不同方法抽提血清HBVDNA得率的比较

目的 比较不同的HBVDNA抽提方法对PCR产物量的影响。方法 将HBVDNA阳性血清及投入了HBVDNA质粒的HBVDNA阴性血清 ,分别采用 7种不同方法抽提核酸。抽提物作PCR后 ,产物行琼脂糖凝胶电泳 ,并对阳性扩增条带进行密度定量。结果 血清直接煮沸法、经典的蛋白酶裂解加酚 /氯仿抽提法、蛋白酶裂解加酚 /氯仿抽提法省缺乙醇沉淀和柱抽提法的HBVDNA抽提得率分别为 75 .2 %、13.8%、2 1.9%和 31.0 %;用碱变性裂解和蛋白酶裂解后煮沸所得上清液 ,以及血清直接作为模板 ,行PCR后不能得到阳性扩增条带。结论 核酸抽提方法选择不当能直接影响基因检测的灵敏度 ,导致基因定量准确性下降。血清直接煮沸法抽提HBVDNA得率高、操作简便、省时和经济 ,值得推荐。

计算机病毒的预防和杀毒策略

针对计算机病毒的种类,常见的传播方式,命名规则以及命名解释进行了介绍,并根据其传播方式,介绍了相应的防毒措施和有效的顽固性病毒杀毒策略。按照所介绍的知识,能够防止绝大部分病毒对网络计算机的入侵,并能够在杀毒软件无效的情况下,对顽固性病毒进行彻底地查杀。

如何有效预防及解决U盘病毒

U盘病毒是通过感染配置文件autorun.inf来发作,并经过网络和硬件两种途径传播,其种类有柯南头、随机8位数、回收站等病毒,症状表现为每个盘根目录下都有autorun.inf文件,且双击打不开盘。其病毒以预防为主,解决办法是查、杀、清理非法文件和进程,顺藤摸瓜,揪出祸根。

Ⅱ型圆环病毒山东泰安株的分离鉴定及系统进化分析

采用双抗体夹心ELISA方法和PCR技术对来自山东泰安的病猪组织病料进行猪Ⅱ型圆环病毒（PCV2）检测。将检测为阳性的病料悬液接种无PCV1污染的PK-15细胞进行病毒分离,获得一株PCV2,命名为猪Ⅱ型圆环病毒山东泰安株（PCV2 sdt）。间接免疫荧光试验（IFA）检测可见接种病毒细胞中散在特异性荧光。提取全基因组为模板,进行病毒基因组1号开放阅读框（ORF1）、2号开放阅读框（ORF2）和全基因组序列扩增,得到长度分别约为999bp、749bp和1767bp左右的产物条带。将产物克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒pMD18-T-ORF1、pMD18-T-ORF2和pMD18-T-PCV2。测序结果显示,所分离病毒的ORF1、ORF2和全基因组序列长度分别为945bp、702bp和1767bp。DNAStar生物学软件分析发现,PCV2分离毒株与参考株的全基因组同源性介于95.4%-98.8%之间,ORF1的同源性介于97.0%-98.8%,ORF2的同源性略低,介于91.9%-98.4%之间。

SD-265法用于改善新冠相关被隔离者睡眠的探讨和思考

新型冠状病毒肺炎自报道以来已经在世界范围广泛流行,集中隔离或居家隔离是疫情防控中十分重要的组成部分,现有研究表明大量被隔离者睡眠质量下降。SD-265法是一种中医与现代睡眠医学结合的灵活有效的方法,是在“天人合一、阴平阳秘”的思想指导下,充分考虑环境和人体的昼夜特点。结合中药药物剂型合理转换应用、传统功法和现代睡眠医学的认知行为治疗形成的一套以中医整体观为指导,突出医患互动治疗为特点的睡眠紊乱干预方法。将此方法应用于改善被隔离者睡眠获得较好的疗效,值得进一步研究完善和推广应用。

