射干止咳胶囊体内外抗甲型H1N1流感病毒作用初探

目的初步探讨射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的体内外抗病毒作用。方法通过细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)结合MTT法考察射干止咳胶囊体外抑制甲型H1N1流感病毒活性的作用;采用小鼠滴鼻法感染甲型H1N1流感病毒为模型,观察射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的体内抗病毒作用。结果体外抗病毒试验结果显示,射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的最高抑制率为11.86%,提示在攻毒剂量为100TCID_(50)的条件下,射干止咳胶囊在体外对甲型H1N1流感病毒的抑制作用不明显。小鼠滴鼻感染5LD_(50)的甲型H1N1流感病毒,射干止咳胶囊低、中、高剂量组小鼠的死亡率分别为30%、10%、30%,死亡保护率达50%、70%、50%,平均生存天数分别为13 d、14 d、13 d,说明各给药组对攻毒小鼠具有较好的死亡保护作用。结论射干止咳胶囊体外抗甲型H1N1流感病毒的作用不显著,但射干止咳胶囊各剂量组对甲型H1N1流感病毒攻毒致小鼠死亡却具有明显的保护作用。

不同替米考星制剂的体外溶出和体内吸收比较

为了比较4种替米考星制剂(肠溶颗粒R及预混剂X、Q和H)的体外溶出和体内吸收情况,本试验以0.1 mol/L盐酸溶液和0.2 mol/L磷酸钠溶液为溶出介质,采用浆法测定不同时间替米考星的累积溶出量,评价不同替米考星制剂的体外溶出特征;选用24头健康仔猪,随机分为4个组,每组6头,按20 mg/(kg·bw)单次集中拌料给药,评价不同替米考星制剂在猪血浆中的药动学特征。体外溶出结果显示,加入0.1 mol/L盐酸溶液2 h时,R的药物累积溶出量在10%以内,X的药物累积溶出量在15%以内,Q和H则完全溶出;加入0.2 mol/L磷酸钠溶液30 min时,R和X的累积溶出量均在90%以上。体内吸收结果显示,与H相比,R、X和Q的相对生物利用度分别为160.35%、153.37%和94.56%。结果表明,替米考星肠溶颗粒R和预混剂X具有良好的耐酸性,但不耐碱,进入体内不会被胃液破坏,在肠道得到充分释放,且在猪体内具有较好的吸收和利用效果。本试验证实替米考星肠溶制剂更符合临床所需,且建立了替米考星体外溶出与体内吸收的相关性,对评价不同替米考星制剂药动学性质具有一定指导意义。

