蔓荆子活性成分vitexicarpin诱导K562细胞凋亡的机制

目的 探讨vitexicarpin对人癌细胞增殖的抑制活性及其抗癌机制。方法 以SRB法进行细胞毒测定,观察细胞的形态学变化并用流式细胞术分析癌细胞的凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞的DNA梯带,以Westernblotting法进行蛋白质检测。结果 Vitexicarpin对K562等 4种人癌细胞表现了较强的增殖抑制活性。处理后的K562细胞表现出典型的凋亡形态特征、出现了剂量依赖性增加的亚二倍体峰并呈现出典型的DNA梯形条带;PARP和caspase- 3被剪切、胞浆中细胞色素c增高、Bcl 2表达减少、Bax表达未见明显变化。结论 Vitexicarpin通过激活线粒体调控的凋亡通路诱导K562细胞凋亡。

Vitexicarpin诱导肺癌A549细胞凋亡和对细胞周期作用的研究

目的:研究蔓荆子黄素(Vitexicarpin)对人肺癌细胞株A549细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:设计长春新碱(Vincristine)阳性对照组和空白阴性对照组及不同浓度的Vitexicarpin溶液作用于A549细胞,应用细胞增殖抑制试验和流式细胞仪检测技术,观察Vitexicarpin对A549细胞增殖的影响,以及其诱导A549细胞在不同时段的凋亡情况和对细胞周期的影响。结果:Vitexicarpin浓度为10μmol/L时对A549细胞的增殖抑制率超过50%,IC50为8.21μmol/L。另外,Vitexicarpin能有效诱导A549细胞凋亡。从Vitexicarpin作用4h开始,细胞被阻滞于G2/M期。随时间增加,G1/S期细胞逐渐减少,G2/M期细胞逐渐增多,且凋亡细胞逐渐增多。结论:Vitexicarpin能抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞发生凋亡,将细胞阻滞于G2/M期是其可能作用机制。

基于UBA2/PTEN/PI3K/Akt通路探讨蔓荆子黄素对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 基于泛素样修饰激活酶2(UBA2)/磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路探究蔓荆子黄素对结直肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 取对数生长期的SW480细胞,对照组细胞常规培养,蔓荆子黄素组细胞加入10μmol/L蔓荆子黄素培养,UBA2抑制剂组细胞加入0.5μmol/L UBA2抑制剂培养,蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组细胞加入10μmol/L蔓荆子黄素和0.5μmol/L UBA2抑制剂共培养。CCK-8实验检测细胞增殖情况,克隆形成实验观察细胞的单克隆形成能力,划痕实验观察细胞的迁移能力,Transwell实验观察细胞的侵袭能力,Western blot法检测细胞中UBA2/PTEN/PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况。结果 CCK-8实验和克隆形成实验显示,UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组培养72 h后的细胞增殖吸光度OD值明显低于蔓荆子黄素组(P均<0.05),细胞克隆形成数量均明显少于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组培养不同时间的细胞增殖吸光度OD值和细胞克隆形成数量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。划痕实验和Transwell实验显示,UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组划痕间距均明显宽于蔓荆子黄素组(P均<0.05),穿膜细胞数量均明显少于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。蔓荆子黄素组、UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组细胞中PTEN蛋白相对表达量均明显高于对照组(P均<0.05),UBA2、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量均明显低于对照组(P均<0.05);UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组细胞中PTEN蛋白相对表达量均明显高于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量均明显低于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组UBA2、PTEN、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 蔓荆子黄素可能通过抑制UBA2/PTEN/PI3K/Akt信号通路发挥抗结直肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的能力。

