维生素D与肥胖的关系

维生素D是一种人体必需的脂溶性维生素,广泛参与到人体多种器官、组织细胞的发育和分化、生长和调节中,维生素D水平受甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)、钙、肠道吸收能力、肝肾功能、皮肤、肌肉等多方面影响。大规模的流行病学数据表明维生素D缺乏在世界范围内普遍流行。肥胖的患病率呈全球性增长趋势。维生素D缺乏与肥胖存在相关性,肥胖人群血清维生素D水平明显低于正常体重人群,对肥胖人群进行维生素D的干预治疗有助于改善体重指数(body massindex,BMI)。两者通过环境因素、自身因素及分子水平的变化等相互影响,肥胖引起维生素D的缺乏或不足。

维生素D受体mRNA及其蛋白在不同体质指数人群皮下和大网膜脂肪组织中的表达差异

目的:观察正常、超重和肥胖3组人群皮下和大网膜脂肪组织中维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)mRNA及其蛋白表达水平的差异。方法:用半定量RT-PCR方法检测20例正常组、35例超重组、27例肥胖组人群的腹部皮下和大网膜脂肪组织VDR基因的mRNA表达水平;用Western blot方法检测VDR的蛋白表达水平。结果:在皮下脂肪组织中,肥胖组VDRmRNA和蛋白表达水平明显低于正常组和超重组(P<0.05);在大网膜脂肪组织中,超重组VDR mRNA及其蛋白表达增高(P<0.05),肥胖组VDR mRNA及其蛋白表达与超重组相比降低(P<0.05)。结论:肥胖患者脂肪组织中VDR表达水平降低,可能是临床上补充维生素D干预肥胖达不到预期效果的机制之一。

Smad3介导补肾中药对增龄成骨细胞VDR mRNA表达的影响

目的:探讨smad3是否介导了补肾中药对增龄成骨细胞VDR mRNA表达的影响,从而阐明补肾中药具有促进骨形成的机制。方法:分离6月龄和16月龄SD大鼠成骨细胞,采用组织块翻转方法培养,通过倒置显微镜观察细胞形态,并以矿化结节染色对成骨细胞加以鉴定。将SD大鼠随机分为正常组、生理盐水组、单味补阳组(固本壮骨粉)、复方补阳组(金匮肾气丸)、复方平补组(补肾益精方)、复方补阴组(知柏地黄丸)和西药对照组(阿法骨化醇片),制备药物血清;当成骨细胞汇合达60%,换无血清培养液培养细胞24 h后,加入含药血清(浓度为10%)再继续培养3 d。采用RT-PCR方法检测含药血清干预后成骨细胞smad3和VDR mRNA的表达。结果:在增龄成骨细胞smad3 mRNA表达是下降的,这与增龄所致VDR mRNA表达下降相一致;单味补阳组、复方补阳组和西药对照组上调smad3 mRNA的趋势与它们上调VDR mRNA的趋势相一致。结论:补阳中药可能通过启动Smad3 mRNA表达而上调VDR mRNA表达,从而促进骨形成。

大鼠骨髓间充质干细胞VDR和CYP27B1的表达

[目的]探讨大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BM-MSCs)中维生素受体(vitamin D receptor,VDR)和CYP27B1的表达。[方法]首先以全骨髓贴壁法分离得到大鼠BM-MSCs,通过成骨和成脂诱导分化鉴定其分化潜能,再通过RT-PCR检测大鼠BM-MSCs中VDR和CYP27B1的mRNA表达。[结果]从大鼠骨髓中分离得到具有成骨和成脂分化潜能的BM-MSCs,VDR和CYP27B1基因在大鼠BM-MSCs中有表达,其相对于β-actin的mRNA值分别为1.10和0.39。[结论]这为维生素D3在大鼠BM-MSCs的自分泌和旁分泌代谢研究奠定基础,为维生素D3治疗骨质疏松的研究提供理论依据。