电针刺激对慢性心力衰竭模型大鼠及心肌纤维化细胞模型的影响

目的观察电针刺激对慢性心力衰竭(CHF)大鼠模型及心肌纤维化细胞模型的影响,探讨电针对CHF的治疗作用机制。方法选取24只雄性Wistar大鼠随机分为4组,分别为假手术组、假手术+电针组、心肌纤维化组及心肌纤维化+电针组,每组6只。将H9c2大鼠心肌细胞随机分为4组,对照组、对照+电针组、血管紧张素Ⅱ处理组及血管紧张素Ⅱ处理+电针组。心肌纤维化组大鼠采用腹主动脉缩窄法建立CHF模型,假手术组大鼠仅分离腹主动脉不进行钳夹,心肌纤维化+电针组大鼠在心肌纤维化组的基础上联合电针刺激大鼠双侧“内关”穴干预,假手术+电针组大鼠在假手术组的基础上联合电针刺激大鼠双侧“内关”穴干预。血管紧张素Ⅱ处理组采用含血管紧张素Ⅱ的培养基对H9c2大鼠心肌细胞进行培养及传代,对照组H9c2大鼠心肌细胞在正常培养基内进行培养及传代,血管紧张素Ⅱ处理+电针组是血管紧张素Ⅱ处理组的基础上在培养皿中予以电刺激,对照+电针组在对照组的基础上在培养皿中予以电刺激。检测各组大鼠干预12、16、20周室间隔舒张末期厚度(IVSd)、左室舒张末期后壁厚度(LVPWd)、左室收缩末期内径(LVEDs)、左室舒张末期内径(LVEDd)及左室射血分数(LVEF),以及血清B型钠尿肽(BNP)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)水平,检测各组H9c2大鼠心肌细胞在干预12、16、20周重组蛋白基质金属蛋白酶9(MMP9)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)相对表达情况。结果与假手术组干预同期比较,心肌纤维化组干预12、16、20周时IVSd、LVPWd、LVEDs及LVEDd均升高(P<0.05),LVEF降低(P<0.05),但假手术+电针组干预12、16、20周时各项指标与假手术组干预同期比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与心肌纤维化组干预同期比较,心肌纤维化+电针组干预12、16、20周时IVSd、LVPWd、LVEDs及LVEDd均降低(P<0.05),LVEF升高(P<0.05)。与假手术组干预同期比较,心肌纤维化组干预12、16、20周时BNP、LDH及CK水平均升高(P<0.05),但假手术+电针组干预12、16、20周时各项指标与假手术组干预同期比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与心肌纤维化组干预同期比较,心肌纤维化+电针组干预12、16、20周时BNP、LDH及CK水平均降低(P<0.05)。与对照组干预同期比较,血管紧张素Ⅱ处理组干预12、16、20周时MMP-9及TIMI-1相对表达水平均升高(P<0.05),但对照+电针组干预12、16、20周时各项指标与对照组干预同期比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与血管紧张素Ⅱ处理组干预同期比较,血管紧张素Ⅱ处理+电针组干预12、16、20周时MMP-9及TIMI-1相对表达水平均降低(P<0.05)。结论电针对CHF的治疗作用可能是通过抑制心室重构,改善心功能,保护心肌细胞,减轻心肌纤维化而实现。

生物可降解锌基合金的研究进展

生物可降解金属材料由于其良好的机械性能、生物相容性和生物降解能力,已逐渐成为应用研究领域的热点。锌作为参与人体系统各项工作的元素之一,在新陈代谢中扮演着关键角色,具有适宜的降解速率,因此,在骨折固定、血管支架等领域展现出了良好的应用前景。本研究对可降解锌基合金的生理学优势和机械性能进行了总结,并对其耐腐蚀性能进行了体外研究与体内研究的综合分析。

氟苯尼考/二甲基-β-环糊精包合物的制备及评价

目的 以2,6-二甲基-β-环糊精(DM-β-CD)为包合材料制备氟苯尼考(florfenicol,FF)包合物FF/DM-β-CD,以改善FF的溶解度和溶出速度,提高其生物利用度。方法 在应用分子对接结合相溶解度法筛选合适的环糊精(CD)后,采用加热搅拌法制备FF/DM-β-CD,并使用DSC、PXRD、FT-IR对包合物进行物相鉴别,对其溶解性、溶液稳定性和体外溶出进行考察,同时进行了FF/DM-β-CD在鸡体内的药动学研究。结果 FF与HP-β-CD、DM-β-CD和SBE-β-CD对接后的模型较稳定,DM-β-CD改善FF溶解度的效果最好。选择DM-β-CD作为包合材料,加热搅拌法制备了FF/DM-β-CD,DSC、PXRD和FT-IR结果证实FF/DM-β-CD的形成。FF/DM-β-CD可显著增加FF的溶解度,在标准硬水、自来水、去离子水和纯化水中的溶解度均大于FF的55.0倍。FF/DM-β-CD溶液在25℃放置1 d后,自来水中无析出,标准硬水、纯化水和去离子水中有微量析出;随着时间增加,析出逐渐增多,7 d后,以自来水中析出最少;FF含量无明显变化。FF/DM-β-CD在不同水质水中的溶出无明显差异,25℃、5 min时均已完全溶出,为FF原料药的17.09倍。与FF相比,FF/DM-β-CD能明显提高FF在鸡体内的生物利用度(Fr=165.24%)。结论 以DM-β-CD为包合材料制备FF/DM-β-CD,可显著提高FF的溶解度、溶出度和生物利用度。