猪圆环病毒2型的分离鉴定及高免卵黄抗体的研制

为制备猪圆环病毒2型(PCV2)特异性高免卵黄抗体(IgY),本研究首先对2017年~2018年河南部分地区规模化养猪场采集的19份疑似感染PCV2猪的病料样品进行PCR检测,对阳性样品进行PCV2全基因组测序分析、病毒分离鉴定、制备灭活疫苗免疫蛋鸡并制备其IgY,对制备的IgY经中和试验检测其中和活性。比较氯仿法与水稀释-硫酸铵沉淀法制备的IgY的纯度差异。结果显示,河南省部分地区的PCV2阳性率为63.2%(12/19)。PCV2全基因组序列分析显示,12株PCV2之间的同源性为96.9%~100%,与其它PCV2代表株之间的同源性为95.1%~99.9%。遗传进化分析显示,8株PCV2属于PCV2d亚型,4株属于PCV2b亚型。病毒分离结果显示,7份阳性样品可以分离出病毒,其中一株病毒效价达106.5 TCID50/mL。用该株病毒制备的PCV2灭活疫苗免疫蛋鸡能够诱导其产生较高水平的特异性IgY。中和试验结果显示,该IgY对PCV2具有较高的中和活性,中和效价达1:181。此外,通过比较氯仿法和水稀释-硫酸铵沉淀法制备IgY的效果显示,两种方法均较为理想,但前者获得的样品纯度更高。本研究为进一步开展IgY抗PCV2研究奠定了基础。

分泌抗丙型肝炎病毒NS_5蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

目的建立能稳定分泌抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５重组蛋白单克隆抗体（ＭｃＡｂ），并对其生物学活性进行实验室鉴定。方法用重组ＨＣＶＮＳ５区蛋白为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０进行融合，经有限稀释克隆３次后制备分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株，并用酶免疫（ＥＩＡ）法对其分泌抗体进行初步鉴定。结果融合后的阳性克隆中筛选出６株能稳定分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株，命名为２Ｃ８，２Ｄ２，１Ｄ６，２Ｇ２，１Ｆ５和１Ｆ１０。这６株ＭｃＡｂ与ＮＳ５重组抗原均有良好的反应性，杂交瘤培养上清的ＥＩＡ抗体滴度为１∶４００～１∶１６００，其中１株诱生的同系小鼠腹水滴度为１∶８００００。这６株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ１亚型。结论该ＭｃＡｂ的制备，可为ＨＣＶ感染者血清和肝组织中抗原检测方法的建立和生物工程药物的研制创造条件。

猪圆环病毒2型检测技术及研究进展

本研究对近年来猪圆环病毒2型(PCV2)抗体检测技术的研究进展进行了综述,旨在为未来的研究方向提供参考。猪圆环病毒2型是一种单股环状负链DNA病毒,具有较强的致病性,可通过呼吸道、消化道进行传播,以及由母猪传给胎儿,猪被感染后可直接导致猪群的免疫力下降,引发猪的多种疾病症状,给养猪户带来了很大的经济损失。因此,PCV2病毒感染早期诊断对猪的多种疾病综合防控意义重大,同时可保证猪肉类食品质量安全性。目前,北京、上海、南京等大城市已开始实行部分农产品市场准入制,不符合食品安全标准的各类肉、禽、畜产品将被拒绝上市销售,从而使得以便捷、及时为特点的检测方式得到快速发展。

大麻病毒与6.4病毒的交感染及其解毒方法

近年来,计算权病毒的危害已为人所共知,有关单体病毒的致病原理及解毒方法在许多书刊中都有报导,但病毒的交叉感染问题却鲜见详细而具体的论述.本文以大麻病毒和6.4病毒在硬盘交叉感染为例,论述病毒交叉感染的原理及解毒方法.