维生素D对肥胖幼鼠单核／巨噬细胞趋化因子及巨噬细胞浸润脂肪组织的影响

目的探讨肥胖幼鼠腹腔内脂肪系数、单核／巨噬细胞趋化蛋白表达和巨噬细胞浸润脂肪组织情况及维生素D（VitD）的干预作用。方法将45只3周龄sD雌幼鼠根据随机数字表法分为对照组、肥胖模型组、VitD干预组，每组15只。对照组予基础饲料喂养，肥胖模型组、VitD干预组予高脂饲料喂养；VitD干预组予VitD灌胃5μg／（kg·d）（相当于婴幼儿每天补充VitD 400 IU），对照组和肥胖模型组予植物油灌胃，5mL／kg，1次／d，共6周。每周监测幼鼠体质量，计算Lee’s指数，6周后称量腹腔内脂肪重量；酶联免疫吸附法检测血清单核细胞趋化蛋白-1（MCP·1）和巨噬细胞炎性蛋白-1α（MIP-1α）表达水平；HE染色后，在显微镜下观察并计数脂肪细胞；免疫组织化学法测定脂肪组织中MCP-1、MIP-1α及F4／80蛋白表达；实时荧光定量PCR（qPCR）测定脂肪组织中MCP-1、MIP-1α及核因子（NF）-KBmRNA表达水平，同时与幼鼠体质量、腹腔内脂肪系数及Lee’s指数进行相关性分析。结果高脂饮食诱导幼鼠肥胖后，第6周肥胖模型组幼鼠体质量、腹腔内脂肪系数、血清MCP-1和MIP-10ll（244．1±16．2）g、（3．25±0．63）％、（2275．2±229．3）ng／L、（190．4±61．9）ng／L]均较对照组[（224．2±10．9）g、（2．43±0．47）％、（1522．1±577．1）ng／L、（63．6±31．6）ng／L1和VitD干预组[（214．0±12．5）g、（2．04±0．64）％、（1863．4＋-477．0）ng／L、（120．3±29．5）ng／L]增高，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。腹腔内脂肪组织HE染色示对照组和VitD干预组脂肪细胞排列较整齐，大小较均-；肥胖模型组脂肪细胞排列较紊乱，大小不一，脂肪细胞过度膨大和许多新生的小脂肪细胞并存。免疫组织化学染色示肥胖模型组脂肪组织中MCP-1、MIP—1α、F4／80蛋白表达（130944．5±10706．1、174354．8±65267．8、51701．9±50105．1）均较对照组（47394．5±9261．9、54376．7±36436．9、23370．3±16613．1）增高，差异均有统计学意义（均P〈0．01）；VitD干预组MCP-1、MIP-101、F4／80蛋白表达（102967．2±9329．3、48659．8±43553．8、25604．9±11411．6）均较肥胖组降低，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。qPCR示肥胖模型组脂肪组织中MCP-1、MIP-1仅及NF—κBmRNA表达（2．78±0．90、7．104-1．85、1．504-0．16）均较对照组（0．88±0．18、0．99±0．80、1．00±0．28）增高，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；VitD干预组脂肪组织中MCP-1、MIP—let及NF—KBmRNA表达（1．73±0．51、1．59±1．09、0．72±0．30）均较肥胖模型组下降，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。各组间Lee’s指数比较差异无统计学意义（F=0．351，P=0．711）。9周龄时，幼鼠脂肪组织中MCP-1、MIP-1饯、NF—KBmRNA表达水平与幼鼠体质量、腹腔内脂肪系数均呈正相关（r=0．738、0．517、0．762、0．693、0．519、0．557，均P〈0．05）；与Lee’s指数无相关性（r=0．322、0．317、-0．023，均P〉0．05）。结论VitD可抑制饮食诱导的幼年期肥胖，可能与VitD通过NF—κB信号通路抑制脂肪组织／巨噬细胞浸润及单核巨噬细胞趋化因子的表达有关。

维生素D受体在大鼠脂肪组织中的表达定位

[目的]研究维生素D受体(Vitamin D receptor,VDR)在大鼠不同部位脂肪组织中的定位及基因表达量的差异。[方法]利用苏木精伊红染色(Haematoxylin and Eosin stain,H&E)和免疫荧光染色技术,分别对正常SD雌鼠和SD雄鼠的内脏、皮下和肾周的脂肪组织,进行形态学分析和VDR定位研究;同时提取各脂肪组织的RNA,利用RT-PCR技术定量分析大鼠各脂肪组织间VDR的表达差异。[结果]大鼠不同部位的脂肪组织在形态学上具有一定的差异;VDR主要集中分布在大鼠脂肪细胞的细胞核中;VDR基因在雌雄SD大鼠各个脂肪组织中的表达量不同,但差异不显著(P>0.05)。[结论]为脂肪细胞的分化以及VDR的功能研究奠定基础,为今后肥胖的发病与治疗提供理论依据。