立他司特滴眼液处方工艺优化及对干眼症疗效评价

为了研制更有效的用于治疗干眼症的药物,进行了立他司特滴眼液的制备研究,并进行了体内外的安全性和有效性考察。首先开发了滴眼液中立他司特的含量测定方法。通过文献调研及单因素实验确定了制剂的处方组成和制备工艺。最后通过Draize眼刺激性试验和HE染色进行滴眼液安全性评价,以泪液分泌试验及ELISA试验评价其对于干眼兔的治疗有效性。结果表明,立他司特滴眼液的最终处方组成为立他司特5%、氯化钠0.4%、无水磷酸氢二钠0.3%~0.4%、五水硫代硫酸钠0.3%,氢氧化钠0.3%,外观为透明略带棕黄色的溶液,pH满足7.75±0.05,渗透压200~330 mOsmol/kg范围内,且60℃下3个月内稳定性良好。刺激性研究与生理盐水对比无显著差异,立他司特滴眼液治疗后兔泪液分泌增加且泪液中炎症因子IL-6和IL-1β、TNF-α表达均显著性降低,且相比于市售乳剂环孢素滴眼液起效更快。结果表明,立他司特滴眼液制备方法简单,稳定性好,是干眼症快速治疗更优的选择。

影响刚地弓形虫组织包囊体内外形成因素的研究进展

在刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)发育为成熟组织包囊(bradyzoites)和卵囊(sporozoites)的两个时期,传统上需要进行动物试验,这极大地阻碍了对这些阶段的形态和代谢的生物学研究,而此阶段对弓形虫的感染至关重要。因此,在研究组织包囊时利用体外诱导的方法成为研究的重要途径,近年来这方面的研究也取得了一些突破性进展。文章综述了影响组织包囊形成的因素,旨在为弓形虫病的研究、预防和控制提供参考。

冬虫夏草及其成分在生殖功能中的研究进展

冬虫夏草(cordyceps sinensis, CS)是东方社会历史悠久的强壮滋补类草药,可以增强生殖活动并恢复受损的生殖功能。CS成分复杂,其主要提取成分包括虫草素、异黄酮(isoflavones obtained from Cordyceps sinensis, CSIF),以及CS水提取成分F1(水溶性多糖)、F2(水溶性蛋白质)和F3(水溶性较差的多糖和蛋白质)。截至目前,关于CS及其成分在生殖功能中的作用、具体机制及临床应用尚无系统阐述。首次综述CS及其成分对雌性及雄性生殖类固醇激素生成的体内外作用及机制。在雌性生殖系统中,CS通过上调类固醇合成急性调节蛋白(steroidogenesis acute regulator protein, StAR)和芳香化酶(aromatase, AROM)的表达促进人颗粒黄体细胞(granulosa luteal cell, GLC)中雌二醇(estradiol, E2)的生成,此外,口服从CS中提取的CSIF对去卵巢(ovariectomized, OVX)大鼠具有显著的雌激素作用;在雄性生殖系统中,CS及其不同成分不仅对原代小鼠睾丸间质细胞中睾酮及小鼠睾丸间质肿瘤细胞(MA-10细胞)中孕酮生成有积极作用,还可显著提高小鼠血浆睾酮水平。不仅为研究CS调节生殖功能及在辅助生殖技术中的应用提供新的研究方向,同时提供新的临床治疗策略。

基于微囊化技术的益生菌功能性评价研究进展

为解决益生菌产品在胃肠液中裸菌存活率低,活菌数不够,性能不理想的问题,近年来微囊化技术被广泛研究并逐渐运用于商业益生菌产品。本文主要介绍目前基于微囊化益生菌产品近年来在体内外的功能性评价研究,包括体外试验探究微囊化益生菌的存活、释放、黏附和抗菌等功能特性,以及体内试验探究益生菌存活、黏附、定植、抗腹泻、抗菌、抗炎、抗氧化、调控代谢综合征等功能特性,为后续进一步开发对人体有效的益生菌产品提供一定的指导。