蔓荆子黄素通过调控糖代谢重编程抑制肝癌细胞增殖

目的探讨蔓荆子黄素对肝癌细胞增殖的影响及其分子机制。方法用不同浓度(0.5、1.0、2.0μmol/L)的蔓荆子黄素处理肝癌细胞SNU⁃368、SNU⁃739及人肝永生化细胞THLE⁃2,采用MTS实验和克隆形成实验检测蔓荆子黄素对肝癌细胞生长的影响,同时选出蔓荆子黄素处理肝癌细胞的适宜浓度。用过表达HIF⁃1α慢病毒及其阴性对照慢病毒感染肝癌细胞SNU⁃368和SNU⁃739,同时用适宜浓度的蔓荆子黄素处理过表达HIF⁃1α的肝癌细胞,采用qRT⁃PCR和Western blot检测肝癌细胞中HIF⁃1α、C⁃MYC和P53的表达情况,通过葡萄糖摄取水平、乳酸生成水平、细胞外培养液pH值和细胞氧耗检测实验分析肝癌细胞糖酵解、氧化磷酸化的情况,采用MTS实验和克隆形成实验检测细胞的增殖情况。结果蔓荆子黄素可降低肝癌细胞SNU⁃368和SNU⁃739的增殖能力,且呈一定的剂量和时间依赖效应。1.0μmol/L蔓荆子黄素处理肝癌细胞SNU⁃739和SNU⁃368后,可降低肝癌细胞中的葡萄糖摄取水平和乳酸生成水平(均P<0.01),提高细胞外培养液pH值和细胞氧耗率(均P<0.01),抑制肝癌细胞中HIF⁃1α的表达(均P<0.05)。过表达HIF⁃1α可促进肝癌细胞的糖酵解,抑制氧化磷酸化,增强肝癌细胞的增殖能力(均P<0.05),而蔓荆子黄素可以逆转过表达HIF⁃1α对肝癌细胞增殖的促进作用(均P<0.05)。结论蔓荆子黄素可通过抑制HIF⁃1α的表达抑制细胞糖酵解和促进氧化磷酸化,进而抑制肝癌细胞增殖。

基于主成分分析的不同产地蔓荆子的质量评价研究

目的:考察江西省、云南省、安徽省、山东省、福建省等10个不同产地蔓荆子药材质量,探讨各产地蔓荆子的质量差异。方法:参照《中国药典》2020版所收载的蔓荆子项下的内容为依据,对不同产地蔓荆子样品进行性状、显微鉴别、薄层鉴别,同时进行水分、总灰分、浸出物、蔓荆子黄素含量测定。结果:不同产地蔓荆子药材性状、显微鉴别和薄层鉴别特征明显,水分、总灰分、浸出物及含量均符合药典规定;水分范围6.92%~11.92%,总灰分范围3.59%~4.19%,醇溶性浸出物范围10.27%~12.20%,蔓荆子黄素的含量范围0.061%~0.079%。结论:10批不同产地蔓荆子在质量品质方面存在一定差异,其中产自云南省普洱市景谷傣族彝族自治县的蔓荆子药材品质综合表现较好,本研究可为蔓荆子药材的质量标准提升提供参考。

蔓荆子黄素对垂体瘤细胞GH3增殖抑制作用研究

目的观察蔓荆子黄素(vitexicarpin)对GH3垂体瘤细胞生长和增殖的影响,探讨其作用机制。方法通过绘制含不同浓度梯度的Vitexicarpin培养基条件GH细胞生长曲线,观察Vitexicarpin对GH3细胞的作用;应用CCK-8试剂盒检测Vitexicarpin作用后的剂量时间效应,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率以及Western Blotting测定PARP、Caspase-3等凋亡相关蛋白表达。结果Vitexicarpin可以抑制GH3细胞的生长和增殖,这种抑制作用有明显的剂量和时间效应,流式细胞检测结果显示其抑制增殖作用是通过诱导GH3细胞凋亡实现,Western Blotting检测发现Caspase-3活化,PARP裂解。结论 Vitexicarpin可以抑制GH3垂体腺瘤细胞增殖,其作用机制可能是通过线粒体介导的细胞凋亡通路。

蔓荆子黄素抑制p53突变型人肺癌细胞生长及其机制研究

目的了解蔓荆子黄素对p53突变型人肺癌H322细胞增殖的影响,并对其机制进行初步研究。方法在不同时间点(24,48和72h)采用MTT法检测不同浓度(0,0.1,0.2,0.5,1.0μmol·L-1)蔓荆子黄素对细胞增殖的影响。在不同浓度蔓荆子黄素的作用下,采用Western blot法检测c-myc基因表达情况。结果蔓荆子黄素能抑制H322细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性,24,48和72h的IC50分别为0.577,0.501和0.473μmol·L-1。不同浓度的蔓荆子黄素在同一时间点、相同浓度的蔓荆子黄素在不同时间点对H322细胞增殖的抑制作用均存在明显差异(P<0.05)。c-myc基因表达与蔓荆子黄素的浓度呈反比。结论蔓荆子黄素能抑制人肺癌H322细胞的增殖,其机制可能是通过抑制c-myc的表达。

