维生素D_(3)对小鼠支气管哮喘气道炎症和氧化应激反应的作用及其分子机制

目的探究维生素D_(3)(VitD_(3))在小鼠支气管哮喘气道炎症和氧化应激反应中的作用和相关分子机制。方法将28只雌性C57BL/6小鼠随机分为对照组(Ctrl)和模型组。模型组小鼠采用卵清蛋白(OVA)致敏法建立哮喘模型后,将其分为哮喘(Asthma)组、VitD_(3)处理(Asthma+VitD_(3))组和叉头盒O1(FOXO1)抑制剂AS1842856处理(Asthma+AS)组。测定各组小鼠肺阻力(LR)变化。采用ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-18的含量。Western blot检测肺组织中FOXO1和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)和凋亡斑点蛋白(ASC)的表达水平。结果与Ctrl组相比,Asthma组小鼠的LR升高(P<0.01)。与Asthma组相比,Asthma+VitD_(3)组和Asthma+AS组小鼠的LR降低(P<0.05),Asthma+VitD_(3)组与Asthma+AS组小鼠的LR变化差异无统计学意义。与Ctrl组相比,Asthma组、Asthma+VitD_(3)组和Asthma+AS组小鼠BALF中TNF-α、IL-1β与IL-18含量均增加(P<0.01),肺组织中NLRP3、Caspase-1和ASC蛋白表达水平均升高(P<0.01);与Asthma组相比,Asthma+VitD_(3)组和Asthma+AS组小鼠BALF中上述炎症因子含量均减少(P<0.05),肺组织中NLRP3、FOXO1、Caspase-1和ASC蛋白表达均降低(P<0.05);与Asthma+VitD_(3)组相比,Asthma+AS组中除FOXO1蛋白表达水平升高外(P<0.05),上述其他检测指标差异均无统计学意义。结论VitD_(3)可减轻OVA诱导的小鼠哮喘症状,改善气道炎症程度和降低氧化应激水平,且其机制可能与FOXO1/NLRP3轴的下调有关。

1,25(OH)_(2)D_(3)及VDR敲除对山羊附睾头上皮细胞β防御素家族表达的影响

旨在研究1,25(OH)_(2)D_(3)是否通过VDR途径调节山羊附睾头上皮细胞β防御素基因表达。本试验选取3只6月龄太行黑山羊,分别采集附睾头组织。采用差速贴壁法分离山羊附睾头上皮细胞,用细胞免疫荧光鉴定上皮细胞纯度。添加100 nmol·L^(-1)1,25(OH)_(2)D_(3)处理附睾头上皮细胞以及筛选出敲除效率最高的pCas9/gRNA1质粒载体进行细胞转染,同时设置阴性对照组和空白对照组,每组3个重复孔。附睾头上皮细胞经1,25(OH)_(2)D_(3)处理以及VDR基因敲除后,分别用qRT-PCR检测VDR和17种β防御素基因的表达,用Western blot检测VDR蛋白和3种β防御素蛋白的表达。结果表明,1,25(OH)_(2)D_(3)能极显著提高VDR、gBD124、gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.01),同时极显著提高gBD104、gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD113、gBD116、gBD120、gBD 121以及gBD 123基因的表达(P<0.01),显著提高gBD106、gBD127、gBD 129以及gBD 134基因的表达(P<0.05),而对gBD 110like和gBD 128基因没有显著影响(P>0.05);3个基因敲除载体进行细胞转染后,pCas9-VDR-V1组VDR蛋白表达极显著降低(P<0.01)。VDR基因敲除极显著降低gBD124的mRNA和蛋白表达(P<0.01),显著降低gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.05),同时VDR基因敲除组gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD116、gBD123、gBD127、gBD 128以及gBD 134基因的表达极显著低于其他组(P<0.01),VDR基因敲除组gBD104、gBD106、gBD 120以及gBD 129基因的表达显著低于其他组(P<0.05),而对gBD121、gBD 110like以及gBD 113的相对表达则无显著影响(P>0.05)。综上所述,1,25(OH)_(2)D_(3)可以上调VDR和部分β防御素表达;VDR基因敲除后降低部分β防御素表达,结果表明1,25(OH)_(2)D_(3)通过上调VD/VDR信号通路关键基因VDR的表达调控山羊附睾头上皮细胞部分β防御素表达。