黄体酮混悬注射剂药动学及体内外相关性研究

探讨黄体酮混悬注射剂体外释放、体内药动学以及体内外相关性,以自制黄体酮混悬注射液为例,采用桨法和透析袋法测定3种不同粒径(3、5、7μm)的黄体酮混悬注射剂的体外释放曲线;以SD大鼠为实验动物,研究3种粒径黄体酮混悬注射剂的体内药动学,并将血药浓度-时间曲线经Wagner-Nelson法处理后得到体内累积吸收曲线,与透析袋法所得体外累积释放曲线建立体内外相关性。结果表明,黄体酮混悬注射液采用桨法测定体外释放度时,20 min内均迅速释放85%以上,而采用透析袋法测定时分别在40、84、120 h达85%累积释放度。透析袋法所得体外释放趋势与体内释药趋势基本一致,相关系数大于0.95,具有较强的体内外相关性。本研究为长效混悬注射剂体内外相关性的建立提供参考。

不同包被缓释尿素的瘤胃缓释效果的评价

[目的]本文旨在通过体外批次发酵、瘤胃灌注和持续动态人工瘤胃模拟系统等不同方法评价包被缓释尿素的瘤胃缓释效果。[方法]体外发酵试验:选取1种普通尿素和4种商业包被缓释尿素,体外培养24 h,采集不同时间点(0、1、3、6、9、12、24 h)发酵液测定氨氮浓度,将筛选出缓释效果最好的缓释尿素用于进一步的研究。瘤胃灌注试验:12只体重(平均27.6 kg)相近的安装有瘤胃瘘管的育肥公湖羊,随机平均分为2组,分别向瘤胃中灌注剂量为日干物质采食量0.5%的普通尿素或日采食量0.55%的缓释尿素(等氮当量),灌注后不同时间点(0、1、3、6、9、12和24 h)采集瘤胃液,测定pH值和氨氮浓度。人工瘤胃试验:在基础日粮中分别添加3.5%的豆粕(普通日粮组)、0.5%的普通尿素(普通尿素组)和0.55%的缓释尿素(缓释尿素组),使用玉米补充普通尿素和缓释尿素组能量的缺乏;试验重复3次,每次持续7 d(4 d适应期和3 d采样期),采样期每天早上投料前后不同时间点采集发酵液和溢流液,测定发酵参数和微生物蛋白浓度。[结果]体外发酵试验:在发酵开始的9、12 h,缓释尿素A组的氨氮浓度显著低于普通尿素组和其余3个缓释尿素处理组(P<0.05)。体内瘤胃灌注试验:在灌注尿素后1 h,缓释尿素组瘤胃pH值和氨氮浓度显著低于普通尿素组(P<0.05),在灌注尿素后6 h,缓释尿素组的pH值显著高于普通尿素组(P<0.05)。人工瘤胃模拟试验:相比于其他2组,日粮添加缓释尿素显著提高了发酵液中丙酸和微生物蛋白的浓度(P<0.05);相比于普通日粮组,日粮添加缓释尿素显著降低了发酵液pH值(P<0.05)。[结论]不同包被缓释尿素的瘤胃缓释效果存在差异,体外发酵筛选出的缓释尿素A在动物瘤胃灌注条件下同样表现出较好的缓释效果。在人工瘤胃发酵试验中添加缓释尿素A能够改善瘤胃发酵,促进微生物蛋白的合成,但对生长性能和瘤胃菌群的影响仍需动物饲养试验做进一步的验证。

胆管癌实验模型研究进展

胆管癌是肝脏第二大常见的恶性肿瘤,早期症状不典型、恶性程度高、病死率高是其特点,目前全球范围内胆管癌的总体发病率逐年递增,且多数胆管癌患者的预后较差,迫切需要有效的诊断、治疗策略来改变这一现状。肿瘤建模是癌症研究的一大热点,建立胆管癌实验模型有助于深入了解、研究胆管癌的发生、发展、药物治疗效应等,对胆管癌的早期诊断及治疗具有重要意义。

