重组丝氨酸蛋白酶抑制剂蛋白的密码子优化及原核表达

目的探讨重组丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)蛋白的原核表达条件,为研究其功能提供实验依据。方法通过基因重组技术,将编码Vaspin蛋白的密码子优化后插入带有His标签的pET-28a载体中,构建原核表达载体pET-28a-Vaspin,转化BL21感受态细菌,分别给予不同诱导时间(6、8、10、12、15、20 h)、不同诱导温度(32、37、42℃)、不同浓度诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)(0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mmoL·L^-1)进行培养,诱导产物经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳进行鉴定,表达出来的Vaspin蛋白进行镍离子亲和层柱纯化。结果成功构建重组Vaspin蛋白的原核表达载体,经IPTG诱导、电泳分析,在IPTG浓度为1 mmol·L^-1、诱导温度37℃、诱导时间为15 h且转化优化密码子的菌体沉淀中出现相对分子质量为48000的特异条带,与Vaspin相对分子质量一致,经His标签纯化,灰度扫描分析显示,Vaspin蛋白的纯度为95%。结论Vaspins蛋白在IPTG终浓度为1 mmol·L^-1、37℃、培养时间15 h条件下可成功表达并纯化,且该条件下实验具有重复性。