维生素D_(3)在移植免疫中的应用进展

维生素D_(3)是维持人体正常生理功能的重要维生素,其代谢物及类似物具有强大的抗炎活性。维生素D_(3)可在人体内活化转化为类固醇激素1α,25-二羟维生素D_(3),而1α,25-二羟维生素D_(3)可以激活转录因子维生素D受体,参与细胞代谢的调控,发挥免疫调节作用,这对维持机体生理健康至关重要。目前,越来越多的研究认为1α,25-二羟维生素D_(3)在器官移植免疫调节及耐受中具有重要作用。因此,本文就1α,25-二羟维生素D_(3)的概述及生理作用、维生素D_(3)的免疫调节作用及维生素D_(3)在临床器官移植中的应用进行综述,总结维生素D_(3)在诱导移植免疫耐受中的应用价值,以期为促进维生素D_(3)在移植免疫中的应用提供参考。

基质金属蛋白酶-3和维生素D受体的基因多态性与腰椎间盘退变的易感性

目的探索基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和维生素D受体(VDR)的基因多态性与腰椎间盘退变的关系。方法采用病例对照研究方法,以CT确诊腰椎间盘退变患者178人为病例组,随机选择体检人员中无腰背痛史且腰椎功能正常者284人为对照。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法分析MMP-3和VDR的基因多态性。结果MMP-3和VDR-Apa的等位基因5A和A在病例组中的分布明显高于对照组(P<0.05),其OR值分别为1.96和1.70。而VDR-Taq的等位基因t在两组间分布没有统计学差异(P>0.05)。分层分析显示男性腰椎间盘退变仅与MMP-3基因多态性有关,而女性则与MMP-3和VDR-Apa基因多态性均有关。叉生分析显示MMP-3的等位基因5A和VDR-Apa的等位基因A同时存在对腰椎间盘退变有交互促进作用。结论MMP-3和VDR-Apa的多态基因型是腰椎间盘退变的危险基因。

VDR和GLi1在前列腺癌细胞PC-3中的表达及其相关性

目的初步探讨慢病毒携带sh RNA-VDR载体干扰前列腺癌PC-3细胞中VDR基因对GLi1的影响。方法依照PC-3细胞的培养条件培养细胞;采用荧光定量PCR法和免疫细胞化学SP法检测PC-3细胞中VDR、GLi1两个基因表达情况;对PC-3细胞病毒侵染进行效率评价;运用RT-PCR法检测PC-3细胞VDR基因干扰效果及Gli1转录水平改变情况。结果细胞培养:拍照记录细胞状态:PC-3细胞生长状态良好,以4 d为1周期进行传代;荧光定量PCR法和免疫细胞化学SP法显示VDR、GLi1均在PC-3细胞中表达;慢病毒侵染效率显示为按照1∶10的比例向PC-3细胞加入LV3-NC慢病毒时,细胞侵染效率最好,约为95%左右;RT-PCR显示:VDR-sh RNA慢病毒成功干扰VDR表达,在VDR-sh RNA慢病毒转染72 h后与对照组相比实验组VDR基因转录水平下降85%(P<0.05),同时实验组GLi1基因转录水平与对照组相比上升9%(P<0.05);而当转染96 h后实验组VDR基因转录水平与对照组相比下降99%(沉默),同时实验组GLi1基因转录水平与对照组相比上升248%(P<0.05)。结论所培养的PC-3细胞状态较好;VDR和GLi1基因在PC-3细胞中均表达;慢病毒按照1∶10的比例侵染PC-3效率最高;当VDR被干扰后GLi1表达增高,因而在前列腺癌细胞中维生素D可抑制Hh信号通路可致GLi1表达下调。