大豆低聚肽对嗜酸乳杆菌的增殖效果研究

[目的]探究大豆低聚肽对嗜酸乳杆菌生长的影响,为乳酸菌体内定植提供思路。[方法]试验组加入不同质量浓度的大豆低聚肽于MRS肉汤培养基中,培养嗜酸乳杆菌48 h测定OD_(600 nm);测定不同培养时间下嗜酸乳杆菌培养液的OD_(600 nm),绘制生长曲线;以300、600、1200 mg/kg剂量的大豆低聚肽-嗜酸乳杆菌菌悬液连续灌胃抗生素诱导的肠道菌群紊乱小鼠7 d,测定大豆低聚肽作用下小鼠体质量变化。[结果]40、30、20 mg/mL大豆低聚肽能明显增加嗜酸乳杆菌菌液浊度,促进嗜酸乳杆菌增殖;能使嗜酸乳杆菌培养12 h后进入对数生长期,提前进入快速增长状态并提高增长速度;低剂量组(300 mg/kg)、中剂量组(600 mg/kg)、高剂量组(1200 mg/kg)均能促进小鼠体质量增长,且600 mg/kg中剂量组体质量增加2.89 g,与阴性对照组差异显著。[结论]大豆低聚肽在体外能明显促进嗜酸乳杆菌增殖,添加的大豆低聚肽质量浓度为40 mg/mL时增殖效果最为显著。能促进小鼠体质量增长,但其促进乳酸菌的体内定植机制需要进一步评价。

黄秋葵抗氧化活性研究

目的研究黄秋葵果实不同极性部位提取物的体外和体内抗氧化能力,为黄秋葵的产品开发和利用提供依据。方法采用·DPPH清除能力、·ABTS^(+)清除能力、·OH清除能力、·O_(2)^(-)清除能力、FRAP法还原能力、TBARS法抗脂质过氧化能力体外抗氧化模型对黄秋葵果实95%乙醇提取物中不同极性部位进行抗氧化活性评价,并利用SPSS 19.0软件分析黄秋葵果实抗氧化活性与总黄酮含量之间的相关性。选择其具有体外抗氧化活性部位的提取物进行体内抗氧化活性研究。结果95%乙醇提取物中乙酸乙酯层和正丁醇层提取物表现出清除自由基能力、还原能力和抑制脂质过氧化能力,乙酸乙酯层和正丁醇层提取物的总黄酮含量高于其他各层提取物,总黄酮含量与抗氧化活性呈较强相关性。与模型组比较,给予乙酸乙酯层和正丁醇层提取物能够升高CCl_(4)肝损伤大鼠肝脏中SOD、CAT活性以及GSH水平,同时能够降低ALT活性和MDA水平。结论黄秋葵果实具有潜在的护肝作用,可为开展肝脏损伤保护研究提供重要依据。

硒化甘草多糖联合抗生素对奇异变形杆菌体内外抑菌效果以及抑菌机制研究

试验旨在探究硒化甘草多糖(SeGUP)和甘草多糖(GUP)联合抗生素对奇异变形杆菌(PM)的体内外抑菌效果以及抑菌机制。体内外抑菌效果通过药敏试验、最小抑菌浓度(MIC)、生长曲线、体外协同作用以及SeGUP、GUP对PM感染小鼠的死亡率进行分析。抑菌机制通过PM细胞壁、细胞膜、生物膜、抗氧化酶活性的变化进行分析。结果显示,同浓度SeGUP比GUP抑菌圈大,MIC值小,对PM生长抑制更强;SeGUP与环丙沙星(CI)联合表现为协同,GUP与CI表现为相加;SeGUP能够极显著降低PM感染小鼠死亡率(P<0.01)。与对照组相比,SeGUP、GUP、CI可极显著升高培养液中碱性磷酸酶(AKP)、β-半乳糖苷酶(β-gal)的活性和蛋白含量(P<0.01),极显著降低菌体DNA含量,抑制生物膜形成,降低过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性(P<0.01)。结果表明,SeGUP体内外抑菌效果以及抑菌机制能力均优于GUP。

