免疫蛋鸡携带新城疫病毒的调查研究

实验对江苏省某地区 2 2个免疫鸡场进行了新城疫病毒抗体随机抽样监测 ;并从所抽样的鸡只中无菌采集气管及泄殖腔棉拭子样品 ,接种非免疫鸡胚进行病毒分离与鉴定。结果表明 ,在不同新城疫病毒抗体水平的鸡群 ,均可分离到新城疫病毒 ;这提示了新城疫病毒抗体水平只能用于衡量机体的体液免疫状况 。

Effect of ultrasound with methylene blue as sound sensitive agent on virus inactivation

The goal of this paper is to explore a method for virus inactivation based on ultrasonic treatment,and on this basis,to explore the synergistic effect of methylene blue as a sonosensitizer in virus inactivation.The titer of human parainfluenza virus type 3(HPIV3),Autographacaliforinica nuclear polyhedrosis virus carried a green fluorescent reporter gene(AcNPV-GFP)and Enterovirus group D 68(EV-D68)were determined by plaque assays or TCID50 methods after treatment by MB combined with illumination(MB photochemical,MBP)or ultrasonic excitation.Different ultrasonic power and time,MB concentration gradient were set to determine the best antiviral combination.For the enveloped virus HPIV3 and AcNPV-GFP,pure ultrasonic or MBP treatment could reduce viral titer more than 104,and ultrasonic combined with MB could completely inactivate HPIV3 and AcNPV-GFP in 5min while traditional MBP methods could only reduce viral titer about 10X.For the nonenveloped virus EV-D68,pure ultrasonic or MBP treatment only reduced the viral titer about 102,but ultrasonic combined with MB treatment could reduce the viral titer about 103 in 5min and completely inactive EV-D68 in 10min(reduced 105).Compared with MBP method and pure ultrasonic inactivation,ultrasonic combined with MB has better inactivation effect on either enveloped or non-enveloped viruses,and the appropriate combination of parameters is expected to be a new blood transfusion transmitted virus inactivation method.

网状内皮组织增生病病毒特异性杂交瘤细胞培养液中单克隆抗体的效价动态

为获取网状内皮组织增生病病毒(REV)单克隆抗体的最高抗体滴度,在含10%胎牛血清的DMEM培养液中培养对REV特异性的杂交瘤细胞株11B154。每1 mL培养液中平均含0.65×106 个活细胞,于37 ℃在含7% CO2的培养箱中继续培养。在24、48、72和96 h后,每1 mL培养液中的平均总细胞数和活细胞数分别是:1.13×106和1.03×106 (活细胞占94.5%)、3.42×106和2.48×106(活细胞占72.5%)、2.6×106和0.98×106 (活细胞占37.7%)、2.47×106和0.53×106(活细胞占21.5%)。同时用细胞培养上清液对REV感染的鸡胚成纤维细胞作间接荧光抗体试验,在培养24、48、72和96 h后上清液中平均抗体效价分别是1:67、1:133、1:67及1:33。结果表明,培养48 h后,当细胞总数及活细胞总数最高但活细胞百分比开始下降时的培养液中抗体效价最高。该研究结果可作为用细胞培养方法大批量生产抗REV单抗的技术参数。

清洁级獭兔在猪瘟活疫苗质量检定中的敏感性研究

[目的]观察清洁级獭兔在猪瘟活疫苗质量检定中的敏感性,筛选出最适合猪瘟活疫苗热原检查的试验兔品种。[方法]选择清洁级日本大耳白兔、清洁级獭兔、普通级日本大耳白兔、非等级獭兔、非等级福建黄兔分别接种不同稀释度的猪瘟病毒,通过监测兔体温反应判断是否感染猪瘟病毒,从而对比出不同品种兔对猪瘟病毒的敏感性。[结果]日本大耳白兔、獭兔、福建黄兔三个品种兔对猪瘟病毒均有较高的敏感性。在低稀释度时几个品种兔的敏感性差异不显著(P>0.05);在1:3 800高稀释度时,清洁级实验兔的反应率明显优于普通级或非等级实验兔(P<0.05),而清洁级獭兔又显著高于清洁级日本大耳白兔(P<0.05),敏感性顺序为清洁级獭兔>清洁级日本大耳白兔>非等级獭兔>非等级黄兔>普通级大耳白兔。[结论]在高稀释度时清洁级獭兔敏感性最高,热原反应最稳定,是猪瘟活疫苗质量检定目标性等级试验兔,适合进行实验动物资源开发与研究。

有效分离甲型流感病毒方法的探讨

目的有效分离甲型流感病毒,提高病毒分离率。方法选择在2012年10月-2014月5月期间,经实时定量荧光PCR(real-time PCR)检测为甲型流感病毒阳性的咽拭样品,并采用MDCK细胞进行病毒分离;对血凝素(HA)滴度<8的一代培养物分别进行原倍、2倍、5倍、10倍稀释后进行传代培养,比较不同稀释度传代培养物血凝实验效果。结果 2倍稀释培养物传代培养后,血凝实验效果分别与其他3种进行比较,差异有统计学意义。结论甲型流感病毒分离中,对培养物进行2倍稀释后病毒分离效果最好。

定量PCR法在病毒滴度检测中的应用进展

定量PCR(quantitative PCR, qPCR)被广泛应用于mRNA表达、病原体检测和病毒滴定等领域, 具有快速、敏感、污染概率低和可重复的特点。此文主要对qPCR法检测各种病毒滴度的研究进展进行综述, 介绍qPCR在RNA病毒以及DNA病毒检测中的应用, 并与其他检测方法进行对比, 展现qPCR检测病毒滴度的应用前景。