原发ITP患者外周血维生素D_(3)水平与维生素D受体表达的相关性研究

目的研究成人原发免疫性血小板减少症(ITP)患者血清中25-羟维生素D_(3)[25-(OH)-D_(3)]、维生素D活性指标与维生素D受体表达的相关性。方法选择开滦总医院2017年1月至2019年12月收治的30例ITP患者作为研究对象,设为ITP组;选择同期来院体检的30例健康体检者作为对照组,抽取外周血,检测血清中25-(OH)-D_(3)和1,25-二羟基维生素D_(3)(1,25-(OH)_(2)-D_(3))水平,并采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测外周血中维生素D受体(VDR)mRNA的表达,进行分组比较,采用Pearson分析法分析血清中25-(OH)-D_(3)、1,25-(OH)_(2)-D_(3)水平与VDRmRNA的相关性。结果ITP组25-(OH)-D_(3)、1,25-(OH)_(2)-D_(3)水平均低于对照组[(10.36±1.86)vs(13.74±2.73)]ng/mL、[(68.25±9.80)vs(88.09±11.72)]pg/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组VDRmRNA的表达量为1.051±0.148,ITP组VDRmRNA的表达量为1.593±0.185,ITP组VDRmRNA的表达量高于对照组,差异有统计学意义(t=12.844,P<0.001)。25-(OH)-D_(3)、1,25-(OH)_(2)-D_(3)水平与VDRmRNA表达均呈负相关(r=-0.592,-0.486,P=0.017,0.028)。结论成人ITP维生素D活性指标与维生素D受体表达水平与健康人群比较存在异常,且25-(OH)-D_(3)、1,25-(OH)_(2)-D_(3)水平与VDRmRNA表达均呈负相关,提示其可能参与了ITP的发生,维生素D可能对ITP有一定的治疗治疗效果。

活性维生素D3通过VDR/mTOR途径调节高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖、纤维化和自噬

目的研究活性维生素D3(VD3)对高糖介导的系膜细胞增殖、纤维化及自噬水平的影响及其相关作用机制。方法体外培养HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞,转染小干扰RNA(siRNA)沉默细胞中维生素D受体(VDR),反转录PCR和Western blot实验检测干扰效率;将培养系膜细胞分为正常葡萄糖培养组、高糖组、高糖联合VD3组、敲低VDR后高糖联合VD3组、高糖联合VD3和mTOR激活剂MHY1485组;噻唑蓝(MTT)法和乙炔基脱氧尿苷(EdU)法检测系膜细胞增殖,ELISA检测纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(Col1)和Ⅳ型胶原蛋白(Col4)的分泌水平,透射电镜检测各组系膜细胞自噬体数量变化,免疫荧光细胞化学染色检测系膜细胞中自噬标志分子微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达,Western blot法检测系膜细胞纤维化相关蛋白转化生长因子β1(TGF-β1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和P62蛋白的表达以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)磷酸化水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。结果转染si-VDR后HBZY-1细胞中VDR mRNA和蛋白表达水平明显下调;与正常糖组相比,高糖组、高糖联合VD3组、敲低VDR后高糖联合VD3组和高糖联合VD3和mTOR激活剂MHY1485组系膜细胞的增殖能力、细胞因子FN、Col1和Col4的表达水平均显著增加,且细胞中p-mTOR、TGF-β1、α-SMA、P62的蛋白表达水平均显著增加,而LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显降低,自噬体数量显著降低;其中高糖联合VD3组较高糖组、敲低VDR后高糖联合VD3组、高糖联合VD3和mTOR激活剂MHY1485组的上述检测指标的变化趋势明显降低,后三组无明显差异。结论抑制VDR的表达或提高mTOR活化水平能有效抵消活性VD3抑制高糖介导的系膜细胞增殖及纤维化水平增加和自噬水平降低的效应。