不同制备工艺对薯蓣皂苷元固体分散体体外溶出、物相特征、体内药动学的影响

目的 考察不同制备工艺对薯蓣皂苷元固体分散体体外溶出、物相特征、体内药动学的影响。方法 以Soluplus为载体,分别采用共沉淀法、微波淬冷法、冷冻干燥法制备固体分散体,测定溶解度、溶出度,采用差示扫描量热分析、粉末X射线衍射、扫描电镜、傅里叶红外光谱研究物相特征,拟合水接触角曲线。30只大鼠随机分为5组,分别灌胃给予原料药、物理混合物、3种制备工艺所得固体分散体的0.5%CMC-Na混悬液(100 mg/kg),于0、0.083、0.25、0.5、0.75、1、2、3、4、6、8、12、24、36、48、72 h采血,UPLC-MS/MS法测定薯蓣皂苷元血药浓度,计算主要药动学参数。结果 固体分散体溶解度、120 min内累积溶出度高于原料药,以共沉淀法所得更明显。薯蓣皂苷元以无定形态存在于共沉淀法、微波淬冷法所得固体分散体中,以晶体存在于冷冻干燥法所得固体分散体中。薯蓣皂苷元与Soluplus之间存在相互作用。固体分散体水接触角小于原料药、物理混合物,共沉淀法所得固体分散体的水接触角最小,润湿性最强。共沉淀法、微波淬冷法所得固体分散体的溶解机制为载体控制,冷冻干燥法所得固体分散体的溶解机制为药物控制。与原料药比较,共沉淀法、微波淬冷法所得固体分散体AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)、C_(max)升高(P<0.05,P<0.01),CL_(z/F)降低(P<0.01),相对生物利用度分别为576.69%、447.80%。结论 共沉淀法更适合制备薯蓣皂苷元固体分散体。

关节腔注射用雷公藤甲素微球组织分布与代谢

目的考察关节腔注射用雷公藤甲素微球(TPL-MS)健康大鼠组织分布与体内外代谢行为。方法建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法,测定不同时间点TPL-MS在大鼠心、肝、脾、肺、肾、血浆、关节的分布;以雷公藤甲素溶液(TPL-IN)为参比,通过测定TPL-MS在大鼠肝匀浆和肝微粒体酶中代谢后的剩余量,计算不同时间点雷公藤甲素代谢百分比;对健康大鼠进行关节腔给药,采用高分辨质谱分析TPL-MS在大鼠肝脏、胆汁、尿液和粪便中的代谢物种类和代谢速度。结果给药后30 min,TPL-IN在肝匀浆和肝微粒体中分别下降50.32%、49.47%,TPL-MS分别下降47.62%、46.36%;体内外共观察到4种代谢物,两种制剂体内代谢途径和代谢物种类相似,TPL-IN主要代谢时间集中在给药后8 h,TPL-MS可在给药后0~24 h持续检出代谢物;TPL-MS给药后第3天在关节组织内达到最高浓度,维持时长接近2周。结论2种制剂体外代谢规律基本一致,体内代谢途径和代谢物种类一致。与TPL-IN相比,TPL-MS的组织分布和代谢速度发生明显改变,关节滞留时间延长,体内代谢过程延缓。

金莲清热泡腾片抗流感病毒体内外药效实验及作用机制研究

目的研究金莲清热泡腾片体内外抗流感病毒的药效学及作用机制。方法进行体外实验考察金莲清热泡腾片对甲1型流感病毒株(NYMCX-179A)、甲3型流感病毒株(NYMCX-327)和乙型流感病毒株(B/Phuket/3073/2013)的作用,采用细胞病变效应(CPE)法检测高、中、低3个浓度下药物有效浓度(EC_(50)),以及在细胞病毒感染后的不同时间点药物的作用情况及病毒滴度(TCID_(50))。进行体内实验考察金莲清热泡腾片对甲1型流感病毒(鸡胚扩增)的作用,计算小鼠存活率、生存时间;观察肺组织切片;CPE法、四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法、血球凝集(HA)法测定其TCID_(50)。蛋白免疫印迹技术(WB)检测肺组织中H1N1病毒血凝素(HA)蛋白,探讨抗病毒机制。结果在体外实验中,预防模式用药和治疗模式用药的金莲清热泡腾片高、中、低3个浓度均能明显抑制甲1型流感病毒10 TCID_(50)、甲3型流感病毒10 TCID_(50)、乙型流感病毒株100 TCID_(50)引起的细胞病变,其中金莲清热泡腾片高浓度组效果优于中、低浓度;细胞感染甲1型流感病毒后,0、2、4、6、8、10、12 h给药(最大有效浓度为5 mg/ml),显示金莲清热泡腾片均可在流感病毒复制的1个周期内有效抑制病毒的复制,子代病毒产量显著降低;体内抗甲1型流感病毒实验结果显示,金莲清热泡腾片高、中、低浓度组在治疗初期就有抗H1N1病毒的作用,在第4天后作用更明显,金莲清热泡腾片高浓度组第6天肺内病毒活性基本抑制,肺组织病理损伤基本恢复。WB实验表明该药可抑制H1N1病毒在肺组织中的HA蛋白表达。结论金莲清热泡腾片具有显著的抗流感病毒作用,可用于治疗因病毒引起的流感或上呼吸道疾病。