不同产地蔓荆子中黄酮类成分含量分析

目的:分析不同产地蔓荆子中总黄酮和蔓荆子黄素的含量,探讨蔓荆子药材的品质变异情况。方法:采用芦丁比色法对蔓荆子中总黄酮含量进行分析,建立HPLC法对蔓荆子黄素进行含量分析。色谱柱:Zorbax 80A Extend-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);保护柱:Dikma Easyguard C18柱(10 mm×4.6 mm,5μm);乙腈-0.5%磷酸作为流动相进行梯度洗脱;流速:1.0 ml/min;柱温:25℃,检测波长258 nm。结果:总黄酮的线性回归方程为A=12.49c+0.003 7(r=0.999 9),线性范围:10.3～51.6μg/ml。蔓荆子黄素回归方程为A=67 712c+170.7(r=0.999 7),线性范围2.49～243.2μg/ml。结论:不同产地的单叶蔓荆和蔓荆中黄酮类成分和蔓荆子黄素含量差异较大,可能受到环境、纬度等多种因素影响。

蔓荆子黄素在石墨烯修饰的玻碳电极上的电化学行为及其测定

研究了蔓荆子黄素在电极上的电化学行为并建立对其测定的电化学分析方法。制备氧化石墨烯修饰玻碳电极，采用循环伏安法研究蔓荆子黄素在修饰电极上的电化学行为，优化了包括支持电解质、缓冲溶液的pH、修饰剂用量等测定条件。实验结果表明：在pH6．5的PBS缓冲溶液中，氧化峰电流与蔓荆子黄素浓度的对数值在2．0×10^-8～1．2×10^-7mol·L^-1范围内呈良好的线性关系，检出限为4．0×10^-9mol·L^-1（S／N=3）。该方法操作简便，灵敏度高，已用于实际样品中蔓荆子黄素的直接测定。

炮制对蔓荆子中主要黄酮成分水溶出率的影响

目的研究炮制对蔓荆子中黄酮类成分含量的影响,探索炮制对蔓荆子中黄酮类成分水溶出率的影响。方法建立高效液相色谱法,采用Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇(A)-1%冰醋酸水(B)梯度洗脱(0~10 min:25%~35%A;10~18 min:35%A;18~45 min:35%~75%A),流速1 m L·min-1,检测波长254 nm,柱温30℃。同时测定蔓荆子生品和炮制品中异荭草素、蔓荆子黄素的含量及水溶出率,分析炮制前后变化。结果上述2个成分的含量,炮制前分别为0.035%、0.066%,炮制后分别为0.033%、0.056%;异荭草素、蔓荆子黄素炮制前的水溶出率分别为:40.00%、12.12%,炮制后分别为60.61%、14.29%。结论炮制会增加蔓荆子中异荭草素、蔓荆子黄素的水溶出率。

单叶蔓荆不同器官中蔓荆子黄素含量测定

目的研究单叶蔓荆不同器官中蔓荆子黄素的含量,为选择单叶蔓荆的药用部位及栽培利用提供科学依据。方法采用高效液相色谱法测定单叶蔓荆不同器官中蔓荆子黄素的含量。结果自然晾干后,果实中蔓荆子黄素的含量最高(0.030 8%),叶片次之(0.012 0%),未能检测出枝条和根系中蔓荆子黄素含量。结论单叶蔓荆以果实入药合理,叶片可进一步开发。

傣药七味木盍藤子丸质量标准研究

目的:建立傣药七味木盍藤子丸(木盍藤子仁、黑种草子、胡椒等)质量标准。方法:采用薄层色谱法对方中黑种草子进行鉴别。用高效液相色谱法测定蔓荆子黄素含量。结果:在薄层色谱中能检出黑种草子;蔓荆子黄素在0.1065～2.1300μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9996,n=5);平均回收率101.4,RSD为1.11。结论:所建立的方法简便可行,重现性好,可用于七味木盍藤子丸的质量控制。

单叶蔓荆果实及叶片中蔓荆子黄素的积累动态研究

目的研究单叶蔓荆果实及叶片中蔓荆子黄素的积累规律,以及不同栽培管理措施对其含量的影响,为进一步确定单叶蔓荆药材的合理采收时间及科学栽培管理提供理论依据。方法采用高效液相色谱法测定单叶蔓荆干燥果实及叶片中蔓荆子黄素的含量。结果夏末秋初,单叶蔓荆果实和叶片中蔓荆子黄素的累积均呈现出一定的波动性,且维持在较高的水平,果实中蔓荆子黄素的含量约为同时期叶片含量的3倍。起垄与直立整形相结合的栽培管理措施下,果实中蔓荆子黄素的含量较对照提高约16.3%,而叶片中的含量仅较对照提高2.7%。结论综合考虑各影响因素,山东及周边省份于8月底至10月上中旬采收单叶蔓荆果实入药较为适宜。起垄与直立整形相结合的复合管理措施能够显著促进单叶蔓荆果实中蔓荆子黄素的积累,而对叶片的影响较小。

