。通用引物能够检测出大部分样品中的GYSVd1、GYSVd2、AGVd。序列分析结果显示,中国辽宁兴城GYSVd1分离物(GU170805)属于TypeⅠ,与澳大利亚TypeⅠ分离物同源性为99%,与澳大利亚及日本TypeⅡ分离物同源性为97%,与中国GYSVd3分离物及美国、日本TypeⅢ分离物同源性仅为89%,而与GYSVd2分离物同源性均在80%以下。GYSVd2扩增产物(HM211853)与其余分离物的相似性在97%以上,与两个北京分离物DQ377131和DQ377129最为相似,相似性为99%。辽宁AGVd分离物(HM211854)与其他分离物同源性都在97%以上。山东HSVd分离物(HM357802)与北京、日本葡萄分离物的同源性均在98%以上,与德国葡萄分离物同源性为97%,与马铃薯、啤酒花、柑橘等其他作物上的分离物同源性为97%以下。 展开更多
关键词 葡萄类病毒 RT-PCR检测 序列分析
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用CEV直接感染柑桔愈伤组织的接种方法的研究
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作者 陈纯贤 万蜀渊 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第6期331-334,共4页
根据CEV机械传染及高温诱导发病的特性,用三种方法直接接种柑桔愈伤组织,结合形态学观察、增殖率比较和电泳检测,结果表明,带毒切伤浸泡是CEV离体感染柑桔愈伤组织的有效方法。30℃培养条件下,感染CEV的愈伤组织大约在... 根据CEV机械传染及高温诱导发病的特性,用三种方法直接接种柑桔愈伤组织,结合形态学观察、增殖率比较和电泳检测,结果表明,带毒切伤浸泡是CEV离体感染柑桔愈伤组织的有效方法。30℃培养条件下,感染CEV的愈伤组织大约在8d后发生明显褐变,并会逐渐加深,同时,感染后的愈伤组织的质地也趋坚硬,且表现出特殊的病理生长特性,前期(0—20d)显著地较健康对照生长快,后期(20—40d)则明显减缓甚至停止生长。 展开更多
关键词 柑桔 裂皮病 类病毒 柑桔 愈伤组织 接种
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引起葡萄黄化类症状的病毒和类病毒RT-PCR检测 被引量:3
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作者 赵静静 乾义柯 +3 位作者 颉超 郭庆元 胡白石 陆平 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1099-1104,共6页
【目的】明确引起新疆葡萄黄化类症状的病毒及类病毒种类,分析其单病毒和复合感染情况,为葡萄病毒及类病毒的防治提供重要的理论依据和有效的检测技术。【方法】利用已报道的6对特异性引物(GRSPa V-RSP48/49、GFKV-L630/U279、GLRav2-V2... 【目的】明确引起新疆葡萄黄化类症状的病毒及类病毒种类,分析其单病毒和复合感染情况,为葡萄病毒及类病毒的防治提供重要的理论依据和有效的检测技术。【方法】利用已报道的6对特异性引物(GRSPa V-RSP48/49、GFKV-L630/U279、GLRav2-V2d CPf2/V2CPr1、HSVd-f/r、GYSVd1-f1/r1和GYSVd2-f2/r2)分别对新疆不同地区黄化类症状的葡萄病样进行RT-PCR检测,并对各引物的扩增产物进行序列分析。【结果】3种病毒及3种类病毒(GRSPa V、GFk V、GLRa V-2、GYSVd2、GYSVd1和HSVd)在新疆葡萄中均有不同程度的感染,其感染率分别为36.1%、51.4%、48.6%、37.5%、37.5%、94.4%;72个病样中,2种以上病毒或类病毒复合感染率约为75%,6种病毒或类病毒复合感染率为10%以上。【结论】可侵染新疆葡萄引起黄化类症状的病毒和类病毒可达6种,且复合感染较为普遍。 展开更多
关键词 葡萄 病毒 类病毒 RT-PCR检测
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我国苹果主要类病毒的研究现状 被引量:3
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作者 吴然 徐秋良 《河北科技师范学院学报》 CAS 2017年第4期27-30,55,共5页
概述了我国发生在苹果上且已明确鉴定的3种类病毒的特性,这些类病毒包括苹果锈果类病毒(ASSVd)、苹果凹果类病毒(ADFVd)和苹果皱果类病毒(AFCVd)。阐述了鉴定这些苹果类病毒病所需的检测方法,包括指示植物法和分子生物学技术等。
关键词 苹果 类病毒 检测技术 研究现状
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枸杞马铃薯纺锤块茎类病毒的鉴定
6
作者 樊云芳 董雅凤 +4 位作者 黄婷 秦小雅 梁晓婕 秦垦 范旭东 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期748-752,共5页
0 引言枸杞(Lycium Linn.)属于茄科枸杞属落叶灌木,为药食兼用植物,具较高的药用和食用价值,是我国传统中药材和重要的经济作物[1]。随着枸杞产业的快速发展,需求量逐年增加,人们对枸杞品质的要求也越来越高。病毒是植物常见病原物的一... 0 引言枸杞(Lycium Linn.)属于茄科枸杞属落叶灌木,为药食兼用植物,具较高的药用和食用价值,是我国传统中药材和重要的经济作物[1]。随着枸杞产业的快速发展,需求量逐年增加,人们对枸杞品质的要求也越来越高。病毒是植物常见病原物的一种,病毒感染寄主后会利用寄主成分进行复制,通常会引起寄主生长缓慢、树势衰退、果实品质下降等问题。 展开更多
关键词 Lycium Linn. viriod GENOME genetic variation
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啤酒花潜隐类病毒RNA提取方法及检测技术的研究 被引量:1
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作者 连海燕 李建光 +4 位作者 赵晓丽 吕玉峰 孙宁 邓丛良 许志春 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期288-296,共9页
本研究采用纳米磁珠提取法(Magnetic Nanoparticles,MNP)、改良的Li Cl沉淀法、CTAB法、TRIzol法和RNeasy Plant M ini Kit 5种方法提取感染啤酒花潜隐类病毒(Hop latent viroid,HLVd)的啤酒花叶片总RNA,结果显示Li Cl沉淀法、CTAB法和M... 本研究采用纳米磁珠提取法(Magnetic Nanoparticles,MNP)、改良的Li Cl沉淀法、CTAB法、TRIzol法和RNeasy Plant M ini Kit 5种方法提取感染啤酒花潜隐类病毒(Hop latent viroid,HLVd)的啤酒花叶片总RNA,结果显示Li Cl沉淀法、CTAB法和M NP法提取的RNA的质量较好,而M NP法具有提取时间短、操作简便,环境友好和批量提取的优势,适用于啤酒花潜隐类病毒RNA的快速提取。体外转录制备HLVd RNA标准品,利用实时荧光定量RT-PCR绘制标准曲线,并对其特异性、灵敏度进行评估。应用纳米磁珠提取啤酒花总RNA,结合实时荧光RT-PCR技术,建立了HLVd的快速、高效的M NP-RT-q PCR定量检测方法。 展开更多
关键词 类病毒 提取方法 实时荧光定量RT-PCR
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