基于网络药理学及实验验证分析止得咳颗粒治疗咳嗽的作用机制

目的基于网络药理学预测止得咳颗粒治疗咳嗽的作用机制,并对其进行体内外实验验证。方法通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)与相关文献获取止得咳颗粒的活性成分及对应靶点;利用人类基因数据库(GeneCards)和比较毒物遗传学数据库(CTD)搜索咳嗽相关靶点;利用STRING数据库和Cytoscape软件构建止得咳颗粒与咳嗽交集靶点的蛋白质互作网络(PPI)网络;利用Cytoscape软件构建止得咳颗粒的“成分-靶点”网络和“成分-靶点-信号通路”网络;通过DAVID数据库对交集靶点进行通路注释和分析;运用SYBYL-X 2.0和Discovery Studio软件对止得咳颗粒排名靠前的活性成分和关键靶点进行分子对接,验证其生物活性;验证实验通过构建LPS致RAW264.7细胞炎症模型,CCK8法检测细胞增殖抑制率,酶联免疫吸附测定法(ELISA)和蛋白质印迹法(Western blot)检测炎症因子及相关蛋白表达,以及建立小鼠棉球肉芽肿模型,ELISA法检测棉球肉芽肿小鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达情况。结果研究共筛选出止得咳颗粒的活性成分59个,关键靶点11个,包括白细胞介素-6(IL-6)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)等靶点;功能分析和信号通路分析结果显示,止得咳颗粒主要涉及一氧化氮生物合成过程的正调控、氧化还原过程等生物过程,通过调节肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、百日咳信号通路、核因子κB(NF-κB)信号通路等信号通路产生作用。分子对接结果显示,鸢尾甲黄素A和PTGS2、异鼠李素和EGFR、柚皮素和MAPK3有比较高的结合活性。实验验证结果表明,止得咳颗粒浓度为12.5μg·mL^(-1)、25μg·mL^(-1)、50μg·mL^(-1)时对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)没有毒性,不同浓度的止得咳颗粒可降低脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6的释放,对环氧化酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)蛋白的表达也有抑制作用;止得咳颗粒能够减轻小鼠棉球肉芽肿的增生,降低小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的表达。结论本研究创新性的采用网络药理学方法结合实验验证初步探究止得咳颗粒治疗咳嗽的作用及作用机制,为后续深入研究其具体机制提供了理论基础。

肝素涂层插管生物相容性评价

对肝素涂层插管和未涂层插管设计了抗凝血、血栓形成观察以及溶血、细胞毒性、炎性和免疫反应等多种试验,从多角度综合对肝素涂层插管材料进行生物相容性评价。通过活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原降解产物(FIB)、凝血酶时间(TT)、血小板活化因子、纤维蛋白吸附等试验,测定样品的体外抗凝血性,然后通过半体内血栓形成试验,模拟插管在动物体内的使用环境和过程,观察样品引起血栓形成的状况。同时,通过溶血试验和细胞毒性试验以及炎症反应、补体激活、免疫球蛋白等检测,进一步对样品进行血液相容性评价。结果显示,肝素涂层实验组APTT和TT得到有效延长,而其他体外抗凝指标未见显著变化;在动物半体内模型试验和检测中,肝素涂层实验组6 h血栓形成的各项指标均低于未涂层对照组,表明肝素涂层通过抑制内源性凝血途径达到了预期的抗凝效果;而溶血率、细胞毒性、炎症反应、补体激活、免疫球蛋白等方面的试验结果与未涂层对照组无差异,表明肝素涂层对材料的血液相容性无不良影响。结果表明,肝素涂层显著提高了动静脉插管的体内外抗凝血性,具有良好的生物相容性,可提高临床应用的安全性。