福建野生单叶蔓荆子总黄酮与蔓荆子黄素含量分析

对福建省不同地区野生单叶蔓荆子总黄酮和蔓荆子黄素含量进行测定,不同地区含量差异进行比较分析,确定福建野生单叶蔓荆子的质量水平,为进一步开发福建野生单叶蔓荆子提供基础研究数据。回流提取总黄酮,紫外分光光度法(UV法)测定总黄酮含量,高效液相色谱法(HPLC法)测定蔓荆子黄素含量。结果表明不同产地野生单叶蔓荆子总黄酮含量范围为7.081%～10.792%,平均含量9.040%;蔓荆子黄素含量范围为0.06170%～0.12578%,平均含量0.08878%。福建省不同地区野生单叶蔓荆子质量(以蔓荆子黄素含量为指标)均符合药典规定,可进一步开发利用。

蔓荆子黄素对小鼠单核巨噬细胞增殖和凋亡的影响

目的通过蔓荆子黄素对小鼠腹腔巨噬细胞活性及RAW264.7细胞增殖和凋亡作用的研究,探讨蔓荆子黄素对单核巨噬细胞的影响。方法分别用含有不同浓度蔓荆子黄素作用于小鼠腹腔巨噬细胞与小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,于24、48及72 h后采用CCK-8检测细胞活性。使用AO/EB染色观察RAW264.7细胞凋亡变化;应用流式细胞仪检测RAW264.7细胞凋亡率。通过荧光探针DCFH-DA检测RAW264.7细胞活性氧水平,使用JC-1染色标记线粒体膜电位的变化。结果 CCK-8法检测结果显示,蔓荆子黄素对小鼠腹腔巨噬细胞的细胞活性及RAW264.7细胞的增殖都有抑制作用,呈剂量与时间依赖关系,尤其对具有增殖能力的RAW264.7细胞活性抑制作用更强。AO/EB染色结果显示,RAW264.7细胞经浓度为5及10μmol/L的蔓荆子黄素处理后,细胞表现为凋亡形态;流式细胞仪检测结果显示,蔓荆子黄素诱导RAW264.7细胞Sub-G1期代表凋亡细胞的百分比增加(P<0.05)。蔓荆子黄素作用于RAW264.7细胞后,细胞内活性氧水平提高;JC-1染色结果显示,蔓荆子黄素能使RAW264.7细胞的线粒体膜电位下降。结论蔓荆子黄素能够抑制小鼠腹腔巨噬细胞与小鼠单核巨噬细胞RAW264.7活性,尤其对具有增殖能力的RAW264.7细胞活性抑制作用更强,可以促进其凋亡,其作用机制与增加细胞内活性氧水平和降低线粒体膜电位有关。

蔓荆子黄素对结直肠癌细胞增殖、周期和凋亡的影响及其可能的调控机制

目的探讨蔓荆子黄素对结直肠癌细胞增殖、周期和凋亡的影响及其可能的调控机制。方法(1)体外培养SW480细胞,采用不同浓度(0、10、20、40μmol/L)的蔓荆子黄素处理后,检测细胞活力、细胞周期和凋亡情况,以及细胞周期蛋白(p21、c-myc)、凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]表达水平。同时检测经0μmol/L、40μmol/L的蔓荆子黄素处理后的SW480细胞的泛素样修饰物激活酶2(UBA2)蛋白和mRNA表达水平。(2)另取SW480细胞,分别转染阴性对照小干扰RNA(siRNA)(si-NC组)、UBA2 siRNA转染(si-UBA2组);另取SW480细胞,分别转染空载质粒载体(蔓荆子黄素+vector组)和UBA2过表达质粒载体(蔓荆子黄素+UBA2组)6 h后,加入40μmol/L蔓荆子黄素处理24 h。检测各组细胞活力、细胞周期和凋亡情况,以及细胞周期蛋白、凋亡相关蛋白、UBA2蛋白表达水平。结果(1)与0μmol/L蔓荆子黄素相比,其他浓度蔓荆子黄素干预后,SW480细胞的活力、S期细胞比例下降,细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞比例增加,p21、Bax蛋白相对表达水平上调,c-myc、Bcl-2蛋白相对表达水平下调(均P<0.05)。与0μmol/L蔓荆子黄素相比,40μmol/L蔓荆子黄素干预后SW480细胞中的UBA2 mRNA和蛋白表达均下调(均P<0.05)。(2)与si-N C组相比,si-UBA2组的细胞活力、S期细胞比例降低,凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞比例增加,c-myc蛋白、Bcl-2蛋白、UBA2蛋白相对表达水平下调,p21蛋白和Bax蛋白相对表达水平上调(均P<0.05)。而转染UBA2过表达质粒载体后给予蔓荆子黄素干预,蔓荆子黄素+UBA2组SW480细胞中上述指标均逆转(均P<0.05)。结论蔓荆子黄素可以抑制结直肠癌细胞的增殖,阻滞细胞周期,并促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调UBA2有关。