鸭油甘油二酯与维生素D3协同对肥胖SD大鼠器官指数、血液25羟基维生素D3含量、胫骨发育指标及肝脏维生素D受体和过氧化酶体增殖物激活受体α基因表达量的影响

本试验旨在研究鸭油甘油二酯与维生素D3协同对肥胖SD大鼠器官指数、血液25羟基维生素D3含量、胫骨发育指标及肝脏维生素D受体(VDR)和过氧化酶体增殖物激活受体α(PPARα)基因表达量的影响,以探索鸭油甘油二酯与维生素D3的协同作用。试验选取60只雄性SD大鼠,随机分为4个组(对照组、肥胖模型组、维生素D3组、鸭油甘油二酯+维生素D3组),每组3个重复,每个重复5只。1~3周,对照组饲喂基础饲粮,其他各组饲喂高脂饲粮进行肥胖造模;4~6周,造模成功后,对照组饲喂基础饲粮,肥胖模型组饲喂高脂饲粮,维生素D3组、鸭油甘油二酯﹢维生素D3组在高脂饲粮中添加12.5μg/kg维生素D3,鸭油甘油二酯+维生素D3组灌胃1mL/(kg·BWd)鸭油甘油二酯,其他各组灌胃等量的蒸馏水。试验期6周。结果表明,与肥胖模型组相比:1)鸭油甘油二酯与维生素D协同能够显著降低肝脏指数(P<0.05),对心脏、脾脏、肾脏指数无显著影响(P>0.05);2)鸭油甘油二酯与维生素D3协同能够显著升高1、2、3周末的血液25羟基维生素D3含量(P<0.05);3)鸭油甘油二酯与维生素D3协同能够显著提高胫骨的骨密度、骨强度(P<0.05),显著降低血液骨源性碱性磷酸酶活性(P<0.05);4)鸭油甘油二酯与维生素D3协同能够显著上调肝脏VDR和PPARα基因表达量(P<0.05)。由此可见,鸭油甘油二酯与维生素D3协同能够降低肥胖大鼠肝脏指数,提高血液25羟基维生素D3含量,上调肝脏VDR和PPARα基因表达量,促进胫骨发育。

维生素D_3受体对hsp90β基因表达的调控作用

鉴于热休克蛋白９０β（ｈｓｐ９０β）基因内含子中含有维生素Ｄ３受体（ＶＤＲ）结合位点，为探讨作为核受体家族成员的ＶＤＲ是否对核受体特异分子伴侣的ｈｓｐ９０β基因的表达具有调控作用，我们开展了本项研究。分别将野生型ＶＤＲ、含Ｎ端（１～１３３氨基酸残基）及Ｃ端（２８１～４２７氨基酸残基）片段的ＶＤＲ突变体真核表达质粒与人ｈｓｐ９０β基因调控片段（－１０３９／＋１５３１）介导的氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）报告基因质粒共转染Ｊｕｒｋａｔ细胞，检测正常及经热休克（４２℃，１ｈ）处理后细胞裂解液中ＣＡＴ活性。结果表明ＶＤＲＮ端增强、而Ｃ端抑制ｈｓｐ９０β的组成性表达；在热诱导条件下野生型ＶＤＲ对ｈｓｐ９０β的表达有一定的抑制作用，而其Ｃ端片段的抑制较强。为进一步研究ＶＤＲ对细胞内源性热休克基因表达的影响，我们用ＲＴＰＣＲ方法研究了ＶＤＲ的对细胞内ｈｓｐ９０β基因ｍＲＮＡ水平的影响，发现ＶＤＲ过表达对ｈｓｐ９０β的热诱导表达明显抑制。结果提示ＶＤＲ对ｈｓｐ９０β基因的组成性和热诱导表达的调控机制不同。

维生素D_3辅助治疗儿童重症哮喘可降低血清TLR4、S100β蛋白水平以及延缓哮喘复发

目的:探讨维生素D_3辅助治疗儿童重症哮喘的疗效以及对血清Toll样受体4(TLR4)、神经生化标志物S100β表达的影响。方法:将96例重症哮喘患儿随机分为对照组和观察组,每组48例。对照组给予糖皮质激素、气道解痉等药物,观察组在其基础上联合维生素D_3,观察并比较两组患儿的症状、体征消失时间,肺功能指标,以及两组患儿血清TLR4、S100β表达情况。同时,对患儿进行1年随访,观察其哮喘复发情况。结果:治疗9 d后,两组患儿治疗后肺功能指标FEV1、FEV1/FVC、FEF25%及FEF50%较治疗前均有明显改善(P<0. 05),且观察组肺功能指标改善程度优于对照组(P<0. 05);两组患儿治疗后血清TLR4、S100β蛋白水平较治疗前均降低(P>0. 05),观察组治疗后血清TLR4、S100β蛋白水平低于对照组(P<0. 05);此外,观察组患儿哮喘首发与复发间隔时间(11个月)明显长于对照组的中位复发时间(9个月)(P<0. 05)。结论:与常规的甲泼尼龙治疗方案相比,甲泼尼龙联合维生素D_3的药物联合治疗方案能够有效恢复患儿肺功能,并降低TLR4及S100β蛋白的水平,减轻哮喘造成患儿的炎症反应及脑损伤,延长复发时间间隔,启示着该治疗方案可能成为重症哮喘患儿较好的治疗手段。