荧光定量PCR在甲型流感病毒检测中的应用

目的:研究并分析荧光定量PCR在甲型流感病毒检测中的应用。方法:将2018年2月~2018年12月我院网络实验室接受135名疑似甲型流感的呼吸道标本作为研究对象,收集标本135份,分别采用荧光定量PCR、病毒分离培养、胶体金检测法检验,对比检验结果。结果:检测结果显示荧光定量PCR法阳性率为70.37%,胶体金检测法阳性率为61.48%,病毒分离培养法阳性率为59.26%。与荧光定量PCR法相比,胶体金检测法灵敏度是82.11%,特异度是87.50%,病毒分离培养法的灵敏度是84.21%,特异度为100%。结论:荧光定量PCR法灵敏度、准确性显著高于股体金检测法与病毒分离培养法,应用荧光定量PCR检测甲型流感病毒古确性与及时性好,该种检测方式值得在临床中进行推广与使用。

牛呼吸道合胞体病毒检测方法的研究进展

牛呼吸道合胞体病是牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)引起的呼吸道疾病,为一种急性、热性、高度传染性疾病。BRSV的感染率高,死亡率低,常继发性细菌感染。我国BRSV血清阳性率为41.2%~94.4%,鉴于国内无BRSV有效的疫苗及药物,为了控制BRSV的传播和高效诊断,便于各类兽医机构选择合适的检测方法,本文就现有的BRSV的分离鉴定技术、RT-PCR、荧光定量RT-PCR、纳米RT-PCR、逆转录恒温隔绝式RT-PCR(ii RT-PCR)、巢式PCR、环介导等温扩增技术(LAMP)、基因组测序技术、免疫组织化学(IHC)、直接免疫荧光试验(d-FAT)、病毒中和试验(VNT)、间接ELISA、双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)等检测技术予以综述。

鸡胚分离不同型别流感病毒的敏感性分析

目的了解不同流感病毒型别鸡胚培养的敏感性及分离毒株的生物学特征。方法将流感病例呼吸道标本核酸检测阳性者接种SPF鸡胚,用红血球凝集试验判定分离结果并测定病毒滴度,以血凝抑制试验鉴定毒株型别。结果 802份核酸阳性标本鸡胚分离阳性536份,阳性率66.8%,其中A(H1N1)、A(H3N2)、B和H1N1pdm2009的阳性率分别是52.3%(45/86)、4.3%(3/70)、62.4%(194/311)和87.8%(294/335);首次出现阳性的血凝滴度分别是1∶18.92、1∶15.96、1∶18.83和1∶5.93;合格(血凝滴度≥1∶8)阳性培养物传代数分别为2、2、2和3代。结论鸡胚是流感病毒A(H1N1)和B型的敏感宿主,连续传代有利于提高流感病毒的分离率和血凝滴度。

湖南柑橘衰退病调查分析及弱毒系筛选

The investigation showed that stem-pitting Citrus tristeza virus(CTV)occurred commonly in citrus production areas in several varieties of Hunan Province.Accurate detection of CTV strains was performed by p23/PCR method,PCR and the results indicated that the most samples were infected with several CTV isolates.Three mild strains were isolated and their pathogenicity was identified by biological identification,it indicated that p23/PCR groups had uniformity with the pathogenicity of CTV isolates.Furthermore,three mild isolates were tested in the cross protection by analysis of biological symptoms and composition of p23 gene.Different protecting effects were observed among these strains and W17 mild isolate was effective.

三种流感病毒检测方法的比较

目的对胶体金法、病毒分离培养法和荧光定量RT-PCR法等3种检测流感病毒方法和结果进行比较研究,筛选快速准确的检测方法,为流感监测与防控工作提供及时可靠的病原学依据。方法同时采用胶体金法、病毒分离培养法和荧光定量RT-PCR检测法对2012年深圳市龙岗区流感监测哨点医院采集的流感样病例样本进行检测,比较检测结果。结果荧光定量RT-PCR的流感病毒核酸检测阳性率为70.8%,其中98份为季节性H3N2流感病毒,51份为B型Victoria株,4份为B型Yamagata株;病毒分离培养法的阳性率为46.3%,分离出61株季节性H3N2流感病毒,35株B型Victoria株,4株B型Yamagata株;胶体金法检出率为3.7%。3种方法中,荧光定量RT-PCR的阳性率最高,病毒分离培养法次之,胶体金法阳性率最低。结论与病毒分离培养法和RT-PCR法相比,胶体金法并不适合单独用于诊断流感病毒感染,病毒分离培养法费时费力,荧光定量RT-PCR法有较高的敏感性和特异性,适用于流感疫情的病原学快速诊断。