蔓荆子黄素对人非小细胞肺癌细胞H322的作用及机制研究

目的:探究蔓荆子黄素对人非小细胞肺癌细胞H322增殖和周期的影响及机制。方法:选择体外培养的人非小细胞肺癌H322细胞,给不同浓度(0,1,10,20,40μmol/L)蔓荆子黄素溶液作用不同时间(24 h,48 h,72 h)后,采取MTT法检测细胞的增殖情况、流式细胞仪检测细胞周期、Western blot法检测CDK1、c-myc和survivin基因的表达情况。结果:不同浓度组的蔓荆子黄素溶液作用H322细胞(24 h,48 h,72 h)后均能抑制其增殖(P<0.05),且表现出剂量、时间依赖性;蔓荆子黄素通过影响H322细胞的增殖,使得细胞周期阻滞在G 2/M期,同时发现c-myc和survivin的表达与蔓荆子黄素浓度成负相关,CDK1的表达随着蔓荆子黄素浓度的升高先升高后降低。结论:蔓荆子黄素可能通过抑制CDK1、c-myc和survivin的表达,阻滞细胞周期在G 2/M期,进而抑制人非小细胞肺癌细胞H322的增殖并促进凋亡。

蔓荆子黄素通过上调miR-1193表达调控胃癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨蔓荆子黄素对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法:不同浓度的蔓荆子黄素作用于胃癌细胞AGS后,CCK-8实验和流式细胞术分别检测细胞的增殖和凋亡,RT-qPCR检测miR-1193表达量,Western blot检测CyclinD1、p21、Bcl-2和Bax蛋白表达。将miR-1193模拟物转染至AGS细胞,检测上调miR-1193对AGS细胞增殖和凋亡的影响;将miR-1193抑制物转染至AGS细胞,检测下调miR-1193对蔓荆子黄素处理的AGS细胞增殖和凋亡的影响。结果:蔓荆子黄素作用后,AGS细胞的增殖能力下降,CyclinD1和Bcl-2表达降低,细胞凋亡率升高,miR-1193和Bax表达升高,且呈一定的剂量依赖效应(P<0.05)。上调miR-1193后AGS细胞增殖能力、CyclinD1和Bcl-2表达降低,凋亡率、Bax表达升高(P<0.05)。下调miR-1193表达能够逆转蔓荆子黄素对AGS细胞增殖和凋亡的影响(P<0.05)。结论:蔓荆子黄素能够抑制胃癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与上调miR-1193表达有关。

傣药蔓荆叶的药材质量标准研究

目的:制定蔓荆叶药材质量标准,为傣药资源的开发利用提供复学依据。方法:生药学研究,浸出物测定法,灰分没定法,薄层色谱法。结果:对蔓荆叶的性状、显微特征进行了描述;对三个不同产地10批蔓荆叶的水分、总灰分、酸不溶性灰分、重金属和浸出物进行了测定;同时对其蔓荆子黄素进行了薄层定性鉴别研究。结论:通过研究制定了傣药蔓荆叶的质量控制标准。

HPLC测定傣药蔓荆叶中蔓荆子黄素的含量

目的:测定傣药蔓荆叶中蔓荆子黄素的含量。方法:采用RP-HPLC法测定蔓荆叶中蔓荆子黄素的含量。结果:蔓荆子黄素在0.0180～0.6180μg的范围内线性良好,r=0.9999;样品溶液在24h内稳定,日内精密度良好,RSD=0.70%;平均回收率为102.2%,RSD=1.52%。结论:所建立的方法专属性强、精密度好、结果准确,可用于蔓荆叶药材的质量控制。