维生素D_3、9-顺式维甲酸及其相应核受体对hsp90β基因表达的调控

目的 研究维生素 D3(VD3)、9-顺式维甲酸 (9- cis- RA)及其相应核受体对 hsp90 β基因表达的调控作用。方法 采用 DEAE- Dextran方法将人 hsp90 β基因调控片段 (- 10 39bp/ +15 31bp)介导的荧光素酶 (L uc)报告基因质粒 β1.11转染 Jurkat细胞 ,并用 VD3和 9- cis- RA分别或同时刺激细胞 ,或将质粒 β1.11及野生型维生素D3受体 (VDR)或 /和维甲酸 X受体 α(RXRα)真核表达质粒共转染 Jurkat细胞 ,检测细胞裂解液中荧光素酶活性 ;用 Western印迹分析方法检测经 VDR真核表达质粒转染或用 VD3和 9- cis- RA刺激的 Jurkat细胞中内源性Hsp90β蛋白的改变 ;通过电泳迁移率变更分析 (EMSA)实验 ,检测 VDR和 RXR能否与含有 hsp90β基因第一内含子中维生素 D3应答元件 (i VDRE)的双链寡核苷酸片段发生特异结合。结果 VD3和 9- cis- RA可分别低水平诱导hsp90β基因表达 ,而两种配体同时加入有协同作用。 VDR或 RXRα分别转染只能较弱地抑制 hsp90β基因表达 ,二者共转染能增强其抑制作用。 EMSA实验证实 ,VDR和 RXR都可特异结合于 i VDRE上。结论 VD3和 9- cis- RA这两条信号途径共同参与 hsp90β基因的启动子活性调节。

维生素D_(3)/维生素D受体与炎症性肠病相关机制研究及临床应用

炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一组病因不明的慢性复发性胃肠道免疫疾病的统称,临床上主要分为克罗恩病(Crohn’s disease,CD)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)两种类型。维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)是细胞核激素受体超家族的一员,在体内由配体维生素D_(3)(vitamin D_(3),VD_(3))激活后调控多种不同的信号通路。研究发现,肠道VDR的表达在IBD的发生发展中具有重要作用。VDR可以通过影响肠道炎症稳态、肠上皮屏障功能、肠道免疫反应与肠道菌群调节等多方面影响IBD的发生发展。临床上给予IBD患者一定剂量的膳食VD补充可以改善患者的生活质量并降低复发率。因此,VD/VDR通路与IBD的相关基础研究具有重要的临床应用价值。

1,25(OH)_(2)D_(3)通过抑制IκB/NF-κB信号通路抑制破骨细胞生成

目的研究维生素D和维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)在破骨细胞分化各阶段的作用及其机制。方法从C57BL/6小鼠四肢骨骨髓中提取原代单核巨噬细胞(bone marrow derived macrophages,BMMs),使用核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear kappa B ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stlimulating factor,M-CSF)将BMMs诱导成破骨细胞。同时使用不同浓度(0.1、10、1 000 nmol/L)的1,25(OH)_(2)D_(3)进行干预,激活VDR。采用TRAP和FAK染色、噬骨实验、q PCR和Western blot等实验分析1,25 (OH)2D3对破骨细胞生成的影响。结果 1,25(OH)_(2)D_(3)作为VDR的强激动剂,在1 000 nmol/L时能高效激活VDR,在mRNA和蛋白水平均抑制破骨细胞分化早期c-Fos和NFATc1的表达,以及抑制成熟期Cts K和MMP-9的表达(P<0.05)。1 000 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)显著下调IκBα的磷酸化水平(P<0.05),从而抑制p65的核转位与磷酸化。结论 1 000 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)显著上调VDR的表达,1,25(OH)_(2)D_(3)激活VDR可通过IκBα/NF-κB p65信号通路抑制破骨细胞分化、融合和骨吸收活性。

湿疹患儿1,25(OH)2D 3/VDR与IL-17/IL-17R的相关性分析

目的:检测湿疹患儿1,25-二羟维生素D 3[1,25(OH)2D 3]和维生素D受体(VDR),白介素-17(IL-17)和白介素-17受体(IL-17R),并探讨其相互关系。方法:采用电化学发光法检测受试者外周血1,25(OH)2D 3浓度,采用RT-PCR方法检测皮损处VDR表达,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血IL-17和IL-17R浓度。结果:湿疹患儿1,25(OH)2D 3及VDR明显低于健康儿童;湿疹患者IL-17/IL-17R的表达明显上升。结论:湿疹患儿1,25(OH)2D 3和VDR表达异常,且与IL-17/IL-17R水平相关。