多细胞株微量培养法在病毒性脑炎、脑膜炎患儿病原学检测的应用研究

目的探讨多细胞株微量培养法在病毒性脑炎、脑膜炎病原学检测中的应用价值。方法将脑脊液(CSF)标本过滤除菌后分别接种于含有青霉素和链霉素微量细胞培养板单层细胞上,每份标本平行接种8株细胞:MA104、MDCK、HEL、HEK293、Vero、Hep-2、Hela和BHK-21。静置培养,获得稳定的病毒株。以肠道病毒(EV)组合血清鉴定引起病毒性脑炎、脑膜炎的常见病毒类型。结果 126份病毒性脑炎、脑膜炎患儿CSF标本82份分离到病毒,阳性率63.0%,其中MA104阳性率为57.1%,MDCK阳性率为19.8%,HEL阳性率为11.9%,HEK阳性率为7.1%,Vero阳性率为6.3%,Hep-2阳性率为4.8%,Hela阳性率为4.0%,BHK-21阳性率为2.4%。病变细胞经血清学鉴定,78例鉴定出病毒株,鉴定率为92.8%,这些病毒中EV所占比例较高,为69.2%;ADV占11.5%,HSV-Ⅰ占5.1%,HSV-Ⅱ占6.4%;CMV占5.1%,INF占2.6%。结论 MA104细胞是分离CSF中病毒较敏感的细胞,可以作CSF中病原分离的首选细胞;联合多株细胞可提高细胞病变检出率。多株细胞微孔板培养法分离CSF病毒具有推广应用价值。

逆转录聚合酶链式反应快速检测水稻条叶枯病毒

逆转录聚合酶链式反应（Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ－ＰＣＲ）具有灵敏度高、准确性好的特点，因而被广泛应用于植物病毒检测．在ＲＴ反应中，ＲＮＡ 样品的快速制备尤为重要．用异丙醇二步沉淀法获得ＲＮＡ，快速检测水稻叶片中ＲＳｔＶ 的ＲＴ－ＰＣＲ 方法，可使测定时间缩短至６ ｈ，并可从０．０７８ｍ ｇ 感病叶片中检测出ＲＳｔＶ．

粪便中肠道病毒两种检测方法的应用比较

目的比较分析核酸检测和病毒分离这两种方法对健康儿童粪便中肠道病毒(enterovirus,EV)的检测结果。方法2019-08-27在凉山彝族自治州采集健康儿童粪便标本,采用实时荧光PCR法进行EV核酸检测。使用RD细胞(人横纹肌肉瘤细胞)和Hep-2细胞(人喉癌上皮细胞)对标本进行病毒分离,并运用SPSS 22.0软件对这两种方法的检测结果进行统计学分析,以P<0.05界定为差异显著。结果300份标本中,EV核酸检测与病毒分离法分别检出123例和106例阳性标本,阳性率分别是41.00%和35.33%;这两种方法的检测结果差异显著(P<0.001)。RD细胞与Hep-2细胞分别检出96例和26例阳性标本,阳性率分别是32.00%和8.67%;这两种细胞对病毒的检测结果具有显著差异(P<0.001)。结论EV核酸检测侧重于对肠道病毒进行初步筛查,而病毒分离侧重于获得病毒分离物。在实际运用中,可联合使用EV核酸检测法和病毒分离法以提高病毒分离率和准确率。