靶向沉默维生素D受体基因对前列腺癌细胞迁移及侵袭性的影响

目的:探讨小干扰RNA靶向沉默维生素D受体(VDR)对前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响。方法:构建VDR-shRNA慢病毒载体,用RT-PCR和Western印迹法分别检测VDR的mRNA和蛋白表达水平;通过细胞划痕愈合实验和Transwell小室检测VDR被沉默后的PC-3细胞迁移能力和侵袭性的变化。结果:VDR-shRNA质粒显著干扰VDR表达,并成功筛选VDR-shRNA干扰稳定的细胞株;细胞划痕实验结果显示划痕愈合率VDR干扰组为59%明显低于空白对照组73.6%和LV3阴性对照组的77.8%,组间差异有显著性(P<0.05),空白对照组和LV3阴性对照组组间差异无显著性(P>0.05)。Transwell小室实验显示VDR干扰组透膜细胞数量明显低于空白对照组和LV3阴性对照组约为50%,细胞组间差异有显著性(P<0.05),空白对照组和LV3阴性对照组组间差异无显著性(P>0.05)。VDR干扰组细胞的迁移和侵袭能力明显低于对照组细胞。结论:VDR基因表达水平能影响前列腺癌细胞的迁移及侵袭能力,VDR低表达可致前列腺癌细胞迁移及侵袭能力下降。

SMURF2 regulates bone homeostasis by disrupting SMAD3 interaction with vitamin D receptor in osteoblasts

Subject Code:H06 With the support by the National Natural Science Foundation of China,a study by the research group led by Prof.Zou Weiguo(邹卫国)from the Institute of Biochemistry and Cell Biology,Shanghai Institutes for Biological Sciences,CAS demonstrates that E3ligase SMURF2maintains bone

维生素D受体激活对小鼠胆管结扎所致肝纤维化的影响及其机制

目的:探讨维生素D受体(VDR)激活对胆总管结扎(BDL)诱导小鼠肝纤维化的保护作用,并阐明其作用机制。方法:将60只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、假手术后给药组、模型组和治疗组,每组15只。假手术组小鼠开腹但不结扎胆总管,模型组小鼠双线结扎胆总管并中间离断,假手术后给药组和治疗组小鼠手术前3 d腹腔注射VDR激动剂帕立骨化醇(200 ng·kg-1,每周3次),术后继续给药5 d。术后第5天取小鼠肝脏,采用HE染色和天狼猩红染色观察小鼠肝组织病理形态表现和肝纤维化程度。二氢乙啶(DHE)染色检测小鼠肝组织活性氧(ROS)水平。Western blotting法检测小鼠肝组织中沉默交配型信息调节3(Sirt3)、8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(OGG1)、α-平滑肌蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)表达水平。结果:HE染色,假手术组和假手术后给药组小鼠肝细胞形态结构完整,无炎性细胞浸润;模型组小鼠组织中出现大量浸润的炎性细胞、点状样灶状坏死区,在肝小叶之间出现条索状的胶原沉积;与模型组比较,治疗组小鼠肝组织坏死灶面积明显缩小,炎症细胞浸润明显改善。天狼猩红染色,假手术组和假手术后给药组小鼠肝组织中仅大胆管周围存在少量的纤维化;模型组小鼠肝组织汇管区胶原沉积明显;与模型组比较,治疗组小鼠肝组织中胆管周围胶原沉积减少。DHE染色,假手术组和假手术后给药组小鼠肝组织中,仅在汇管区存在少量的红色荧光;模型组小鼠肝组织中,汇管区及大胆管周围呈现出明显增多的红色荧光;与模型组比较,治疗组小鼠红色荧光的强度降低。Western blotting法检测,与假手术组和假手术后给药组比较,模型组小鼠肝组织中Sirt3蛋白表达水平明显降低(P<0.05),OGG1、α-SMA和ColⅠ蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,治疗组小鼠肝组织中Sirt3蛋白表达水平明显升高(P<0.05),OGG1、α-SMA和ColⅠ蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:VDR激活通过上调Sirt3蛋白降低氧化应激导致的肝星状细胞(HSC)激活,缓解胆汁淤积性肝纤维化。

维生素D_3对人乳腺癌细胞株表皮生长因子受体mRNA表达的影响

目的 探讨维生素D3 对人乳腺癌细胞株细胞增殖等生物学行为的影响。方法 选用两种人类乳腺癌细胞株MCF 7及ZR 75 1,应用细胞培养及核酸分子杂交方法 ,研究使用维生素D3 以及并用三苯氧胺后 ,上述细胞株生长及表皮生长因子受体 (EGFR)mRNA表达的改变。结果(10 -10 ～ 10 -7)mol/L维生素D3 对MCF 7及ZR 75 1细胞呈现明显的抑制生长作用 ,并能抑制 (10 -9～10 -7)mol/L三苯氧胺对MCF 7细胞的刺激生长作用。低浓度 (10 -10 ～ 10 -9)mol/L维生素D3 与半数抑制浓度三苯氧胺合并使用 ,可使抑制作用进一步加强 ,并使MCF 7及ZR 75 1两细胞株的EGFRmRNA降低至对照组以下。

不同胎龄早产儿维生素D受体基因特点及其与骨矿化水平、25-羟维生素D-3相关性

目的探讨不同胎龄早产儿维生素D受体基因特点及其与骨矿化水平、25-羟维生素D-3[25-(OH)D3]的相关性。方法选取自2015年1月至2017年5月出生的早产儿720例为研究对象,按照胎龄划分为A组(28~32周,n=60)、B组(32~34周,n=160)与C组(34~36周,n=500)。测定并比较各组早产儿血清25-(OH)D3水平及骨定量超声波速度(SOS)值,分析维生素D受体基因特点及其与血清25-(OH)D3水平、骨定量SOS值相关性。结果血清25-(OH)D3水平及骨定量SOS值比较,B组、C组早产儿均高于A组,且C组高于B组,组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。B组、C组FF、Ff基因型明显低于A组,ff基因型高于A组,且C组FF、Ff基因型明显低于B组,ff基因型高于B组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。B组、C组F等位基因频率明显低于A组,f等位基因频率明显高于A组,且C组F等位基因频率明显低于B组,f等位基因频率明显高于B组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,早产儿维生素D受体基因与血清25-(OH)D3水平、骨定量SOS值呈显著负相关(P<0.05)。结论不同胎龄早产儿维生素D受体基因多态性和血清25-(OH)D3、骨矿化水平密切相关。维生素D受体基因多态性和维生素D缺乏所致的骨代谢疾病具有相关性,F等位基因高的早产儿更具骨代谢疾病的风险。

维生素D水平和TLR3基因多态性与儿童肺炎支原体感染相关哮喘的关联性

目的探究维生素D水平和Toll样受体3(TLR3)单核苷酸多态性(SNPs)与儿童肺炎支原体(MP)感染相关哮喘的关系。方法选取2018年6月-2020年6月于承德医学院附属医院接受治疗的住院哮喘患儿138例为病例组,根据血浆肺炎支原体抗体(MP-IgM)检测结果分为MP哮喘组(n=77)和非MP哮喘组(n=61),另选取同期体检儿童75名为对照组,比较各组临床资料、实验室指标水平和TLR3基因rs3775290和rs3775291位点的基因多态性。结果三组维生素D、CD_(3)^(+)和CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)水平比较,MP哮喘组<非MP哮喘组<对照组(P<0.05);免疫球蛋白(Ig)A、IgM和IgG水平比较,对照组<非MP哮喘组<MP哮喘组(P<0.05)。三组TLR3基因rs3775291位点基因型和等位基因频率比较,差异有统计学意义(P<0.05),但MP哮喘组和非MP哮喘组基因型和等位基因频率比较,差异均无统计学意义(χ^(2)=0.668,P=0.716;χ^(2)=0.029,P=0.864);三组TLR3基因rs3775290位点基因型分布与等位基因频率比较,差异均无统计学意义。Logistic回归分析结果显示,维生素D水平与儿童MP感染相关哮喘的发病具有相关性。结论维生素D水平与儿童MP感染相关哮喘的发病相关,TLR3基因中的rs3775291位点携带G等位基因会增加哮喘的发生风险,但与MP感染相关哮喘的发病无关联性。